一、肾型高血压大鼠不同血管组织中血管紧张素的变化（论文文献综述）
袁晶[1]（2021）在《绝经后高血压患者中医证型分布特点及淫羊藿苷干预的相关机制研究》文中进行了进一步梳理目的:1.评价补肾法联合降压药治疗女性绝经后及围绝经期高血压的有效性和安全性。2.探讨绝经后高血压患者的中医证型分布及动态血压特点。3.探讨淫羊藿苷（icariin,ICA）对雌性去势SHR循环和心肌组织肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）的调节作用及相关机制。方法:1.系统评价和Meta分析计算机检索中国知网、维普数据库、万方数据知识服务平台、中国生物医学文献数据库、PubMed、Embase、The Cochrane Library 7个数据库,搜集有关补肾法联合降压药治疗绝经后及围绝经期高血压的随机对照试验。应用Rev Man 5.3和Stata 14.0软件进行Meta分析、发表偏倚检测、敏感性分析、亚组分析,采用TSA 0.9软件对降压疗效进行试验序贯分析。2.横断面研究以绝经后高血压患者作为研究对象,采用横断面研究方法分析一般资料、中医证型分布、昼夜节律分布特点;进一步将纳入患者分为绝经<10年组和绝经≥10年组,分析两组患者动态血压参数是否存在差异;分析年龄与动态血压参数的相关性;血压变异性（blood pressure variability,BPV）用标准差（standard deviation,SD）和变异系数（coefficient of variation,CV）表示,采用多元线性回归方法分析各变量与BPV的关系。3.动物实验9周龄雌性去势SHR48只,随机分为6组,模型组（SHR组）、雌二醇组（SHR+E2组）、ICA低剂量组（SHR+LI组）、ICA中剂量组（SHR+MI组）、ICA高剂量组（SHR+HI组）、ICA中剂量+雌激素受体拮抗剂ICI182780组（SHR+MI+ICI组）。9周龄雌性去势WKY8只作为正常对照组（WKY组）。SHR+E2组给予戊酸雌二醇（0.1 mg/kg/day）灌胃,ICA低、中、高剂量组分别给予ICA 10 mg/kg/day、20 mg/kg/day、40 mg/kg/day灌胃,SHR+MI+ICI组给予ICA 20 mg/kg/day灌胃,并予氟维斯群注射液52 mg/kg/month皮下注射。监测各组大鼠体重、血压及心率;对心脏、脾脏及肾脏进行称重并计算脏器系数;采用ELISA法检测各组大鼠血清AngⅡ、Ang（1-7）、E2水平;采用Western-blot法检测各组大鼠心肌组织 AGT1R、MAS1、ACE1、ACE2、GPR30、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平。结果:1.补肾法联合降压药治疗绝经后及围绝经期高血压的系统评价和Meta分析（1）Meta分析结果显示:最终纳入14篇文献,共1139例患者。补肾法联合降压药治疗绝经后及围绝经期高血压的降压疗效、更年期症状疗效优于西药组;SBP水平、DBP水平、kupperman评分、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）水平低于西药组;雌二醇（estradiol,E2）水平高于西药组。（2）不良反应发生率:补肾法联合降压药组低于西药组。（3）发表偏倚:对降压疗效绘制漏斗图并进行Egger’s法检验,提示纳入文献存在发表偏倚。（4）降压疗效的试验序贯分析:结果提示Meta分析可能过早出现阳性结果,可能存在假阳性结果。2.绝经后高血压患者中医证型分布及动态血压特点研究（1）本次研究共纳入214例患者,阴阳两虚型患者所占比例最高。（2）所有纳入患者中,非勺型昼夜节律患者所占比例最高。（3）绝经≥10 年组的 24hSBP、nSBP、收缩压极差（maximum-minimum difference between systolic blood pressure,MMD）、24hSBPSD、dSBPSD、24hSBPCV、dSBPCV、dDBPCV、nDBPCV 高于绝经<10 年组（P<0.05 或P<0.01）。（4）24hSBP、dSBP、nSBP、MMD、24hSBPSD、dSBPSD、nSBPSD、dSBPCV、dDBPCV 与年龄呈正相关（P<0.05 或P<0.01）;24hDBP、SBP-BPF、dDBP、nDBP、Hr与年龄呈负相关（P<0.05或P<0.01）。（5）24hSBPSD的相关因素有:MMD、MAP、日间血压负荷;24hDBPSD的相关因素有:24hDBP、DBP-BPF、MMD、高血压3级、BUN;24hSBPCV的相关因素有:24hSBP、24hDBP、MMD、日间血压负荷;24hDBPCV的相关因素有:MMD、MAP、SBP-BPF、DBP-BPF、BUN。3.淫羊藿苷通过调节RAS对雌性去势SHR发挥血压保护作用（1）平均动脉压（MAP）:与WKY组比较,SHR组MAP升高（P<0.05）;与SHR 组比较,SHR+E2 组、SHR+LI 组、SHR+MI 组、SHR+HI 组 MAP 降低（P<0.05）;与 SHR+MI 组比较,SHR+MI+ICI 组 MAP 升高（P<0.05）。