酒精对大鼠生殖细胞损伤的研究

酒精对大鼠生殖细胞损伤的研究

一、酒精对大鼠生殖细胞损伤的研究(论文文献综述)

张继伟[1](2021)在《金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)临床观察及机制研究》文中研究指明背景:全球约有7240万人受生育问题的困扰,特发性弱精子症占24%~30%。目前现代医学治疗特发性弱精子症存在一定局限性,缺乏针对病因的治疗,而中医药在治疗特发性弱精子症方面有一定优势。金龟毓麟方为中国中医科学院西苑医院男科经验方,具补肾填精,疏肝通络功效,对特发性弱精子症(肾虚肝郁型)具有一定疗效,但未对其有效性与安全性进行系统评价,其作用机制亦尚未明确。故设计本课题以验证其有效性与安全性及可能作用机制。本研究分为以下3个部分:研究1金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性与安全性临床研究目的:评价中药复方金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性与安全性。方法:本研究为随机、对照试验,共纳入患者124例,均于2019年12月-2020男12月就诊于中国中医科学院西苑医院男科门诊,均符合特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的纳排标准。采用SAS软件产生随机编码,按1:1随机分为试验组(62例)和对照组(62例)。试验组给予金龟毓麟方(制龟甲15g、郁金12g、柴胡12g,熟地黄15g、鹿角胶6g、菟丝子10g、覆盆子10g、生麦芽12g、鸡血藤10g、炙甘草6g)。服用方法:每日2次,一次1袋。对照组给予左卡尼汀口服液(国药准字:H19990372),服用方法:每次10ml,每日3次。两组用药12周,随访4周。主要疗效指标包括前向运动精子(PR)、精子总活力(PR+NP);次要疗效指标包括中医证候评分、精子浓度、精液量、受孕率。安全性指标包括血常规、尿常规、肝肾功能(ALT、AST、BUN、CREA)、心电图,入组前和观察完成后各检查一次。结果:本研究共入组患者124例,共脱落11例,其中试验组脱落4例,对照组脱落7例,总脱落率为8.87%。本研究有效性分析只针对符合方案集(PPS)数据进行统计分析。1.主要疗效指标:(1)PR级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后PR级精子活力改变无统计学差异(P>0.05):治疗8周、12周后可提高PR级精子活力(P<0.05)。与治疗前比较,试验组在治疗4周、8周、12周后均可显着提高PR级精子活力(P<0.05)。②同时期组间比较:与对照组比较,试验组治疗4周后在提高PR级精子活力方面无统计学差异(P>0.05);治疗8周、12周后,在提高PR级精子活力方面优于对照组(P<0.05)。(2)PR+NP级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后在提高PR+NP级精子方面无统计学差异(P>0.05);治疗8周、12周后可提高PR+NP级精子活力(P<0.05)。与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后均可提高PR+NP级精子活力(P<0.05)。②同时期组间比较:与对照组比较,治疗4周后试验组在提高PR+NP级精子方面无统计学差异(P>0.05);治疗8周、12周后试验组在提高PR+NP级精子方面均优于对照组(P<0.05)。2.次要疗效指标:(1)中医证候评分:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周、8周、12周后,在降低中医证候评分方面均无统计学差异(P>0.05);与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后可显着降低中医证候评分(P<0.05)。②同时期组间比较:试验组治疗4周、8周、12周后在降低中医证候评分方面均优于对照组(P<0.05)。(2)精液量:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精液量方面均无统计学差异(P>0.05);②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精液量方面无统计学差异(P>0.05)。(3)精子浓度:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精子浓度方面均无统计学差异(P>0.05);②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精子浓度方面无统计学差异(P>0.05)。(4)受孕率:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在受孕率方面均无统计学差异(P>0.05);②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在受孕率方面无统计学差异(P>0.05)。3.安全性评价:本研究共发生7例轻度不良事件,其中试验组发生4例,对照组3例,以上不良事件均为轻度,不适症状在给予指导服用方法后自行缓解,未见不良反应。两组血常规、尿常规、肝肾功能(ALT、AST、BUN、CREA)、心电图均未见明显异常。结论:金龟毓麟方在提高特发性弱精子症PR级和PR+NP级精子活力及降低中医证候评分方面均优于左卡尼汀口服液,且未见明显不良反应,表明金龟毓麟方在治疗肾虚肝郁型特发性弱精子症方面安全有效。研究2金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型大鼠的药效学研究目的:观察金龟毓麟方对奥硝唑(Omidazole,ORN)诱导的弱精子症模型大鼠精液质量、睾丸和附睾重量及病理形态、性激素、肝肾功能的影响。方法:将60只雄性SPF级SD大鼠进行编号,采用随机数字表法将其随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组(低剂量组、中剂量组、高剂量组)、左卡尼汀组每组各10只。空白组给予1mL/100g 0.5%的CMC-Na溶液;模型组;400mg/(kg·d)ORN;金龟毓麟方低剂量组:4.9g 生药/kg·d+400 mg/(kg.d)ORN;金龟毓麟方中剂量组:9.7g生药/kg·d+400mg/(kg·d)ORN;金龟毓麟方高剂量组:19.4g 生药/kg.d+400mg/(kg.d)ORN;左卡尼汀组 100mg/(kg·d)+400mg/(kg·d)ORN。灌胃时间:实验组上午给予400mg/(kg.d)ORN,下午给予金龟毓麟方浓缩液,灌胃28天。末次给药断食24小时后,腹腔麻醉称体重,取睾丸及附睾称重,计算附睾、睾丸系数。左侧附睾尾部制备附睾匀浆,温浴评估精子活力。大鼠右侧附睾、睾丸固定染色。腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附法及生化分析仪分别测定性激素(FSH、LH、T)、肝肾功(ALT、AST、UREA、BUN、CREA)。结果:1.大鼠一般情况:空白组大鼠饮食无明显改变,体毛浓密光泽,活动度良好,精神状态可,大小便无明显异常。模型组大鼠饮食减少、体毛疏松,光泽度下降,活动度方面部分可见少动、运动迟缓,精神倦怠、萎靡或见易怒,大便稀溏,小便色黄。左卡尼汀组大鼠饮食增加,精神状态较好,活动灵敏,小便颜色正常,大便偶有偏稀。金龟毓麟方组各大鼠饮食较模型组食量增加,体毛疏松但有光泽、活动度较模型组运动量增加,精神状态较模型组灵敏、部分可见易怒现象,大便质地好转,小便颜色恢复正常。中、高剂量组精神状态和饮食量较低剂量组改善明显。2.金龟毓麟方对大鼠精子质量的影响:(1)大鼠精子活力:与模型组比较,中剂量组、高剂量组、左卡尼汀组在提高PR级精子、PR+NP级精子活力方面均有统计学差异(P<0.05)。高剂量组在提高PR+NP级精子方面优于左卡尼汀组(P<0.05)。(2)大鼠精子浓度:各组与模型组比较大鼠精子浓度改变均无统计学差异(P>0.05)。3.大鼠睾丸、附睾重量及脏器指数变化:(1)大鼠睾丸变化情况:各组与模型组比较大鼠睾丸重量、睾丸系数改变均无统计学差异(P>0.05)。(2)大鼠附睾变化情况:与空白组比较,模型组附睾重量、附睾脏器系数下降(P<0.05)。与模型组比较,金龟毓麟方高剂量组可增加附睾重量与附睾系数(P<0.05)。4.金龟毓麟方对大鼠肝肾功的影响:各组与模型组比较大鼠肝肾功能(ALT、AST、UREA、BUN、CREA)改变均无统计学差异(P>0.05)。结论:1.400 mg/(kg·d)ORN灌胃28天,对大鼠体重、睾丸重量及脏器指数、精子浓度无明显影响,但可引起附睾损伤,造成大鼠精子活力下降。2.金龟毓麟方可改善ORN诱导的弱精子症大鼠附睾损伤,提高大鼠精子活力,对大鼠肝肾功能(ALT、AST、UREA、BUN、CREA)及性激素(FSH、LH、T)无明显影响,初步验证了金龟毓麟方治疗弱精子症的有效性与安全性。研究3 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制目的:从Pink1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬角度探讨金龟毓麟方治疗弱精子症的机制,进一步揭示ORN所致弱精子症大鼠的机制以及金龟毓麟方的保护作用。方法:将40只大鼠随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组(低剂量组、高剂量组),灌胃取材等同研究2。精子氧化应激检测采用SOD、MDA及GSH-Px活性检测试剂盒检测;精子线粒体功能检测采用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒与流式细胞仪检测;采用ATP含量检测试剂盒检测精子线粒体ATP含量。精子线粒体自噬相关指标检测:采用Real-time PCR和Western Blot检测精子Pink1、Parkin、p62 和 LC3 Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1 mRNA 及蛋白表达水平。结果:1.精子氧化应激指标变化:与空白组比较,模型组大鼠附睾精子中MDA含量升高(P<0.01),SOD与GSH-Px含量降低(P<0.01)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组大鼠附睾精子中MDA含量均降低(P<0.05),SOD与 GSH-Px 含量均升高(P<0.05,P<0.01)。2.大鼠精子线粒体功能指标变化:(1)线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP):与空白组比较,模型组精子线粒体MMP下降明显,精子早期凋亡率增加(P<0.01,P<0.001);与模型组比较,金龟毓麟方各组可升高MMP,降低精子早期凋亡率(P<0.05,P<0.01)。(2)线粒体ATP:与空白组比较,模型组精子线粒体ATP含量显着降低(P<0.001)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组提高精子线粒体ATP方面无统计学差异(P>0.05);高剂量组可提高精子线粒体ATP含量(P<0.01)。3.线粒体自噬相关指标变化:(1)与空白组比较,模型组大鼠Pink1 mRNA及蛋白表达增加(P<0.01)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组可降低Pink1mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。(2)与空白组比较,模型组大鼠Parkin mRNA及蛋白表达均增加(P<0.01)。与模型组比较,金龟毓麟方低、高剂量组可降低Parkin mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。(3)与空白组比较,模型组大鼠p62 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01,P<0.001)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组可增加p62 mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。(4)与空白组比较,模型组大鼠LC3 mRNA及LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白表达增加(P<0.001)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组LC3 mRNA及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低(P<0.05,P<0.001)。(5)与空白组比较,模型组大鼠TOM20 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组TOM20 mRNA表达增加(P<0.05,P<0.01);低剂量组TOM20蛋白表达增高(P<0.05)。(6)与空白组比较,模型组大鼠Beclin 1mRNA及蛋白表达增加(P<0.05,P<0.001)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组BeclinlmRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.001)。结论:1.400mg/(kg·d)ORN诱导的弱精子症大鼠可能通过氧化应激损伤,引起线粒体 MMP 与 ATP 下降,导致 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、BeclinlmRNA 及蛋白表达上调,p62、TOM20mRNA及蛋白表达下调,提示ORN通过氧化应激损伤引起线粒体功能障碍,导致精子线粒体自噬激活。2.金龟毓麟方可减轻弱精子症大鼠精子氧化应激损伤,提高精子线粒体MMP 与 ATP 水平,下调 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1mRNA 及蛋白表达,上调p62、TOM20mRNA及蛋白表达,提示金龟毓麟方通过抑制Pink1/Parkin线粒体自噬通路改善精子活力。