（2）心率:与SHR组比较,SHR+LI组、SHR+MI组、SHR+HI组心率降低（P<0.05 或P<0.01）。（3）脏器系数:①心脏系数:与WKY组比较,6组SHR的心脏系数均升高（P<0.01）;与SHR+MI组比较,SHR+MI+ICI组心脏系数升高（P<0.05）。②左肾系数:与WKY组比较,SHR组左肾系数升高（P<0.01）;与SHR组比较,SHR+E2组左肾系数降低（P<0.05）。③右肾系数:与WKY组比较,SHR组右肾系数升高（P<0.01）;与SHR组比较,SHR+E2 组、SHR+LI 组、SHR+MI 组、SHR+HI 组左肾系数降低（P<0.05 或 P<0.01）。④脾脏系数:与WKY组比较,SHR组脾脏系数升高（P<0.01）;与SHR+MI组比较,SHR+MI+ICI组脾脏系数升高（P<0.05）。（4）ACE1-AngⅡ-AT1R轴:①ACE1蛋白:与WKY组比较,SHR组ACE1蛋白表达水平升高（P<0.01）;与SHR组比较,SHR+MI组、SHR+HI组ACE1蛋白表达水平降低（P<0.05）。②AngⅡ含量:与WKY组比较,SHR组AngⅡ含量升高（P<0.01）;与SHR组比较,SHR+E2组、SHR+MI 组、SHR+HI 组 AngⅡ含量降低（P<0.05 或P<0.01）。③AGT1R蛋白:与SHR组比较,SHR+MI组AGT1R蛋白表达水平升高（P<0.05）。（5）ACE2-Ang（1-7）-MasR轴:①ACE2蛋白:与WKY组比较,SHR组ACE2蛋白表达水平升高（P<0.05）。②Ang（1-7）含量:与WKY组比较,SHR组Ang（1-7）含量升高（P<0.01）;与SHR+E2组比较,SHR+LI组Ang（1-7）含量升高（P<0.01）;与SHR+MI组比较,SHR+MI+ICI 组 Ang（1-7）水平降低（P<0.01）。③MAS1蛋白:与WKY组比较,SHR组MAS1蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。（6）E2及其受体GPR30:①E2含量:与SHR组比较,SHR+E2组、SHR+LI组、SHR+MI组、SHR+HI组的E2含量有升高趋势（P>0.05）。②GPR30蛋白:与WKY组比较,SHR组GPR30蛋白表达水平有升高趋势（P>0.05）。（7）ERK1/2 通路:①p-ERK1/2蛋白:与WKY组比较,SHR组p-ERK1/2蛋白表达水平有升高趋势（P>0.05）;与SHR组比较,SHR+HI组p-ERK1/2蛋白表达水平降低（P<0.05）。②p-ERK1/2/ERK1/2:与 WKY 组比较,SHR 组 p-ERK1/2/ERK1/2 有升高趋势（P>0.05）;与 SHR 组比较,SHR+E2 组、SHR+HI 组 p-ERK1/2/ERK1/2 有降低趋势（P>0.05）;与 SHR+MI 组比较,SHR+MI+ICI 组 p-ERK1/2/ERK1/2 升高（P<0.01）。结论:1.针对女性绝经后及围绝经期高血压患者,补肾法联合降压药能够降低患者的收缩压和舒张压水平、改善更年期症状、改善性激素水平,疗效优于西药组。2.阴阳两虚证是绝经后高血压患者最常见的中医证型,且绝经年限较长的高血压患者的BPV高于绝经年限较短者。3.ICA能够降低雌性去势SHR的血压和心率,上述作用与调节循环和心肌组织RAS 有关。ICA 可以抑制 ACE1-AngⅡ-AT1R 轴,对 ACE2-Ang（1-7）-MasR 轴具有升高的趋势,同时该作用的发挥与抑制ERK1/2通路有关。
胡欢[2]（2021）在《Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景:高血压心肌重构主要的特征表现为左心室肥厚和间质纤维化,是心力衰竭发生的主要原因之一。在高血压心肌重构进程中,压力负荷、神经体液及细胞因子等各种刺激因素引起心肌组织中氧化应激增强和炎症反应的激活,进一步导致心肌细胞肥大、心肌成纤维细胞的活化和细胞外基质成分的合成。因此,抑制氧化应激及炎症是减轻高血压心肌重构的重要途径之一。Adropin是由能量稳态相关基因（Enho）编码的一种肽类激素,早期研究发现其在维持能量代谢平衡和改善胰岛素抵抗过程中发挥重要作用。近期越来越多的研究表明Adropin同样可以通过抗氧化应激和抗炎作用参与多种疾病的发生与发展过程,然而其在高血压心肌重构中的作用及调节机制并不明确。本研究团队前期研究发现Adropin可能在肥胖青少年患者的血管内皮功能中发挥保护作用。基于Adropin在抗氧化应激、抗炎、维持能量代谢平衡、改善胰岛素抵抗及保护血管内皮功能等诸多病理生理过程中发挥重要作用,本研究团队推测Adropin可能参与了高血压心肌重构进程。本研究从临床、动物及细胞水平探究了Adropin在高血压心肌重构中的作用及其相关机制。第一部分高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义目的:探讨高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义。