南博[2](2021)在《大蒜素调控氧化应激及内质网应激改善膳食丙烯酰胺肝毒性机制研究》文中进行了进一步梳理本研究受国家自然科学基金面上项目(31571939)资助。丙烯酰胺(Acrylamide,AA)作为食品热加工过程中美拉德反应的重要产物,具有生殖毒性、神经毒性、肝毒性和潜在的致癌性等,因此通过膳食摄入AA的安全性问题引起广泛关注。研究发现,AA毒性的发生与氧化应激(Oxidative stress,OS)和内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)密切相关,但其潜在机制仍处于探究阶段。OS和ERS可参与调控NLRP3(NOD-like receptor protein-3,NLRP3)炎性小体的激活,而MAPK(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)和NF-κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路在调节炎症反应的过程中也发挥了至关重要的作用。探究MAPK和NF-κB信号通路参与AA诱导OS和ERS的过程不仅可以对AA的毒性机制进行补充,也可以进一步完善OS和ERS诱导生命过程紊乱的潜在机制。生物活性成分在调节机体炎症反应上一直受到广泛关注,大蒜素(Allicin)作为大蒜的主要活性物质,具有抗氧化、抑菌及抗炎等生理功能,在AA毒性干预上表现了突出的作用。因此,本研究旨在探究AA诱导OS、ERS和MAPK信号通路激活与NLRP3炎性小体激活、炎症反应之间的相互关系,并在此基础上,通过Allicin干预处理,进一步阐明Allicin保护AA所致机体损伤的潜在机制。主要研究内容与结果如下:(1)利用大鼠肝脏巨噬细胞Kupffer细胞和人肝癌细胞HepG2细胞构建细胞模型,探讨AA对Kupffer和HepG2细胞NLRP3炎性小体激活的影响。将Kupffer和HepG2细胞进行1m M AA诱导处理,首先,通过对超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)酶活性和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)释放水平检测,以及ERS标志性蛋白-葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulated protein 78 k D,GRP78)和C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)的检测,确定AA可以诱导细胞OS和ERS。其次,通过基因和蛋白水平的检测,发现AA可以激活MAPK和NF-κB信号通路以及NLRP3炎性小体。此外,以ELISA酶联免疫法检测细胞炎症因子白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)释放水平,也补充说明了AA促进Kupffer和HepG2细胞炎症因子的释放,诱发炎症反应。在此基础上,分别利用ROS清除剂、内质网应激抑制剂以及MAPK选择性抑制剂预处理Kupffer和HepG2细胞,进一步明确OS、ERS和MAPK信号通路三者在参与调节AA诱导Kupffer和HepG2细胞NLRP3炎性小体的激活过程中的主要作用。研究发现,AA通过OS/ERS-MAPK-NLRP3信号通路激活NLRP3炎性小体,诱导炎症反应。(2)利用Allicin对AA的毒性进行干预,研究Allicin对AA诱导的Kupffer和HepG2细胞NLRP3炎性小体激活及炎症反应的影响及调控机制。以3.75、7.5和15μM Allicin干预处理1 m M AA诱导的Kupffer和HepG2细胞,首先,对SOD、GSH-Px酶活性和ROS释放水平以及GRP78、CHOP的mRNA和蛋白表达的检测证明Allicin缓解AA诱导的Kupffer和HepG2细胞OS和ERS。其次,对未折叠蛋白反应(Unfolded protein response,UPR)分支的需肌醇酶1(Inositol-requiring enzyme 1,IRE1)通路、MAPK和NF-κB信号通路节点蛋白进行检测,发现Allicin抑制IRE1α、凋亡信号调节激酶1(Apoptosis signal regulating kinase-1,ASK1)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、丝/苏氨酸蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)、p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen activited protein kinase,p38 MAPK)和核转录因子p65(p65 NF-k B)蛋白磷酸化及肿瘤坏死因子受体相关因子2(TNF receptor-associated factor 2,TRAF2)和X盒结合蛋白1(X-box binding protein1,XBP1)蛋白的表达水平,从而减少信号通路的激活,抑制AA诱导的NLRP3炎性小体的激活。研究发现,Allicin通过OS/ERS-MAPK-NLRP3信号通路抑制AA诱导的Kupffer和HepG2细胞NLRP3炎性小体激活,减轻AA诱发的毒性作用。(3)建立AA染毒和大蒜素干预的SD(Sprague Dawley,SD)大鼠模型,通过体内实验深入研究AA诱导NLRP3炎性小体激活的潜在机制及Allicin对AA诱导炎症反应的调控影响。体外实验初步明确了AA诱导NLRP3炎性小体激活及Allicin缓解AA诱导炎症反应的潜在机制。因此,Allicin缓解AA对SD大鼠肝脏和脾脏损伤的研究,可对其潜在机制进行进一步明确和完善。分别构建SD大鼠AA(30 mg/kg)染毒模型和Allicin(25 mg/kg和50 mg/kg)保护模型,肝脏与脾脏形态学观察证明SD大鼠AA染毒模型构建成功。对OS指标、ERS标志蛋白和炎症指标进行测定,发现SOD、ROS、GRP78、CHOP以及IL-1β和IL-18等水平与体外实验结果一致。此外,MAPK和NF-κB信号通路相关蛋白表达水平的检测结果表明,AA通过激活MAPK和NF-κB信号通路,诱导大鼠肝脏和脾脏NLRP3炎性小体的激活,进一步产生炎症反应,而Allicin对这一过程具有潜在的调节作用。综上所述,AA通过诱导OS和ERS激活MAPK信号通路,而MAPK信号通路的激活是NLRP3炎性小体激活的关键,NLRP3炎性小体的激活会进一步引发炎症反应,Allicin则可以通过调控OS和ERS调节MAPK信号通路的激活,抑制机体炎症的产生,从而抑制AA的毒性作用。因此,Allicin通过OS/ERS-MAPK-NLRP3信号通路抑制AA诱导的NLRP3炎性小体激活,缓解AA的毒性作用。

范小瑞[3](2021)在《猪隐睾睾丸精子发生障碍的分子机制研究》文中认为目的:自发性单侧隐睾公猪是一侧睾丸位于腹部或腹股沟管,这使得睾丸接近或位于体温环境。不同品种的仔猪中,单侧隐睾的发病率为2%。猪隐睾症主要关注的问题是,腹部异常高温导致隐睾睾丸正常精子发生中断。生殖细胞的建立和维持是保证一个物种生存的关键,受多种因素的影响,其中温度是最主要的因素。雄性生殖细胞(精子)是由精子发生的复杂过程产生的。精子发生是在低于核心体温2-8°C的阴囊温度下进行。睾丸暴露在体温环境导致精子发生阻滞,但具体的分子机制尚不清楚。自发性单侧隐睾是研究体温对精子发生影响的良好动物模型。方法:本研究以断奶前仔猪(20d,15Kg左右,4头)、隐睾和对侧阴囊公猪睾丸(7-9月龄,140-150Kg,4头)为研究对象,手术摘取两侧睾丸,部分置于液氮,用于提取总mRNA和蛋白,以及进行RNA-seq和i TARQ检测;部分置于Bouin氏固定液中,用于TUNEL、HE染色和免疫组织化学分析。雄性健康SD大鼠(30d,90~100g,6只),手术诱导单侧隐睾,隐睾30d,3只手术摘取两侧睾丸,置于Bouin氏固定液中,用于免疫组织化学分析;3只用生物素示踪法检测两侧睾丸血睾屏障通透性变化。结果:1.自发单侧隐睾公猪睾丸支持细胞和生殖细胞数量的变化HE染色结果显示,与对侧阴囊睾丸相比,隐睾睾丸只含有支持细胞和少量精原细胞,未见减数分裂后的生殖细胞。形态计量学研究结果显示,与对侧阴囊睾丸相比,隐睾睾丸生殖细胞总数显着减少,支持细胞总数无显着变化;较断奶前仔猪睾丸,隐睾睾丸生殖细胞和支持细胞总数均显着增加。2.自发单侧隐睾对公猪睾丸增殖和凋亡相关蛋白表达与定位的影响TUNEL结果显示,精原细胞凋亡信号明显减少。qRT-PCR和Western Blot结果显示,隐睾组中PCNA和Bax的蛋白和mRNA水平显着降低;细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达升高。免疫组织化学结果显示,PCNA表达于精原细胞的细胞核。隐睾导致Bax在精原细胞的重新分配,从细胞质转移至细胞核表达。Bcl-2在各实验组中优先表达于近管腔部位生殖细胞的细胞质和细胞核。与对侧阴囊组相比,隐睾组PCNA阳性细胞和TUNEL阳性细胞减少。3.自发单侧隐睾对公猪睾丸自噬相关蛋白表达与定位的影响qRT-PCR和Western Blot结果显示,隐睾组中LC3和Beclin1的蛋白和mRNA水平显着降低;p62的表达显着升高。免疫组织化学结果显示,LC3表达于精原细胞的细胞质。与对侧阴囊组相比,隐睾组LC3阳性细胞减少。4.自发单侧隐睾对公猪睾丸血睾屏障紧密连接分子表达与定位的影响qRT-PCR和Western Blot结果显示,隐睾组中Claudin-11的蛋白和mRNA水平显着升高;Occludin和ZO-1蛋白和mRNA水平显着降低。免疫组织化学结果显示,隐睾导致Claudin-11、Occludin和ZO-1的异位表达:由细胞膜转移至细胞质表达。5.单侧隐睾对大鼠睾丸血睾屏障通透性的影响免疫组织化学结果显示,隐睾导致Claudin-11和ZO-1的异位表达:由细胞膜转移至细胞质表达。生物素示踪结果显示,生物素进入隐睾睾丸管腔。6.转录组学分析自发单侧隐睾对公猪睾丸基因表达的影响RNA-seq结果显示,断奶前仔猪和隐睾睾丸组织比较,共有6901个差异表达基因,其中4603个上调,2298个下调。隐睾和对侧阴囊睾丸组织比较,共有13873个差异基因,其中8216个上调,5657个下调。GO富集分析显示,隐睾睾丸和断奶前仔猪睾丸相比,较多差异基因的功能与细胞黏附、细胞发展和精子发生等有关;隐睾和对侧阴囊睾丸组相比,较多差异基因的功能与精子发生、细胞分化和细胞迁移等有关。KEGG Pathway富集分析显示,断奶前仔猪与隐睾睾丸相比,差异基因较多富集于代谢、ECM受体相互作用和细胞黏附等信号通路。隐睾睾丸与对侧阴囊睾丸相比,差异基因较多富集于物质代谢、细胞黏附分子(CAMs)和信号转导相关通路(凋亡、吞噬、Ras和MAPK通路)等,且CAMs通路相关基因大多上调表达,包括CLDN11(Claudin-11)。下调基因中Nectin-3在细胞黏附、迁移和极化中发挥作用。7.蛋白质组学分析自发单侧隐睾对公猪睾丸蛋白表达的影响结果显示,隐睾组和断奶前仔猪相比,1459个差异蛋白:773个上调,686个下调;隐睾组和对侧阴囊组相比,1424个差异蛋白:656个上调,768个下调。GO富集分析显示,隐睾组和断奶前仔猪相比,较多差异蛋白的功能与细胞黏附、代谢和胞外基质等有关;隐睾组和对侧阴囊组相比,较多差异蛋白的功能与精子发生、繁殖和能量代谢有关。KEGG Pathway富集分析显示,隐睾组和断奶前仔猪相比,差异蛋白主要富集在黏着斑信号、DNA复制和视黄醇代谢通路。隐睾组和对侧阴囊组相比,差异蛋白主要富集在DNA复制、蛋白酶体、缝隙连接和黏着连接通路。SDR5A1和CYP11A等的下调表达,提示睾酮合成和代谢受阻。结论:隐睾导致猪睾丸生殖细胞增殖不足,过度凋亡和自噬;支持细胞结构和功能受损,血睾屏障(BTB)通透性增加,支持细胞供能不足,最终导致猪睾丸生精障碍。

晏斌[4](2020)在《灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究》文中进行了进一步梳理背景:2010年世界卫生组织(World Health Organization,WHO)估计全世界大约有4850万对夫妇(8~12%)患有不孕不育,其患病率因国家和地区而异,男性因素所致生育问题的分布在20%~70%之间,精子数量少、形态异常、运动能力差是与男性因素相关的常见原因。随着世界范围内男性不育症的不断增多,它已成为一个越来越引起临床重视的健康问题。目前西医治疗男性不育症主要方式为药物治疗、手术及辅助生殖技术,但是存在疗效不确定、造成侵入性损害、价格高,或伴随不良反应和其他高风险的问题,使得男性不育症患者寻求其他治疗策略。随着中医药研究的发展,中医药成为男性不育症治疗中重要的方法之一,提供了安全、有效的治疗选择。灵归方为中国中医科学院西苑医院男科经验处方,由仙灵脾、当归、熟地黄、山药等13味药组成,具有补肾、活血的功效,前期临床研究发现灵归方有提高弱精子症患者精子活动率的作用,但其具体作用机制不明,故设计本研究以阐明灵归方改善精子活动率的可能机制。实验分为两部分,第一部分为探索使用奥硝唑(Ornidazole,ORN)制备弱精子症动物模型,观察不同剂量(200,400,800 mg/(kg·d))的ORN对于雄性SD大鼠精子浓度、活动率的影响;第二部分为保护性实验,设置对照组、模型组、灵归方组、左卡尼汀组,综合评价灵归方对弱精子症模型大鼠精液质量、附睾左旋肉碱(L-carnitine,LC)含量、附睾肉碱转运蛋白(Carnitine/organiccation transporter2,OCTN2)的蛋白及mRNA表达水平的影响,并检测灵归方干预后大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px活性以及MDA含量,光学显微镜观察睾丸、附睾组织病理学变化。第一部分:ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究目的:观察不同剂量的ORN灌胃对雄性SD大鼠精液质量的影响,以制备弱精子症模型大鼠。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型1组、模型2组、模型3组各10只,具体给药方法为:模型 1 组:200mg/(kg·d)ORN;模型 2 组:400mg/(kg·d)ORN;模型 3组:800mg/(kg·d)ORN;对照组:1ml/100g0.5%CMC-Na(由于 ORN 水溶性差,故采用CMC-Na溶解后灌胃)。按照1ml/100g体重进行给药,连续灌胃20天,观察大鼠一般情况变化,在末次给药24小时后用5%水合氯酸溶液(0.7ml/100g)进行腹部注射麻醉,水合氯酸溶液使用剂量为按照0.4ml/100g体质量进行计算,大鼠麻醉后,称体重,取睾丸及附睾分别称重,计算睾丸、附睾脏器系数,并取大鼠左侧附睾尾进行精子浓度和活动率(PR+NP级精子百分率)分析。结果:1.在实验进行过程中,由于灌胃操作导致模型3组1只大鼠死亡。对照组一般状态良好,饮食正常,体毛浓密,且有光泽,大小便正常,活动量大,较活跃,存在笼内打斗现象;与对照组比较,模型1组上述各项征象无显着下降,饮食无明显减少,饮水量相当,体毛正常,光泽度稍差,活动量未见减少,存在笼内打斗现象,精神可;模型2组较对照组上述征象有下降,饮食量减少,体毛较稀疏,体毛光泽度不及模型1组,活动量以及打斗现象无明显减少,精神尚可;模型3组较对照组上述指标有显着下降,饮食量减少,体毛稀疏,体毛光泽度明显降低且不及模型2组,活动量少,打斗现象减少,精神差。2.与对照组比较,模型1组大鼠体重,睾丸、附睾重量,以及睾丸、附睾脏器系数变化差异均无统计学意义(P>0.05);模型2组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数有下降趋势,但无统计学差异(P>0.05);模型3组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数均下降,有统计学差异(P<0.05)。3.与对照组比较,模型1组与模型2组精子浓度改变无统计学差异(P>0.05),模型3组精子浓度下降(P<0.01);与对照组比较,模型1组(PR+NP)级精子浓度及精子活动率无统计学改变(P>0.05),模型2组、模型3组(PR+NP)级精子浓度及精子活动率均下降(P<0.01)。结论:1.200 mg/(kg·d)ORN灌胃20天对于大鼠体重,睾丸、附睾重量及脏器系数,精子浓度、(PR+NP)级精子浓度及活动率均无影响。2.400 mg/(kg·d)ORN灌胃20天,对大鼠精子浓度无影响,但可导致(PR+NP)级精子浓度及精子活动率下降,可用于制备弱精子症模型大鼠。3.800 mg/(kg·d)ORN灌胃20天可导致大鼠精子浓度、(PR+NP)级精子浓度及活动率均明显下降,可用于制备少弱精子症模型大鼠。第二部分:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究实验一:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾LC相关通路的影响目的:观察灵归方对ORN诱导弱精子症模型大鼠精液质量、附睾LC含量,附睾OCTN2蛋白及mRNA表达水平的影响,揭示ORN诱导弱精子症模型大鼠附睾能量代谢障碍以及灵归方改善弱精子症大鼠附睾功能的相关机制。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用普通电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型组、左卡尼汀组、灵归方组,每组各10只,具体给药方法为:对照组:1ml/100g 0.5%CMC-Na;模型组:400mg/(kg·d)ORN;左卡尼汀组:LC 100mg/(kg·d)+400mg/(kg·d)ORN;灵归方组:灵归方浓缩液,按 17.5g 生药/kg+400mg/(kg·d)ORN,连续灌胃 20 天,ORN 均为上午 8:00-9:00灌胃,干预药物为下午5:30-6:30灌胃。末次给药24 h后,5%的水合氯醛腹腔麻醉,剪开阴囊,取出实验大鼠右侧附睾,用于进行精子浓度及活动率检测;左侧附睾在(pH 7.2~7.4)0.01mol/LPBS缓冲液配制的4%多聚甲醛固定液中进行固定,用于附睾LC含量、OCTN2蛋白与mRNA表达的检测。其中高效液相色谱法测定附睾中LC含量,免疫印迹法(Western Blotting,WB)检测大鼠附睾OCTN2蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测大鼠附睾OCTN2 mRNA表达。结果:1.与对照组比较,各组精子浓度改变无统计学差异(P>0.05);模型组(PR+NP)级精子浓度及精子活动率下降(P<0.05)。与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组(PR+NP)级精子浓度及精子活动率升高,有统计学差异(P<0.05);灵归方组与左卡尼汀组比较,(PR+NP)级精子浓度及精子活动率差异无统计学意义(P>0.05)。2.与对照组比较,模型组附睾LC含量下降(P<0.05);与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组附睾LC含量升高(P<0.05);且左卡尼汀组附睾LC含量高于灵归方组(P<0.05)。3.与对照组比较,模型组OCTN2蛋白表达下降(P<0.05);与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2蛋白表达升高(P<0.05);灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。4.与对照组比较,模型组OCTN2 mRNA表达下调(P<0.05);与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2 mRNA表达上调(P<0.05);灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.400mg/(kg·d)ORN连续灌胃20天可导致大鼠精子活动率下降,可能与抑制附睾OCTN2蛋白及mRNA表达,引起血浆向附睾LC转运减少,导致附睾LC含量下降有关。2.灵归方能够提高ORN诱导弱精子症模型大鼠(PR+NP)级精子浓度及精子活动率,可能与增加大鼠附睾LC含量有关。3.灵归方可以上调ORN所致弱精子症模型大鼠附睾中OCTN2蛋白及mRNA的表达,从而增加LC从血浆向附睾转运。实验二:灵归方对弱精子症模型大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响目的:观察灵归方对ORN所致弱精子症模型大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px、MDA的影响,进一步揭示ORN造成弱精子症模型大鼠的可能机制以及灵归方的保护作用。方法:分组及灌胃方式同实验一。股动脉取血,酶联免疫吸附试验法测定大鼠血清中FSH、LH、T含量,取右侧附睾组织制备成5%的组织匀浆,将匀浆3000rpm离心10min,取上清进行SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的检测。左侧睾丸、附睾部分置于4%多聚甲醛固定,随后用于观察睾丸、附睾结构组织病理学变化。结果:1.与对照组比较,各组FSH、LH及T水平改变均无统计学差异(P>0.05)。2.与对照组比较,模型组附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高(P<0.05);与模型组比较,左卡尼汀组及灵归方组GSH-Px、SOD活性升高,MDA含量下降,均有统计学差异(P<0.01);灵归方组与左卡尼汀组相比GSH-Px、SOD活性以及MDA含量比较无统计学差异(P>0.05)。3.在显微镜下可见各组大鼠睾丸中各生精小管结构正常,管腔明显,整齐排列,大量精子及精子细胞充满生精小管管腔,形态正常;各级生精细胞结构完整,层次清晰,各级生精细胞分裂活跃,各细胞形态未见明显异常,各组之间的形态学差异并不明显;各组附睾组织形态学改变并不明显,管腔中可见大量的精子,模型组附睾管腔中可见少量脱落细胞成分。结论:1.400mg/(kg·d)ORN连续灌胃20天对雄性SD大鼠血清性激素水平,睾丸、附睾组织形态并无显着影响,但是会引起附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高,可能是导致大鼠精子活动率下降的原因之一。2.灵归方可以增加附睾SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,减少ORN所致弱精子症模型大鼠附睾氧化损伤,维持正常的精子成熟环境。