方法:本研究纳入于南昌大学第二附属医院心血管内科就诊的高血压患者86例以及于南昌大学第二附属医院体检科就诊的健康对照者12例,收集入组人群一般资料、临床指标结果、心脏彩超数据等。采用ELISA法检测入组人群血清Adropin水平,分析其在高血压患者和健康对照人群中的变化,进一步探究Adropin在高血压伴左室肥厚患者和高血压不伴左室肥厚对照人群血清中的变化,采用多元线性回归分析Adropin与左室肥厚标志物左室质量指数的关系,采用ROC曲线分析检测Adropin在高血压LVH中可能的诊断价值。结果:1.与健康对照人群相比,高血压患者血清Adropin表达水平显着降低,健康对照组Adropin水平:9.06±2.80 pg/mL;高血压组Adropin水平:4.64±0.64 pg/mL。2.与高血压不伴左室肥厚对照人群相比,高血压伴左室肥厚人群年龄更高,Adropin表达水平显着降低,其中高血压不伴左室肥厚对照组Adropin水平:4.79±0.65 pg/mL;高血压伴左室肥厚组:4.15±0.21 pg/mL。3.运用多元线性回归分析发现Adropin与左心室质量指数（LVMI）呈负相关性。当调整年龄、性别和身体质量指数（Body Mass Index,BMI）混杂因素后,血清Adropin水平每增加一个单位,LVMI下降7.31个单位:β（95%CI）=-7.31（-13.95,-0.67）,P=0.034。进一步将Adropin水平按三分位处理,与T1组（<4.36pg/mL）人群相比,T2（4.36 to<4.61 pg/mL）组和T3（≥4.61 pg/mL）组人群中的LVMI水平均显着降低[T2:β（95%CI）=-18.82（-28.21,-9.42）,P<0.001;T3:β（95%CI）=-20.76（-30.36,-11.15）,P<0.001]。进一步调整年龄、性别、BMI、收缩压、舒张压、总胆固醇、血糖、谷草转氨酶及谷丙转氨酶混杂因素后,血清Adropin水平每增加一个单位,LVMI下降7.52个单位:β（95%CI）=-7.52（-14.32,-0.71）,P=0.034。进一步将Adropin水平按三分位处理,与T1组（<4.36 pg/mL）人群相比,T2（4.36 to<4.61 pg/mL）组和T3（≥4.61 pg/mL）组人群中的LVMI水平均显着降低[T2:β（95%CI）=-17.59（-27.53,-7.65）,P=0.001;T3:β（95%CI）=-20.72（-30.41,-11.04）,P<0.001]。4.ROC曲线分析Adropin水平在高血压左室肥厚中的诊断价值:血清Adropin的曲线下面积为0.936,在4.265 pg/mL临界点处,特异性为89.5%,敏感性为91%,且具有统计学意义。结论:高血压患者血清Adropin水平低于健康对照者,高血压伴左室肥厚患者血清Adropin低于高血压不伴左室肥厚对照者,Adropin与LVMI呈负相关,且其具有作为诊断高血压左室肥厚标志物的可能性。第二部分重组Adropin对自发性高血压大鼠心肌重构的影响目的:探究自发性高血压大鼠血清Adropin水平的变化并观察重组Adropin治疗12周后对自发性高血压大鼠心肌重构的作用及其相关机制。方法:1.纳入6只16周龄的雄性自发性高血压大鼠（Spontaneously Hypertensive Rat,Rat）为实验组即高血压组（SHR）,6只同周龄的雄性Wistar-Kyoto大鼠为对照组即正常血压组（WKY）。使用无创血压仪测量大鼠血压,超声心动仪检测心脏功能指标,HE染色观察心肌组织病理变化,WGA染色观察心肌细胞大小变化,Masson染色观察心肌组织纤维化水平,RT-PCR法检测心肌组织中肥厚标志物ANP、BNP、β-MHC及纤维化标志物Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平,验证自发性高血压大鼠心肌重构模型。通过ELISA法,免疫组织化学法,RT-PCR法及Western Blot法检测自发性高血压大鼠心脏组织中Adropin的表达变化。2.我们构建并合成具有Adropin蛋白生物学活性的重组Adropin34-76多肽,纳入12只4周龄的雄性SHR及6只雄性WKY作为对照组。进一步将SHR分为2组:SHR组（n=6）和SHR接受Adropin处理组（n=6）。Adropin处理组腹腔注射Adropin（2.1μg/kg/d）,SHR组注射同等剂量的赋形剂。处理过程中每两周检测一次血压,处理12周后完成各项反映心肌重构的指标检测。通过ELISA法及Western Blot法检测大鼠血清及心肌组织中炎症因子IL-6及TNF-α的表达水平。通过DHE染色、组织MDA和SOD含量检测法进一步探究大鼠心肌组织中的氧化应激水平。结果:1.相比16周WKY组,16周SHR组大鼠SBP,DBP,心率及心脏重量及心指数（HW/BW）显着增高。