张石磊[5](2020)在《低剂量持续暴露双酚A对小鼠生殖毒性的影响》文中进行了进一步梳理双酚A(Bisphenol A,BPA)是制造塑料制品和涂层的原料,被认为具有生殖毒性,孕期暴露于BPA可导致母体和后代糖代谢紊乱,激素紊乱和子代死亡等严重后果。本试验主要研究小鼠在整个繁殖周期中口服暴露BPA所引起的子代小鼠生殖器官损伤和生殖相关基因表达的异常及其机制。通过在母鼠孕期和哺乳期以及仔鼠断奶后至性成熟期使小鼠饮水摄入不同浓度的BPA,分析BPA损伤仔鼠生殖发育的机制,并通过对卵巢颗粒细胞和睾丸间质细胞体外培养印证动物试验中BPA引起的基因表达差异。1.BPA对孕鼠生殖毒性研究:本研究给予孕鼠BPA 口服剂量为50mg·kg-1·d-1。分别于孕3 d、6 d、9 d、12 d、15 d、18 d处死孕鼠采样。试验统计了母鼠怀孕不同阶段胚胎个数、卵巢和子宫在不同妊娠阶段的细胞凋亡和卵巢、子宫中雌激素受体 α(estrogen receptor α,ERα)、雌激素受体 β(estrogen receptor β,ERβ)。结果显示,暴露BPA后孕鼠血清BPA含量显着升高(P<0.05)。另一方面,由于BPA的雌激素特性,BPA暴露导致孕鼠的生殖器官中ER的表达发生变化。卵巢ERα在孕15 d后显着升高(P<0.05),ERβ的表达量在整个孕期均显着升高(P<0.05);子宫ERβ在孕6 d之后显着升高(P<0.05)。孕3~9 d时卵巢细胞凋亡显着增多(P<0.05);孕3 d时子宫细胞凋亡显着降低(P<0.05)。孕鼠在孕18 d时子宫胚胎数目显着减少(P<0.05)。本研究结果表明,低剂量BPA暴露影响子宫和卵巢ER的表达,影响子宫内胚胎正常生长,致孕鼠子宫胚胎数目显着减少。2.BPA对子代雄鼠生殖毒性研究:试验统计了 21日龄、45日龄仔鼠生殖器官病理损伤、细胞凋亡和睾丸中雄激素受体(androgen receptor,AR)、联会复合体蛋白3(synaptic complex protein 3,Scp3)的表达变化,检测了 45 日龄仔鼠的精子质量。同时对21日龄、45日龄仔鼠睾丸进行转录组学测序,观测仔鼠卵巢发育等情况。试验结果证实,低于50 mg·kg-1·d-1的BPA暴露引起仔鼠睾丸发育异常。BPA暴露使21日龄和45日龄子代雄鼠血清和睾丸中BPA含量均显着升高(P<0.05),睾丸出现一定的病理组织学变化,睾丸生殖细胞凋亡增加(P<0.05),AR表达减少(P<0.05)。另外低剂量的BPA引起45日龄子代小鼠睾丸精子质量下降(P<0.05),与生精细胞分化相关的Scp3表达减少(P<0.05),进一步证实了 BPA对睾丸发育和精子生成的不良影响。转录组测序显示BPA影响了睾丸剪切体基因表达,其中21日龄仔鼠睾丸Snrnp40上调、Hnrnpu下调,45日龄仔鼠睾丸Snrpc和Hnrnpu表达下调。Hnrnpu在mRNA前体与剪切体结合时起到连接作用,其下调导致mRNA转录后修饰第一步受阻,睾丸间质细胞的体外培养结果印证了 BPA对Hnrnpu的影响。3.BPA对子代雌鼠生殖毒性研究:试验统计了 21日龄、45日龄仔鼠生殖器官病理损伤、细胞凋亡和卵巢、子宫中ERα、ERβ的表达变化,同时对21日龄、45日龄仔鼠卵巢进行转录组学测序,以研究BPA对仔鼠生殖器官发育成熟情况及生殖功能的变化。研究结果表明低于50 mg·kg-1·d-1的BPA暴露即引起仔鼠卵巢发育异常。21日龄和45日龄子代雌鼠血清和卵巢中BPA均显着升高(P<0.05),21日龄仔鼠卵巢器官指数增大(P<0.05)、卵泡颗粒细胞层出现破损。但45日龄仔鼠卵巢器官指数均无显着变化和病理损伤。BPA可引起21日龄和45日龄小鼠卵巢颗粒细胞凋亡增加(P<0.05),ERα和ERβ表达紊乱。转录组测序显示BPA影响了卵巢核糖体基因表达,其中21日龄仔鼠卵巢Rpl3、Rpl21、Rpsa显着下调、Rps2、Rps28、Rpl26、Rpl32、Rpl10a显着上调;45日龄仔鼠卵巢Rpl21、Rpsa显着下调,Rpl3、Rps2、Rpl7a、Rps26、Rpl26显着上调。仔鼠卵巢发育异常可能与核糖体功能改变有关。卵巢颗粒细胞的体外培养结果印证了 BPA对Rps2的影响。综上所述,BPA低剂量长时期暴露引起孕鼠子宫内胚胎发育中止,子代小鼠睾丸、卵巢发育异常。子代雄鼠生殖功能受到损害。对于子代雄鼠睾丸的发育而言,BPA阻断了剪切体的功能,可能Hnrnpu是关键基因;对于子代雌鼠而言,BPA影响了核糖体的功能,Rps2可能是关键基因。

黄定基[6](2020)在《WIFI辐射对大鼠坐骨经损伤修复的影响》文中指出研究背景与目的随着科技进步和社会发展,无线网络已深入到每一个人的生活之中,其中WIFI由于其上网快速便捷并且免费,深受大众的喜爱,但其对人体及其他生物的影响一直没有一个明确的研究结果。我国对电磁辐射规定了分级标准,一级标准(安全标准,对人体没有任何影响),二级标准(中间区,对人体可带来有害影响)。国外已有报道,即使在规定的安全范围之内,电磁辐射对生物体也有不良影响。荷兰科学家通过研究发现,WIFI辐射可能是造成树木枯萎的罪魁祸首。同时研究人员还发现WIFI辐射会减慢玉米棒的生长。但清华大学曾经做过“WIFI情况下的种子发芽实验”,研究结果发现WIFI辐射对植物的生长没有危害,不影响种子的发芽。而且据现有研究和相关国际标准表明,WIFI辐射对人体健康无明显影响。目前国内外学者刚开始对此类情况进行研究,但电磁辐射对生物的某些特定的生理活动,如神经损伤的修复有何影响及其影响机制,国内外均未见报道。本课题将对大鼠坐骨神经损伤修复是否受WIFI辐射的影响进行实验研究,如有影响将进一步研究其影响机制和预防方法。从而为下一步研究WIFI辐射是否影响人类神经损伤修复以及如何减少或消除奠定基础。方法将72只雄性SD大鼠随机分为实验组、对照组和假手术组,每组24只。采取腹腔注射麻醉,剂量为1%戊巴比妥钠(5mg/kg)。将大鼠固定在大鼠固定架上,常规消毒铺巾,取右下肢后外侧切口,长约6~8mm,暴露出股二头肌和股外侧肌,经肌间隔钝性分离,游离出坐骨神经。实验组和对照组在距离状肌下缘7mm处,用血管钳满扣2扣垂直钳夹坐骨神经3次,每次10s,中间间隔l0s。生理盐水冲洗后,逐层缝合切口。假手术组的操作步骤同实验组和对照组,仅分离出坐骨神经,不钳夹。动物模型制成后,将实验组动物放置于路由器附近,对照组和假手术组置于法拉第笼内,不给予电磁波照射,并将笼子用锡纸保护,防止其他电磁辐射干扰。分别于术后4周、8周和12周行大鼠坐骨神经功能指数检测和运动功能评价。并于术后4周、8周和12周处死部分大鼠取材,采用免疫组织化学法对坐骨神经中脑源性生长因子(brain derived nerve growth,BDNF)、神经生长因子(nerve growth facor,NGF)和生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)进行检测。同时在光镜下观察坐骨神经病理变化。结果(1)行为学测试:术后4周三组间坐骨神经功能指数分别为0、-88.652±0.541、-89.725±0.613;第8周分别为0、-79.313±0.782、-80.432±0.733;第 12 周分别为 0、-77.293±0.742、-78.654±0.695。术后 4 周三组间 BBB评分分别为 21、8.13±2.04、7.73±2.12;第 8 周分别为 21、9.73±1.86、9.64±2.04;第 12 周分别为 21、11.32±2.21、11.42± 1.86。术后 4 周、8 周、12周,对照组和实验组SFI和BBB评分明显低于假手术组,差异有统计学意义(p<0.05)。术后4周、8周、12周,实验组SFI和BBB评分与对照组比较,差异无统计学意义(p>0.05)。(2)HE染色:术后4周、8周、12周,HE染色结果可见假手术组坐骨神经外膜完整,神经纤维排列整齐,结构紧密,髓鞘和轴突结构完整,可见少量施万细胞。对照组坐骨神经纤维排列紊乱,有Wallerian变性伴髓鞘分解,有大量空泡,施万细胞增生明显。实验组坐骨神经纤维排列紊乱,有Wallerian变性和空泡样变性,实验组和对照组比较,差异无统计学意义。(3)免疫组织化学染色:分别于术后4周、8周、12周对假手术组,实验组以及对照组坐骨神经中BDNF、NGF和GAP-43的表达量行半定量分析,术后4周假手术组、实验组和对照组BDNF的表达量分别为0.143±0.021、0.703±0.051、0.654±0.032;术后8周假手术组、实验组和对照组BDNF的表达量分别为0.151±0.018、0.682±0.043、0.631±0.029;术后12周假手术组、实验组和对照组 BDNF 的表达量分别为 0.138±0.023、0.605±0.042、0.562±0.021。三组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05);术后4周三组间NGF的表达量分别为 0.123±0.023、0.422±0.042、0.408±0.035;术后 8 周三组间 NGF 的表达量分别为 0.109±0.018、0.401 ±0.035、0.391±0.036;术后 12 周三组间NGF 的表达量分别为 0.112±0.019、0.385±0.040、0.371 ±0.034。三组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。术后4周三组间GAP-43的表达量分别为 0.125±0.031、0.323±0.032、0.305±0.023;术后 8 周三组间 GAP-43 的表达量分别为 0.112±0.028、0.301±0.029、0.287±0.021;术后 12 周三组间GAP-43 的表达量分别为 0.120±0.030、0.283±0.033、0.261±0.018;三组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组术后4周、8周、12周BDNF、NGF、GAP-43的表达水平与对照组相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论WIFI辐射对大鼠的坐骨神经损伤修复无明显影响,实验组和对照组大鼠的坐骨神经功能指数、BBB评分、HE染色以及BDNF、NGF和GAP-43的表达量相比无明显差异。

李琰峰[7](2020)在《基于SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2通路探讨广嗣育麟汤治疗男性不育的疗效及其作用机制的研究》文中研究说明目的男性不育症已成为目前社会关注的热点问题。西医治疗存在一定的局限性,相当一部分男性不育问题不能得到有效解决;中医治疗具有独特的治疗优势疗效确切,能很好地弥补西医治疗男性不育症的不足;广嗣育麟汤以补肾生精为治疗原则,临床疗效确切,值得进一步深入探讨;本研究通过随机对照试验进一步明确广嗣育麟汤的临床疗效,同时通过动物实验探讨其改善生精功能的机制与SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关性。方法临床研究:采用随机对照试验的方法,阳性对照组采用左卡尼汀治疗,观察组用左卡尼汀联合广嗣育麟汤治疗;疗程为90天;观察在治疗前后患者精液量、液化程度、精子浓度、精子总数、精子总活率、前向运动百分率等精液质量指标以及患者中医症状评分的变化;通过统计分析观察广嗣育麟汤治疗肾虚证男性不育的疗效。实验研究:采用雷公藤多苷诱导建立生精障碍大鼠模型,造模成功后,随机分为空白组、模型组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组12只;空白组和模型组给予去离子水灌胃,对照组给予左卡尼汀口服液灌胃,低、中、高剂量组给予广嗣育麟汤悬混液低、中、高剂量灌胃,共计4周;观察大鼠一般情况、体重、睾丸和附睾脏器系数、精液质量、血清性激素、抑制素B、附睾肉毒碱等指标,以及睾丸组织形态病理改变和超微结构的变,探讨广嗣育麟汤最佳药物治疗浓度。采用免疫组化检测方法检测大鼠睾丸组织Bax、Bcl-2蛋白的含量;采用WB和Real time PCR方法检查SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关蛋白含量及mRNA的表达量;探讨广嗣育麟汤改善生精功能的机制,以及其与SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关性。结果临床研究:治疗后精液质量相关指标观察组明显优于对照组,差异显着(P<0.05或P<0.01);中医症状总评分以及肾精亏虚证、肾阳虚证、肾阴虚证不同证候评分,观察组也优于对照组,差异显着(P<0.05或P<0.01);根据临床疗效标准,广嗣育麟汤联合左卡尼汀整体疗效明显优于单纯左卡尼汀治疗疗效,差异有统计学意义(P<0.05)。整个观察期间未出现不良反应报告。实验研究:干预结束后,广嗣育麟汤各剂量组大鼠一般情况、体重、脏器系数、精液质量、抑制素B、附睾肉毒碱等指标检测明显优于模型组,而且中剂量组优于对照组;性激素相关指标中,广嗣育麟汤各组优于模型组,差异有统计学差异(P<0.05),中剂量组LH和高剂量组T优于对照组;观察睾丸组织病理改变和超微结构可见广嗣育麟汤各组生精细胞形态和数量、线粒体等细胞器数量明显优于模型组和对照组;采用免疫组化检测大鼠睾丸组织Bax、Bcl-2蛋白的含量,可见广嗣育麟汤组Bax含量明显低于对照组,Bcl-2含量以及Bcl-2/Bax 比值均明显高于同对照组;采用WB和Real time PCR方法检查SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关蛋白含量及mRNA的表达量,可见观察组SCF、c-kit、PI3K、AKT、Bcl-2蛋白含量均高于对照组,Bad、Bax蛋白含量均低于对照组;mRNA的表达量SCF、c-kit、AKT、Bcl-2高于对照组,Bad、Bax mRNA的表达量均低于模型组。结论1.广嗣育麟汤可以有效改善男性不育症患者的精液质量,降低肾虚证患者中医症状评分;2.广嗣育麟汤可以有效改善生精障碍模型大鼠一般状态,提高睾丸附睾脏器系数、精液质量、抑制素B和附睾肉毒碱含量,参与下丘脑-垂体-性腺轴性激素的调控,修复睾丸组织及超微结构的形态;3.广嗣育麟汤中剂量为最佳治疗药物浓度;4.广嗣育麟汤可以通过SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路促进生精细胞的增殖和抑制生精细胞的凋亡。综上所述,广嗣育麟汤可以有效治疗肾虚型男性不育症,其调控SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路蛋白和基因是作用机制之一。

曾鹏[8](2020)在《左卡尼汀对环磷酰胺致大鼠睾丸损伤的保护作用及机制研究》文中研究表明[目 的]1.探究环磷酰胺(CP)导致大鼠睾丸损伤和影响精子发生的作用和机制;2.探究左卡尼汀(LC)对CP致大鼠睾丸和精子发生损伤的保护作用及机制。[方 法]将72只8周龄体重约250g雄性大鼠随机分为三组:生理盐水组(NS组),环磷酰胺组(CP组),环磷酰胺+左卡尼汀组(CP+LC组)。NS组每天腹腔注射生理盐水1ml;CP组每天腹腔注射CP 30 mg/kg;CP+LC组每天腹腔注射CP 30 mg/kg,一小时后再腹腔注射LC 100 mg/kg;上述三组均连续注射5 d。注射药物后分别在3 d、1 w、2 w、4 w四个时间点取材,期间记录大鼠活动情况和体重,取材时记录大鼠睾丸重量。采用HE染色观察大鼠睾丸曲细精管和间质细胞变化;采用免疫组化和免疫荧光染色方法观察大鼠睾丸中PP2A、SET、β-catenin的免疫反应阳性表达;采用Western blot方法检测PP2A、SET、β-catenin的蛋白表达变化,采用Q-PCR检测基因mRNA表达变化,ELISA测定大鼠血清睾酮含量。应用SPSS 22.0对数据进行单因素方差分析分析以及SNK和LSD-t检验进行方差分析后将多组资料两两比较,以P<0.05为差异有统计学意义。[结 果]1、CP组:与NS组比较,CP组大鼠活动明显减少,大鼠体重和睾丸重量明显降低,血清睾酮含量明显降低;HE染色发现大鼠睾丸曲细精管管径变小,生精上皮结构紊乱,生精上皮中不同阶段生精细胞排列稀疏,各级生精细胞均有不同程度缺失,以精子细胞减少为主;免疫组化和免疫荧光显示曲细精管中精原细胞、初级精母细胞、支持细胞以及睾丸间质细胞中均存在PP2A、SET、β-catenin 的表达,PP2A 和 β-catenin 蛋白表达明显升高(P<0.05),SET蛋白表达明显下降(P<0.05);Q-PCR和WB实验显示CP组PP2A和β-catenin的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),而SET的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。2、CP+LC组:相比于CP组,CP+LC组大鼠活动增加,体重无明显差异,睾丸重量明显增加,血清睾酮含量明显增加;HE染色发现大鼠生精上皮结构有所恢复,生精上皮中不同阶段生精细胞部分恢复,精子细胞数量有一定恢复;免疫组化和免疫荧光染色显示曲细精管中精原细胞、初级精母细胞以及睾丸间质细胞中PP2A、SET、β-catenin的表达,CP+LC组PP2A和β-catenin蛋白表达明显下调(P<0.05),SET蛋白表达明显上调(P<0.05);Q-PCR和WB实验显示PP2A和β-catenin的mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05),而SET的mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05)。相比于NS组,CP+LC组体重明显降低,睾丸重量稍有降低,睾丸占体重比值升高(P<0.05),血清睾酮含量无明显差异。HE染色显示精子细胞数量仍不及NS组。PP2A和β-catenin的mRNA和蛋白表达无明显差异,SET的mRNA和蛋白表达高于NS组(P<0.05)。[结 论]1.CP通过SET和β-catenin信号通路对大鼠睾丸造成损伤,损害精子发生。2.LC可保护CP所致大鼠睾丸损伤和精子发生障碍,可能通过SET和β-catenin信号通路发挥保护作用。

潘晓南[9](2020)在《大豆、菠菜实和芫荽实对雄性大鼠性功能的影响及其机制研究》文中提出目的:研究大豆、菠菜实和芫荽实对雄性大鼠性功能的影响,并探讨其作用机制。方法:(1)选取60只正常的SD(Sprag-Dawley,SD)雄性大鼠,随机选取分为正常对照组(N组)、大豆组(A组)、菠菜实组(B组)、芫荽实组(C组)、已烯雌酚对照组(D组),每组12只。分别以含大豆、菠菜实、芫荽实特殊饲料干预雄性大鼠,阳性对照组以已烯雌酚灌胃。定期观察大鼠行为状态,每4周1次动态检测性行为能力的改变。干预20周后取材,称取各组大鼠睾丸重量,并计算睾丸系数。光镜下观察各组大鼠的睾丸形态学变化。(2)采用放射免疫法检测各组大鼠血清睾酮(Testosterone,T)、雌二醇(Estradiol,E2)、黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)、催乳素(Prolactin,PRL)5种性腺轴激素水平。免疫组织化学及免疫印迹(Western-blot)方法检测各组大鼠睾丸组织中ERα、ERβ蛋白表达。结果:(1)性行为学实验结果:与N组相比,C组大鼠爬背潜伏期第12、16周均显着延长,D组大鼠爬背潜伏期第8、12、16、20周均显着延长(P<0.05);C、D组插入潜伏期、射精潜伏期第8、12、16、20周均显着延长(P<0.05)。与N组相比,C、D组大鼠爬背次数第4、8、12、16、20周均显着减少(P<0.05);C、D组大鼠插入、射精次数第8、12、16、20周均减显着少(P<0.05)。与A组相比,C组大鼠爬背潜伏期第16周显着延长(P<0.05);C组大鼠射精潜伏期第16、20周均显着延长(P<0.05);D组大鼠爬背、插入、射精潜伏期第8、12、16、20周均显着延长(P<0.05)。与A组相比,C组大鼠插入次数第16周显着减少(P<0.05);D组大鼠爬背、插入、射精次数第8、12、16、20周均显着减少(P<0.05)。与B组相比,D组大鼠爬背潜伏期第12、16周均显着延长(P<0.05);D组大鼠插入、射精潜伏期第12、16、20周均显着延长(P<0.05)。与B组相比,D组大鼠爬背次数第12、16周均显着减少(P<0.05);D组大鼠插入次数第8、12、16周均显着减少(P<0.05);D组大鼠射精次数第8、12、16、20周均显着减少(P<0.05)。(2)大鼠体重、睾丸重量及睾丸系数结果:不同饲料干预各组大鼠后,与N组相比,B、C组大鼠体重均显着增加(P<0.05)。与N、A、B、C组相比,D组大鼠体重、睾丸重量和睾丸系数均显着降低(P<0.05)。(3)睾丸HE染色结果:光镜下可N组大鼠睾丸形态结构正常,间质细胞丰富;A、B组大鼠睾丸间质细胞减少,有少量毛细血管充血;C、D组大鼠睾丸间质细胞显着减少,睾丸正常形态破坏较为严重。(4)性激素水平检测结果:T水平,与N组相比,C、D组T水平均显着降低(P<0.05)。与A、B、C组相比,D组T水平均显着降低(P<0.05)。E2水平,与N、A组相比,C组E2水平均显着升高,(P<0.05)。LH水平,与N、D组相比,C组LH水平均显着降低(P<0.05)。PRL水平,与N、C组相比,D组PRL水平显着降低(P<0.05)。(5)免疫组化和Western blot检测结果显示,光镜下可见,ERα和ERβ两种受体均在生精小管之间的睾丸间质细胞及精原细胞的细胞核中强表达,胞浆弱表达。与N组相比,B、C组大鼠睾丸组织中ERα蛋白表达水平均显着升高(P<0.05)。与A组相比,C组大鼠睾丸组织中ERα蛋白表达水平显着升高(P<0.05)。与N、A、B、C组相比,D组ERβ蛋白表达水平均显着降低(P<0.05)。结论:(1)芫荽实可通过延长大鼠爬背、插入、射精潜伏期和减少其爬背、插入和射精次数,导致性功能减退,并诱发大鼠性功能障碍。具体机制可能和升高血清中E2水平,降低LH水平,并增加睾丸间质中ERα的表达,降低血清T水平有关。提示,芫荽实属于内分泌干扰物,可在雄性大鼠体内发挥雌激素样作用。(2)菠菜实可显着上调雄性大鼠睾丸ERα的表达,提示,其可抑制睾丸间质细胞T的合成和分泌,但对性功能的影响可能存在剂量依赖性。(3)大豆对雄性大鼠性功能、性腺轴激素和睾丸雌激素受体表达没有显着的影响,可能与其剂量和时间依赖性有关。(4)已烯雌酚损伤雄性大鼠性功能,具体机制可能与下调睾丸ERβ的表达,降低T的合成和分泌有关。