彩超分析发现,相比WKY组,SHR组大鼠舒张末期室间隔厚度（IVS;d）,舒张末期左室后壁厚度（LVPW;d）显着增加,舒张末期左室内径（LVID;d）显着降低,而二者左心室射血分数（EF）和缩短分数（FS）无明显差异。组织病理染色发现,相比WKY组,HE染色提示SHR组大鼠心肌组织出现排列紊乱甚至断裂现象,WGA染色提示SHR组大鼠心肌细胞相对面积更大,Masson染色提示SHR组大鼠心肌组织纤维化水平显着增加,RT-PCR法提示SHR组大鼠心肌组织ANP、BNP、β-MHC、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平更高。ELISA,免疫组织化学染色及RT-PCR检测提示SHR大鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平显着降低。2.4周龄的大鼠分为三组:WKY组;SHR组;SHR+Adropin组。Adropin处理过程中,相比WKY组,SHR组大鼠的SBP和DBP水平随着年龄的增加显着升高,而Adropin持续处理12周能显着延缓SHR的SBP和DBP的水平增加进展。彩超分析发现,三组在4周龄基线水平时的IVS;d、LVPW;d、LVID;d、EF及FS水平无明显统计学差异。而在Adropin处理12周后的16周龄时,相比WKY组,SHR组的IVS;d,LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平显着下降,而SHR+Adropin组的IVS;d,LVPW;d水平较SHR组显着降低,LVID;d水平显着增高。三组的EF和FS水平无明显统计学差异。HE、WGA及Masson染色发现,相比WKY组,SHR组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin干预能显着降低SHR组大鼠心肌肥大和纤维化水平。RT-PCR法提示,相比WKY组,SHR组心肌组织ANP、BNP、β-MHC、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平更高,而Adropin干预能显着降低其水平。进一步通过ELISA和Western Blot分析发现,相比WKY组,SHR组血清及心肌组织炎症因子IL-6和TNF-α的表达水平显着增高,而Adropin干预能显着降低二者的表达水平。心肌组织DHE染色、MDA和SOD含量检测提示,相比WKY组,SHR组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD水平显着下降,而Adropin处理能显着降低心肌组织活性氧水平,降低MDA含量,提高SOD的表达水平。结论:16周龄的自发性高血压大鼠伴有心肌重构,Adropin表达水平的下降。重组Adropin治疗12周后显着减轻自发性高血压大鼠的心肌重构水平,降低心脏组织炎症水平及改善氧化应激。第三部分Adropin在小鼠病理性心肌重构中的作用及机制目的:探究高血压心肌重构常见刺激因素压力负荷增加和血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构过程中Adropin水平的变化,观察重组Adropin腹腔注射对病理性心肌重构的作用,观察Adropin敲除对病理性心肌重构的作用及其相关机制。方法:1.纳入28只8周龄的C57BL/6小鼠行主动脉弓缩窄（Transverse Aortic Constriction）手术及皮下埋植入式胶囊渗透压泵持续灌注血管紧张素Ⅱ构建小鼠病理性心肌重构模型。小鼠分为4组:假手术Sham组（n=8）,TAC组（n=8）;胶囊渗透压泵持续灌注生理盐水（Normal Saline,NS）组（n=6）,胶囊渗透压泵持续灌注血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）组（n=6）。超声心动仪检测心脏功能指标,HE染色观察心肌组织病理变化,WGA染色观察心肌细胞大小变化,Masson染色观察心肌组织纤维化水平,验证小鼠病理性心肌重构模型。通过ELISA法,RT-PCR法及Western Blot法检测小鼠病理性心肌重构中Adropin的表达变化。2.构建并合成具有Adropin蛋白生物学活性的重组Adropin34-76多肽,纳入48只8周龄的C57BL/6小鼠。进一步将小鼠分为8组:假手术Sham给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+Sham,n=6）,假手术Sham给予Adropin处理组（Vehicle+Adropin,n=6）,TAC给予赋形剂处理组（Vehicle+TAC,n=6）,TAC给予Adropin处理组（Adropin+TAC,n=6）;含生理盐水（NS）泵植入术给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+NS,n=6）,含生理盐水（NS）泵植入术给予Adropin处理组（Adropin+NS,n=6）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入术给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+Ang Ⅱ,n=6）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入术给予Adropin处理组（Adropin+Ang Ⅱ,n=6）。