童卓云[10](2020)在《冷刺激与高脂饮食对大鼠精子功能的影响及其生殖生物学基础的研究》文中指出目的:研究冷刺激、HFD及冷刺激联合HFD对大鼠精子功能的影响,在评价精子功能后,建立弱精子症模型,探讨其可行性;通过研究弱精子症模型大鼠HPG轴、HPA轴、HPT轴相关组织形态学与相关激素的改变,初步揭示该弱精子症大鼠模型精子功能改变的神经-内分泌机制。方法:(1)66只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组:12只),喂以标准饲料在正常温度环境(22±2℃)饲养;冷刺激组(C组:18只),喂以标准饲料在冷环境(4±0.5℃,每日10:00-18:00)饲养;高脂饮食组(H组:18只),喂以高脂饲料在正常温度环境(22±2℃)饲养;冷刺激联合高脂饮食组(CH组:18只)喂以高脂饲料,在冷环境(4±0.5℃,每日10:00-18:00)饲养。23周后通过对各组大鼠精子活力的检测与评定,筛选C组、H组、CH组中弱精子症大鼠并建立CA组、HA组与CHA组,结合各组大鼠睾丸、附睾系数对弱精子症模型大鼠给予评价。(2)采用全自动生化检测仪测定各组大鼠外周血清血脂及肝功能水平。(3)采用放射性免疫法测定各组大鼠外周血清HPG轴相关激素(T、E2、LH、FSH、PRL)、HPT轴相关激素(T3、T4、FT3、FT4、TSH);ELISA法测定各组大鼠外周血清HPA轴相关激素(EPI、CORT、NA)水平,下丘脑、垂体、睾丸、附睾、肾上腺、甲状腺组织HE染色,光镜下观察形态学改变。结果:(1)造模期间各组大鼠生长特征结果:C组、CH组各周期体重均值、体重增长、饮食量较N组无显着差异(P>0.05),但其均值均低于N组;H组体重在造模第16周至造模结束显着高于N组,各组体重增长主要集中在造模前8周。(2)精子功能检测结果:C组、H组、CH组PR精子、PR+NP精子均显着低于N组(P<0.01),但精子浓度改变无显着性差异(P>0.05)。C组、H组、CH组弱精子症大鼠模型成模率分别为50%、61.11%、61.11%。与N组相比,CA组、HA组、CHA组PR精子分别降低82.97%、59.55%、56.60%,PR+NP精子分别降低79.08%、50.25%、41.58%,精子活率分别降低57.12%、37.98%、40.48%,差异显着(P<0.01);而精子浓度未见显着差异(P>0.05)。(3)弱精子症大鼠睾丸、附睾器官系数结果:与N组相比,CA组、HA组睾丸、附睾器官系数均显着降低(P<0.01)。(4)血脂与肝功能结果:与N组相比,CA组、CHA组LDL显着升高,HA组、CHA组TC升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与N组相比,CA组ALT显着升高而HA组则显着降低,CHA组TP显着升高。(5)HPG轴相关激素水平结果:与N组相比,CA组、HA组E2水平显着升高,LH显着降低(P<0.05),CHA组以T、E2显着升高为主;HPA轴相关激素水平结果:与N组相比,CA组、CHA组EPI水平显着升高,HA组、CHA组NA显着升高(P<0.05);HPT轴相关激素水平结果:与N组相比,CA组HPT轴相关激素未产生显着性变化,但T3/T4水平显着升高。HA组T3、T4显着升高(P<0.05),TSH虽有所降低,但不显着(P>0.05)。CHA组T3及T3/T4显着升高,差异显着(P<0.05)。(6)HPG轴、HPA轴、HPT轴相关组织光镜下组织结构变化:光镜下N组下丘脑、垂体、睾丸、附睾、肾上腺、甲状腺结构正常。与N组相比,CA组、HA组、CHA组下丘脑室旁核神经细胞均存在细胞增生及排列紊乱。CA组、HA、CHA组垂体细胞排列紊乱,CA组、CHA组嫌色细胞增多且可见组织水肿,HA组空泡样改变多见;光镜下CA组、HA组、CHA组睾丸组织生精小管内亦可见精子,但不如N组饱满,同时CA组间质充血水肿较明显,HA组、CHA组支持细胞数量减少较明显;光镜下CA组附睾上皮细胞减少、高低不一,间质松散。HA组附睾上皮细胞增生变厚,高低不一且间质更为松散;光镜下CA组肾上腺结构改变以细胞排列紊乱及水肿为主,HA组、CHA组肾上腺皮质束状带空泡样改变多见并以HA组较显着;光镜下CA组、HA组甲状腺滤泡均表现为排空状态,胶质少,滤泡上皮增生并以CA组、HA组较严重,CHA组甲状腺亦有上皮增生及滤泡结构破坏,但尚存在较多富含胶质的滤泡。结论:(1)冷刺激、HFD及冷刺激联合HFD可通过显着降低大鼠精子活力和精子活率影响精子功能,并可成功诱导建立弱精子症大鼠模型。(2)HFD及冷刺激联合HFD引起的弱精子症大鼠发生脂代谢紊乱及肝功能异常。(3)显着升高的E2水平对弱精子症模型大鼠精子活动能力减弱有较大影响。(4)冷刺激诱导的弱精子症大鼠以慢性应激反应为主,同时出现LDL显着升高;高脂饮食诱导的弱精子症大鼠脂代谢紊乱并呈现高脂血症;冷刺激联合高脂饮食诱导的弱精子症大鼠发生脂代谢紊乱并存在慢性应激反应。

二、酒精对大鼠生殖细胞损伤的研究(论文开题报告)

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、酒精对大鼠生殖细胞损伤的研究(论文提纲范文)

(1)金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)临床观察及机制研究(论文提纲范文)

中文摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 文献综述
    综述一 男性不育症中医药诊疗研究进展
        1. 男性不育症中医病名认识
        2. 男性不育症病因病机
        3. 补肾法为主的男性不育症中医药治疗
        4. 补肾法为主治疗男性不育症的相关机制
        参考文献
    综述二 特发性弱精子症现代医学诊治研究进展
        1. 特发性弱精子症流行病学
        2. 特发性弱精子症诊断
        3. 特发性弱精子症可能病因及机制
        3.1 氧化应激损伤
        3.2 线粒体功能障碍
        3.3 表观遗传学作用
        3.4 基因异常
        3.5 精子蛋白组差异
        3.6 翻译后修饰
        3.7 环境因素
        3.8 不良生活方式
        3.9 精神心理因素
        4. 特发性弱精子症的治疗
        4.1 一般治疗
        4.2 药物治疗
        4.3 辅助生殖技术
        参考文献
第二部分 临床研究 金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性及安全性临床研究
    前言
    1. 研究伦理
    2. 研究对象
        2.1 病例来源
        2.2 诊断标准
        2.3 纳入标准
        2.4 排除标准
        2.5 中止/退出标准
        2.6 中止/退出病例的处理
    3. 研究方法
        3.1 分组及样本量计算
        3.2 研究用药及疗程
        3.3 观察指标及观察时点
        3.4 精液采集及精液分析
    4. 统计学分析
    5. 研究结果
        5.1 试验入组及完成情况
        5.2 一般资料分析
        5.3 有效性分析
        5.4 安全性分析
    6. 讨论
    7. 小结
    参考文献
第三部分 实验研究
    实验一 金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型的药效学研究
        前言
        1. 材料与方法
        1.1 动物伦理
        1.2 实验动物
        1.3 主要实验仪器
        1.4 主要实验试剂与药品
        1.5 实验方法
        1.6 实验检测指标
        1.7 统计学分析
        2. 结果
        2.1 大鼠一般情况变化
        2.2 大鼠体重、睾丸、附睾重量变化
        2.3 大鼠睾丸、附睾脏器指数变化
        2.4 大鼠精子浓度变化
        2.5 大鼠精子活力变化
        2.6 大鼠性激素水平变化
        2.7 大鼠睾丸、附睾HE染色变化
        2.8 大鼠肝肾功指标变化
        3. 讨论
        3.1 ORN诱导的弱精子症大鼠模型的构建
        3.2 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的有效性分析
        3.3 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的安全性分析
        4. 小结
    实验二 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制
        前言
        1. 材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 主要实验仪器
        1.3 主要实验试剂
        1.4 实验方法
        1.5 实验检测指标
        1.6 统计学分析
        2. 结果
        2.1 大鼠精子GSH-Px、SOD及MDA及变化
        2.2 大鼠精子MMP及早期凋亡率变化
        2.3 大鼠精子线粒体ATP变化
        2.4 大鼠Pink1、Parkin、p62和LC3Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1mRNA及蛋白表达变化
        3. 讨论
        4. 小结
    参考文献
结论
创新点
不足与展望
致谢
个人简历
附件
    附件1
    附件2
中医药科技查新报告书

(2)大蒜素调控氧化应激及内质网应激改善膳食丙烯酰胺肝毒性机制研究(论文提纲范文)

摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 绪论
    1.1 丙烯酰胺(Acrylamide)的研究进展
        1.1.1 丙烯酰胺的基本性质及来源
        1.1.2 丙烯酰胺日膳食暴露评估
        1.1.3 丙烯酰胺的代谢与吸收
        1.1.4 丙烯酰胺毒理学研究
    1.2 大蒜素(Allicin)的研究进展
        1.2.1 大蒜素的理化性质
        1.2.2 大蒜素的主要生理功能
    1.3 NLRP3炎性小体的研究进展
        1.3.1 NLRP3炎性小体的结构
        1.3.2 NLRP3炎性小体的活化机制研究
        1.3.3 NLRP3炎性小体的分布情况
        1.3.4 NLRP3炎性小体与疾病的相互关系
    1.4 氧化应激相关通路研究
        1.4.1 MAPK信号通路调控NLRP3 炎性小体
        1.4.2 NF-κB信号通路调控NLRP3 炎性小体
    1.5 内质网应激相关通路研究
        1.5.1 内质网应激与未折叠蛋白反应
        1.5.2 内质网应激调控NLRP3 炎性小体
    1.6 论文研究目的、意义和内容
        1.6.1 研究目的和意义
        1.6.2 研究内容
        1.6.3 技术路线
第2章 丙烯酰胺对Kupffer和HepG2细胞NLRP3炎性小体激活的影响
    2.1 引言
    2.2 材料与仪器
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验试剂
        2.2.3 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养
        2.3.2 药物的配制及给药方法
        2.3.3 Kupffer和 HepG2细胞活力的测定
        2.3.4 SOD和GSH-Px酶活力的检测
        2.3.5 ROS荧光强度的检测
        2.3.6 RT-qPCR检测mRNA表达
        2.3.7 Western Blot检测蛋白表达
        2.3.8 ELISA检测细胞因子
        2.3.9 数据处理与统计
    2.4 结果与分析
        2.4.1AA对Kupffer和HepG2细胞活力的影响
        2.4.2AA对Kupffer和HepG2细胞氧化应激反应的影响
        2.4.3AA对Kupffer和HepG2细胞内质网应激反应的影响
        2.4.4AA对Kupffer和HepG2细胞NLRP3炎性小体激活的影响
        2.4.5AA对Kupffer和HepG2细胞MAPK信号通路的影响
        2.4.6AA对Kupffer和HepG2细胞NF-κB信号通路的影响
        2.4.7 ROS清除剂(NAC)对AA诱导的Kupffer和HepG2细胞MAPK信号通路及NLRP3 炎性小体激活的影响
        2.4.8 内质网应激抑制剂(4-PBA)对AA诱导的Kupffer和HepG2细胞MAPK信号通路及NLRP3 炎性小体激活的影响
        2.4.9 MAPK选择性抑制剂对AA诱导的Kupffer和HepG2细胞NLRP3炎性小体激活的影响
    2.5 讨论
    2.6 本章小结
第3章 大蒜素对丙烯酰胺诱导的Kupffer和HepG2细胞NLRP3炎性小体激活的影响
    3.1 引言
    3.2 材料与仪器
    3.3 实验方法
    3.4 结果与分析
    3.5 讨论
    3.6 本章小结
第4章 大蒜素对丙烯酰胺诱导的SD大鼠肝脏损伤的保护作用研究
    4.1 引言
    4.2 材料与仪器
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验试剂
        4.2.3 实验仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 动物试验
        4.3.2 生理生化指标检测
        4.3.3 RT-qPCR检测mRNA表达
        4.3.4 Western Blot检测蛋白表达
        4.3.5 ELISA检测细胞因子
        4.3.6 数据处理与统计
    4.4 结果与分析
        4.4.1 Allicin对AA诱导的SD大鼠肝脏损伤的影响
        4.4.2 Allicin对AA诱导的SD大鼠肝脏氧化应激反应的影响
        4.4.3 Allicin对AA诱导的SD大鼠肝脏内质网应激反应的影响
        4.4.4 Allicin对AA诱导的SD大鼠肝脏NLRP3炎性小体激活的影响
        4.4.5 Allicin对AA诱导的SD大鼠肝脏MAPK信号通路的影响
        4.4.6 Allicin对AA诱导的SD大鼠肝脏NF-κB信号通路的影响
    4.5 讨论
    4.6 本章小结
第5章 大蒜素对丙烯酰胺诱导的SD大鼠脾脏损伤的保护作用研究
    5.1 引言
    5.2 材料与仪器
        5.2.1 实验材料
        5.2.2 实验试剂
        5.2.3 实验仪器
    5.3 实验方法
        5.3.1 动物试验设计
        5.3.2 生理生化指标检测
        5.3.3 RT-qPCR检测mRNA表达
        5.3.4 Western Blot检测蛋白表达
        5.3.5 ELISA检测细胞因子
        5.3.6 数据处理与统计
    5.4 结果与分析
        5.4.1 Allicin对AA诱导的SD大鼠脾脏表观状态的影响
        5.4.2 Allicin对AA诱导的SD大鼠脾脏氧化应激反应的影响
        5.4.3 Allicin对AA诱导的SD大鼠脾脏内质网应激反应的影响
        5.4.4 Allicin对AA诱导的SD大鼠脾脏NLRP3炎性小体激活的影响
        5.4.5 Allicin对AA诱导的SD大鼠脾脏MAPK信号通路的影响
        5.4.6 Allicin对AA诱导的SD大鼠脾脏NF-κB信号通路的影响
    5.5 讨论
    5.6 本章小结
第6 章 结论
    6.1 结论
    6.2 展望
    6.3 创新点
参考文献
导师简介
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢

(3)猪隐睾睾丸精子发生障碍的分子机制研究(论文提纲范文)

摘要
第一章 文献综述
    1 隐睾症及其激素调节机制的研究进展
        1.1 隐睾症
        1.2 隐睾症流行病学研究
        1.3 隐睾症激素调节机制的研究
    2 隐睾影响哺乳动物精子发生的研究进展
        2.1 哺乳动物精子发生
        2.2 隐睾影响精子发生的研究
    3 隐睾睾丸形态计量学研究进展
        3.1 隐睾睾丸细胞计数的研究
        3.2 隐睾睾丸生殖细胞和支持细胞的研究
    4 隐睾睾丸细胞增殖研究进展
        4.1 增殖相关蛋白的研究
        4.2 睾丸细胞增殖的研究
        4.3 隐睾影响睾丸细胞增殖的研究
    5 隐睾睾丸细胞凋亡的研究进展
        5.1 凋亡的概念及分子机制的研究
        5.2 凋亡调节哺乳动物精子发生的研究
        5.3 隐睾影响精子发生的凋亡信号研究
    6 隐睾睾丸自噬的研究进展
        6.1 自噬的概念及作用机制的研究
        6.2 自噬调节精子发生的研究
        6.3 隐睾睾丸自噬的分子机制研究
    7 隐睾睾丸支持细胞间血睾屏障研究进展
        7.1 血睾屏障紧密连接分子组成的研究
        7.2 隐睾影响血睾屏障紧密连接分子的研究
    8 转录组测序技术在隐睾睾丸的研究进展
        8.1 转录组与转录组测序技术
        8.2 转录组测序技术在睾丸基因表达差异的研究
        8.3 转录组测序技术在隐睾睾丸基因表达差异的研究
    9 蛋白质组学技术在隐睾睾丸的研究进展
        9.1 蛋白质组学与蛋白质组学技术
        9.2 蛋白质组学技术在睾丸蛋白表达差异的研究
        9.3 蛋白质组学技术在隐睾睾丸蛋白表达差异的研究
    10 本研究的目的与意义
    参考文献
第二章 自发单侧隐睾公猪睾丸支持细胞和生殖细胞数量的变化
    1 材料与方法
        1.1 实验动物和样品采集
        1.2 主要仪器和试剂
    2 实验方法
        2.1 制作石蜡切片
        2.2 HE染色
        2.3 睾丸的形态计量学
        2.4 睾丸细胞计数
    3 实验结果
        3.1 猪睾丸组织形态学变化
        3.2 猪睾丸组织形态计量学变化
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
第三章 自发单侧隐睾对公猪睾丸增殖和凋亡相关蛋白表达与定位的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验动物和样品采集
        1.2 主要仪器和试剂
    2 实验方法
        2.1 TUNEL法检测细胞凋亡
        2.2 总RNA提取和qRT-PCR
        2.2.1 总RNA提取
        2.2.2 cDNA合成
        2.2.3 引物设计
        2.2.4 qRT-PCR
        2.3 总蛋白提取和Western Blot
        2.3.1 总蛋白提取
        2.3.2 Western Blot
        2.4 免疫荧光化学
        2.5 免疫组织化学
        2.6 数据统计与分析
    3 实验结果
        3.1 隐睾对生殖细胞凋亡的影响
        3.2 隐睾对猪睾丸增殖和凋亡相关基因mRNA表达水平的影响
        3.3 隐睾对猪睾丸增殖和凋亡相关蛋白表达量的影响
        3.4 隐睾对猪睾丸增殖和凋亡相关蛋白定位的影响
    4 讨论
        4.1 隐睾对猪睾丸生殖细胞和支持细胞增殖的影响
        4.2 隐睾对猪睾丸生殖细胞和支持细胞凋亡的影响
    5 结论
    参考文献
第四章 自发单侧隐睾对公猪睾丸自噬相关蛋白表达与定位的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验动物和样品采集
        1.2 主要仪器和试剂
    2 实验方法
        2.1 总RNA提取和qRT-PCR
        2.2 总蛋白提取和Western Blot
        2.3 免疫组织化学
        2.4 数据统计与分析
    3 实验结果
        3.1 隐睾对猪睾丸自噬相关基因LC3、p62和Beclin1 mRNA表达水平的影响
        3.2 隐睾对猪睾丸自噬相关蛋白LC3、p62和Beclin1表达水平的影响
        3.3 隐睾对猪睾丸自噬蛋白LC3定位的影响
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
第五章 自发单侧隐睾对公猪睾丸血睾屏障紧密连接分子表达与定位的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验动物和样品采集
        1.2 主要仪器和试剂
    2 实验方法
        2.1 总RNA提取和qRT-PCR
        2.2 总蛋白提取和Western Blot
        2.3 免疫组织化学
        2.4 数据统计与分析
    3 实验结果
        3.1 隐睾对猪睾丸血睾屏障紧密连接相关基因Claudin-11、Occludin和ZO-1mRNA表达水平的影响
        3.2 隐睾对猪睾丸血睾屏障紧密连接相关蛋白Claudin-11、Occludin和ZO-1表达水平的影响
        3.3 隐睾对猪睾丸支持细胞标记蛋白GATA-4 定位的影响
        3.4 隐睾对猪睾丸血睾屏障紧密连接相关蛋白Claudin-11、Occludin和ZO-1定位的影响
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
第六章 单侧隐睾对大鼠睾丸血睾屏障通透性的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验动物和样品采集
        1.2 主要仪器和试剂
    2 实验方法
        2.1 大鼠隐睾模型的建立
        2.2 免疫组织化学
        2.3 血睾屏障通透性检测
    3 实验结果
        3.1 隐睾对大鼠睾丸血睾屏障紧密连接相关蛋白Claudin-11和ZO-1定位的影响
        3.2 隐睾对大鼠睾丸血睾屏障通透性的影响
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
第七章 转录组学分析自发单侧隐睾对公猪睾丸基因表达的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验动物和样品采集
        1.2 主要仪器和试剂
    2 实验方法
    3 实验结果
        3.1 断奶前仔猪、隐睾和对侧阴囊睾丸的转录组学分析
        3.2 差异基因GO分析
        3.3 差异基因KEGG分析
    4 讨论
        4.1 隐睾对精原细胞分化的影响
        4.2 隐睾对生殖细胞减数分裂的影响
        4.3 隐睾对细胞间连接的影响
    5 结论
    参考文献
第八章 蛋白组学分析自发单侧隐睾对公猪睾丸蛋白表达的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验动物和样品采集
        1.2 主要仪器和试剂
    2 实验方法
    3 结果
        3.1 蛋白的鉴定
        3.2 蛋白定量和差异蛋白筛选
        3.3 差异表达蛋白GO分析
        3.4 差异表达蛋白KEGG分析
    4 讨论
        4.1 隐睾对睾酮产生的影响
        4.2 隐睾对细胞周期的影响
        4.3 隐睾对细胞连结的影响
        4.4 隐睾对代谢的影响
    5 结论
    参考文献
全文结论
创新点
Abstract
英文缩写对照表
附录
致谢

(4)灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究(论文提纲范文)

中文摘要
Abstract
英文缩略语
综述一 中医诊治男性不育症研究进展
    参考文献
综述二 西医诊治男性不育症研究进展
    参考文献
实验研究
    前言
    第一部分 ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究
        1. 材料与方法
        2. 数据分析
        3. 实验结果
        3.1 大鼠一般状态
        3.2 大鼠体重,睾丸、附睾重量
        3.3 大鼠睾丸、附睾脏器系数
        3.4 精子浓度及活动率
        4. 小结
    第二部分 灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究
        实验一 灵归方对ORN诱导弱精子症大鼠附睾LC相关通路的影响
        1. 材料与方法
        2. 数据分析
        3. 实验结果
        3.1 精子浓度及活动率
        3.2 附睾LC含量
        3.3 灵归方对附睾OCTN2蛋白表达的影响
        3.4 灵归方对附睾OCTN2 mRNA表达的影响
        实验二 灵归方对弱精子症大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响
        1. 材料与方法
        2. 数据分析
        3. 实验结果
        3.1 灵归方对血清性激素水平的影响
        3.2 灵归方对附睾组织GSH-Px、SOD活性,MDA含量的影响
        3.3 灵归方对睾丸、附睾组织结构的影响
讨论
    1. 选择LC相关通路作为研究的依据
    2. 选择ORN作为造模药物的依据
    3. 灵归方组方分析
    4. 灵归方改善弱精子症大鼠作用机制
        4.1 灵归方增加弱精子症大鼠附睾LC含量
        4.2 灵归方上调OCTN2蛋白及mRNA在附睾中的表达
        4.3 灵归方抗氧化作用
结论
创新点
不足与展望
参考文献
致谢
个人简介
附录

(5)低剂量持续暴露双酚A对小鼠生殖毒性的影响(论文提纲范文)

资助项目
摘要
Abstract
缩略词表
1 引言
    1.1 双酚A的来源与污染
    1.2 低剂量BPA的潜在危害
    1.3 BPA对孕鼠孕期的影响
    1.4 BPA对仔鼠的影响
        1.4.1 BPA对仔鼠卵巢的影响
        1.4.2 BPA对仔鼠睾丸的影响
    1.5 转录组学测序
    1.6 研究的目的和意义
2 孕期暴露BPA对母体子宫和卵巢的影响
    2.1 材料与方法
        2.1.1 试验动物与分组处理
        2.1.2 母鼠饮水量和体重统计
        2.1.3 窝产子数、仔鼠初生重和雌雄比
        2.1.4 母鼠孕期血清BPA含量测定
        2.1.5 母鼠孕期卵巢和子宫器官指数测定
        2.1.6 母鼠孕期卵巢和子宫雌激素受体检测
        2.1.7 母鼠孕期卵巢和子宫细胞凋亡检测
        2.1.8 统计分析
    2.2 结果
        2.2.1 BPA暴露期间母鼠饮水量和体重
        2.2.2 暴露不同剂量BPA对产仔的影响
        2.2.3 孕鼠孕期血清BPA含量
        2.2.4 BPA对母鼠孕期卵巢、子宫指数及胚胎数目的影响
        2.2.5 不同妊娠日期孕鼠卵巢和子宫ER表达水平
        2.2.6 BPA暴露引起孕鼠卵巢细胞凋亡的变化
        2.2.7 孕鼠子宫细胞凋亡结果
    2.3 讨论
        2.3.1 BPA对孕鼠生殖毒性模型的建立
        2.3.2 BPA对孕鼠孕期胎儿数量的影响
        2.3.3 BPA对孕鼠卵巢和子宫ER表达的影响
        2.3.4 BPA对孕鼠卵巢和子宫细胞凋亡的影响
    2.4 小结
3 BPA低剂量长期暴露对睾丸发育的影响
    3.1 材料与方法
        3.1.1 试验动物分组与处理
        3.1.2 仔鼠饮水量和体重统计
        3.1.3 仔鼠血清和睾丸BPA含量测定
        3.1.4 睾丸器官指数
        3.1.5 仔鼠睾丸病理组织切片制作
        3.1.6 单细胞凝胶电泳(彗星试验)检测睾丸DNA损伤
        3.1.7 仔鼠精子活力、密度和畸形率
        3.1.8 仔鼠睾丸AR的检测
        3.1.9 小鼠睾丸Scp3的免疫组织化学检测
        3.1.10 转录组测序分析及差异基因荧光定量PCR验证
        3.1.11 BPA对小鼠TM3细胞的影响
        3.1.12 统计分析
    3.2 结果
        3.2.1 仔鼠饮水量和体重
        3.2.2 仔鼠血清和睾丸中BPA含量
        3.2.3 BPA对子代雄鼠睾丸器官指数的影响
        3.2.4 长期暴露BPA后21日龄和45日龄仔鼠睾丸的病理学变化
        3.2.5 长期暴露于BPA后子代雄鼠睾丸彗星试验
        3.2.6 仔鼠精子活率、密度和畸形率
        3.2.7 长期暴露于BPA后21日龄子代睾丸AR表达变化
        3.2.8 Scp3在子代45d雄鼠睾丸生精细胞上的表达
        3.2.9 BPA暴露对21日龄仔鼠睾丸转录组测序结果
        3.2.10 45日龄仔鼠睾丸转录组测序结果
        3.2.11 BPA对小鼠TM3细胞的影响
    3.3 讨论
        3.3.1 孕期和哺乳期暴露于BPA对21日龄仔鼠的影响
        3.3.2 长期暴露于BPA对45日龄雄鼠的影响
        3.3.3 BPA对睾丸间质细胞剪切体相关基因的影响
    3.4 小结
4 BPA长期低剂量暴露对仔鼠卵巢发育的影响
    4.1 材料与方法
        4.1.1 动物分组与处理
        4.1.2 BPA对仔鼠血清和卵巢BPA含量的影响
        4.1.3 卵巢器官指数的计算
        4.1.4 仔鼠卵巢病理组织切片的制备
        4.1.5 TUNEL检测卵巢细胞凋亡
        4.1.6 仔鼠卵巢ERα和ERβ的免疫组化检测
        4.1.7 RNA-seq及差异基因qPCR验证
        4.1.8 BPA对小鼠卵巢颗粒细胞的影响
        4.1.9 统计分析
    4.2 结果
        4.2.1 子代雌鼠血清和卵巢组织BPA含量
        4.2.2 卵巢器官指数
        4.2.3 仔鼠卵巢组织病理学变化
        4.2.4 BPA对仔鼠卵巢DNA损伤的测定结果
        4.2.5 暴露BPA后子代21日龄雌鼠卵巢ERα、ERβ表达变化
        4.2.6 暴露BPA对子代45日龄雌鼠卵巢ERα、ERβ表达的影响
        4.2.7 21日龄仔鼠卵巢基因表达变化
        4.2.8 45日龄仔鼠卵巢转录组测序
        4.2.9 BPA对小鼠卵巢颗粒细胞的影响
    4.3 讨论
        4.3.1 孕期和哺乳期暴露BPA对子代21日龄雌鼠卵巢发育的影响
        4.3.2 长期暴露于BPA环境对子代45日龄小鼠卵巢发育的影响
    4.4 小结
5 结论
6 本研究创新点
参考文献
博士期间发表论文及申请专利
作者简历
致谢
附件

(6)WIFI辐射对大鼠坐骨经损伤修复的影响(论文提纲范文)

摘要
Abstract
中英文常用缩略词摘要
前言
材料与方法
实验结果
讨论
结论
参考文献
综述 微波辐射生物学效应研究
    参考文献
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果
致谢

(7)基于SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2通路探讨广嗣育麟汤治疗男性不育的疗效及其作用机制的研究(论文提纲范文)

摘要
ABSTRACT
符号说明
第一部分 文献综述
    综述一 男性不育症中医诊治研究进展
        1 病因病机
        2 辨证分型
        3 辨证论治
        4 总结
        参考文献
    综述二 男性不育症西医诊治研究进展
        1 男性不育症的病因
        2 男性不育症的治疗
        3 生精细胞增殖、凋亡的研究进展
        4 总结
        参考文献
第二部分 临床研究 广嗣育麟汤治疗肾虚型男性不育症的临床研究
    前言
    临床资料
    结果
    讨论
    参考文献
第三部分 实验研究
    实验一 广嗣育麟汤对GTW诱导生精障碍模型大鼠生精功能的影响
        前言
        材料与方法
        结果
        讨论
        参考文献
    实验二 广嗣育麟汤对生精障碍大鼠的SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关蛋白及mRNA表达的影响
        前言
        材料与方法
        结果
        讨论
        参考文献
结语
致谢
附录
在学期间主要研究成果

(8)左卡尼汀对环磷酰胺致大鼠睾丸损伤的保护作用及机制研究(论文提纲范文)

缩略词表(以字母顺序排列)
中文摘要
英文摘要
前言
材料与方法
结果
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(9)大豆、菠菜实和芫荽实对雄性大鼠性功能的影响及其机制研究(论文提纲范文)

中英文缩略词对照表
摘要
Abstract
前言
研究内容与方法
    1 大豆、菠菜实和芫荽实对雄性大鼠性功能的影响
        1.1 实验对象
        1.2 主要的实验仪器及试剂
        1.3 研究内容与方法
    2 大豆、菠菜实和芫荽实对雄性大鼠性腺轴激素水平的影响
        2.1 实验对象
        2.2 主要的实验仪器及试剂
        2.3 实验方法
    3 大豆、菠菜实和芫荽实对大鼠睾丸组织中ERα、ERβ表达的影响
        3.1 实验对象
        3.2 主要的实验仪器及耗材
        3.3 主要的实验试剂
        3.4 主要试剂的配置
        3.5 实验方法
    4 统计分析
    5 技术路线图
结果
讨论
小结
致谢
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间发表的学位论文
博士/硕士研究生学位论文指导教师评阅意见表

(10)冷刺激与高脂饮食对大鼠精子功能的影响及其生殖生物学基础的研究(论文提纲范文)

摘要
Abstract
前言
研究内容与方法
    1 冷刺激与高脂饮食对雄性SD大鼠精子功能的影响
        1.1 研究对象
        1.2 主要实验仪器
        1.3 实验试剂
        1.4 实验方法
    2 冷刺激与高脂饮食诱导建立的弱精子模型大鼠HPG轴、HPA轴、HPT轴功能的改变
        2.1 研究对象
        2.2 主要实验仪器
        2.3 实验试剂
        2.4 实验方法
    3 统计学分析方法
    4 技术路线图
结果
    1 冷刺激与高脂饮食对雄性SD大鼠精子功能的影响
        1.1 各造模组大鼠体重与饮食量变化
        1.2 各造模组大鼠摄入量
        1.3 各组大鼠精子功能评定及弱精子大鼠精子功能结果
    2 弱精子症大鼠血脂及肝功能结果
    3 冷刺激与高脂饮食诱导建立的弱精子大鼠模型HPG轴、HPA轴、HPT轴功能的改变
        3.1 弱精子症大鼠HPG轴、HPA轴、HPT轴相关激素变化结果
        3.2 弱精子症大鼠HPG轴、HPA轴、HPT轴相关组织形态学变化结果
讨论
小结
致谢
附录
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
指导教师评阅意见表

四、酒精对大鼠生殖细胞损伤的研究(论文参考文献)

  • [1]金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)临床观察及机制研究[D]. 张继伟. 中国中医科学院, 2021(02)
  • [2]大蒜素调控氧化应激及内质网应激改善膳食丙烯酰胺肝毒性机制研究[D]. 南博. 吉林大学, 2021(01)
  • [3]猪隐睾睾丸精子发生障碍的分子机制研究[D]. 范小瑞. 山西农业大学, 2021(02)
  • [4]灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究[D]. 晏斌. 中国中医科学院, 2020(01)
  • [5]低剂量持续暴露双酚A对小鼠生殖毒性的影响[D]. 张石磊. 河北农业大学, 2020(01)
  • [6]WIFI辐射对大鼠坐骨经损伤修复的影响[D]. 黄定基. 郑州大学, 2020(02)
  • [7]基于SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2通路探讨广嗣育麟汤治疗男性不育的疗效及其作用机制的研究[D]. 李琰峰. 北京中医药大学, 2020(04)
  • [8]左卡尼汀对环磷酰胺致大鼠睾丸损伤的保护作用及机制研究[D]. 曾鹏. 昆明医科大学, 2020(02)
  • [9]大豆、菠菜实和芫荽实对雄性大鼠性功能的影响及其机制研究[D]. 潘晓南. 新疆医科大学, 2020(07)
  • [10]冷刺激与高脂饮食对大鼠精子功能的影响及其生殖生物学基础的研究[D]. 童卓云. 新疆医科大学, 2020(07)

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酒精对大鼠生殖细胞损伤的研究
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