Adropin处理组腹腔注射Adropin（450 nmol/kg/d）2周,Vechile组注射同等剂量的赋形剂。Ang Ⅱ组皮下灌注Ang Ⅱ（1500 ng/kg/d）2周,NS组皮下灌注等剂量的正常生理盐水。处理2周后完成各项反映心肌重构的指标检测,通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究Adropin治疗对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2/HO-1信号通路的影响。3.构建Adropin基因敲除小鼠,在血管紧张素Ⅱ模型中进一步进行功能缺失性研究。纳入10只8-10周龄Adropin基因敲除小鼠和10只8-10周龄同窝出生的野生型小鼠。小鼠分为4组:含生理盐水（NS）泵植入野生型小鼠组（WT+NS,n=5）,含生理盐水（NS）泵植入Adropin基因敲除小鼠组(Adropin-/-+NS,n=5),含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入野生型小鼠组（WT+Ang Ⅱ,n=5）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入Adropin基因敲除小鼠组(Adropin-/-+Ang Ⅱ,n=5)。处理2周后完成各项反映心肌重构的指标检测,通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究各组小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究Adropin敲除对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2表达水平的影响。4.构建腺相关病毒AAV9-Nrf2-GFP及空载对照病毒（Vector）,经尾静脉注射特异性上调小鼠心肌组织Nrf2的表达,在Adropin基因缺失加重血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构实验中进一步进行功能回复性研究。纳入10只8-10周龄Adropin基因敲除小鼠,小鼠分为2组:尾静脉注射Vector的4周后皮下植入含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）微量泵组（Vector+Ang Ⅱ,n=5）;尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP的4周后皮下植入含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）微量泵组（AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ,n=5）。Ang Ⅱ处理2周后完成完成各项反映心肌重构的指标检测。通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达情况。结果:1.彩超结果发现,相比Sham组,TAC组的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而EF及FS二者无明显差异;相比NS组,Ang Ⅱ组的IVS;d、LVPW;d、EF及FS水平显着增高,LVID;d水平下降。组织病理染色发现,相比Sham组,HE染色提示TAC组小鼠心肌组织出现排列明星紊乱以及断裂现象,WGA染色提示TAC组小鼠心肌细胞相对面积更大,Masson染色提示TAC组小鼠心肌组织纤维化水平显着增加。相比NS组,Ang Ⅱ组小鼠心脏出现相似的组织病理学改变。ELISA,RT-PCR及West检测提示TAC小鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平较Sham组显着降低,而Ang Ⅱ小鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平较NS组显着降低。2.在TAC模型实验中,彩超结果结果,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而Adropin+TAC组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平较Vehicle+TAC显着下降,LVID;d水平明显上升。HE、WGA及Masson染色发现,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin干预能显着降低TAC组小鼠心肌肥大和纤维化水平。Western Blot法进一步分析发现,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组小鼠心肌组织肥厚标志物ANP及纤维化标志物Collagen Ⅰ蛋白表达水平明显升高,而Adropin治疗能显着降低二者水平。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD蛋白表达水平显着下降,而Adropin干预能显着降低心肌组织活性氧水平,降低MDA含量,提高SOD的表达水平。在Ang Ⅱ模型实验中,可以发现类似的Adropin治疗逆转病理性心肌重构,改善氧化应激的现象。进一步通过Western Blot研究Adropin治疗对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2/HO-1信号通路的影响发现,相比Vehicle+NS组,Vehicle+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织中的胞核Nrf2和HO-1的表达水平显着升高,总NQO-1表达水平显着下降,而Adropin治疗组即Adropin+Ang Ⅱ小鼠心肌组织中的胞核Nrf2和HO-1的表达水平相比Vehicle+Ang Ⅱ组进一步升高,胞浆NQO-1的表达水平上升。Adropin干预同样能减轻Ang Ⅱ刺激引起的心肌组织凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达水平。3.构建Adropin基因敲除小鼠,验证Adropin缺失对血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构模型的影响。Western Blot研究发现,相比野生型小鼠,Adropin基因（Enho）敲除小鼠心肌组织中无Adropin蛋白的表达,证明Adropin基因敲除小鼠模型的成功构建。彩超分析发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而Adropin-/-+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平相比WT+Ang Ⅱ组进一步升高,LVID;d水平进一步下降,二者具有统计学意义。HE、WGA及Masson染色发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin敲除能进一步增加Ang Ⅱ组小鼠心肌肥大和纤维化水平。Western Blot法进一步分析发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织肥厚标志物ANP及纤维化标志物Collagen I蛋白表达水平明显升高,而Adropin敲除能进一步升高二者水平,且二者具有统计学意义。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD蛋白表达水平显着下降,而Adropin敲除能进一步增加心肌组织活性氧水平,增加MDA含量,降低SOD的蛋白表达水平。RT-PCR和Western Blot法分析发现,相比WT+Ang Ⅱ,Adropin-/-+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织中Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显着下降,进一步提示Adropin可能通过Nrf2信号通路参与Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构。4.构建腺相关病毒AAV9-Nrf2-GFP,验证心肌组织Nrf2过表达在Adropin基因缺失加重血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构中的回复性作用。冰冻切片荧光显像、RT-PCR和Western Blot分析发现,相比尾静脉注射NS组,尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP及Vectord的Adropin敲除小鼠心脏组织出现荧光蛋白表达。相比尾静脉注射Vectro组,尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP组小鼠心肌组织Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显着增高,证明了AAV9-Nrf2-GFP具有上调Adropin-/-小鼠心肌组织中Nrf2表达水平的能力。心脏彩超分析发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着下降,LVID;d水平升高,二者具有统计学意义。HE、WGA及Masson染色发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌细胞相对面积显着下降,心肌组织纤维化水平显着降低。RT-PCR分析发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌组织肥厚标志物ANP、BNP、β-MHC及纤维化标志物Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA水平显着降低。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌组织ROS水平和MDA含量明显降低,而SOD水平明显升高。Nrf2过表达干预同样能减轻Ang Ⅱ刺激Adropin基因敲除小鼠引起的心肌组织凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达水平。结论:Adropin处理可以延缓压力负荷及血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠心肌病理性重构,Adropin敲除可以加重血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠心肌病理性重构,Nrf2/HO-1信号通路可能在其中发挥作用。第四部分Adropin在Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用及其机制目的:细胞水平探究Adropin是否参与了Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成及相关机制。方法:1.探究血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）处理心肌成纤维细胞对Adropin表达水平的影响,分为四组:Control组,Ang Ⅱ 0.1μM组,Ang Ⅱ 1μM组和Ang Ⅱ 2μM组,处理时间为24小时。采用RT-PCR和Western Blot法检测Adropin的mRNA及蛋白表达水平变化。采用外源添加重组Adropin及WB的方法观察其对Ang Ⅱ刺激CFs细胞Adropin蛋白表达变化的影响。2.采用外源添加重组Adropin的方法,在Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成中进行功能型实验,分为四组:Vehicle组,Adropin组,Vehicle+Ang Ⅱ组及Adropin+Ang Ⅱ组。其中,采用噻唑蓝（MTT）法检测心肌成纤维细胞的增殖;采用Western Blot检测心肌纤维化标志分子Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及CTGF指标的表达。3.探究Adropin对Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成进程中的氧化应激指标ROS、MDA及SOD水平的影响,Western Blot法研究外源添加重组Adropin对Nrf2/HO-1信号通路的影响。Nrf2的DNA结合活性实验分析Adropin处理对血管紧张素Ⅱ刺激心肌成纤维细胞过程中细胞内Nrf2的DNA结合活性的影响。结果:1.RT-PCR和Western Blot实验提示,Adropin的mRNA及蛋白的表达水平随着Ang Ⅱ浓度增高下降,外源添加重组Adropin处理能提高处于Ang Ⅱ刺激下的纤维细胞中的Adropin水平。2.MTT检测发现,相比对照Vehicle组,血管紧张素Ⅱ刺激可引起心肌成纤维细胞增殖水平的增加,而Adropin处理能显着降低血管紧张素Ⅱ刺激引起的增殖水平增加。Western Blot分析提示,相比Vehicle组,血管紧张素Ⅱ刺激引起心肌成纤维细胞中的Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ和CTGF蛋白表达水平增高,而Adropin处理能显着降低三者的水平。3.细胞氧化应激水平检测发现,相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞内活性水平和MDA水显着增高,而Ang Ⅱ+Adropin组活性氧及MDA水平较Ang Ⅱ组显着下降。相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞中SOD水平显着降低,而Ang Ⅱ+Adropin组SOD水平较Ang Ⅱ组显着上升。进一步分析Adropin干预对心肌成纤维细胞在Ang Ⅱ刺激下的Nrf2/HO-1信号通路的影响发现,相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞胞核Nrf2和HO-1蛋白表达水平显着增高,Adropin处理进一步增加了胞核Nrf2和HO-1的蛋白表达。相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞胞总的Nrf2蛋白表达水平增高,NQO-1表达水平下降,而Adropin处理后进一步提高总的Nrf2和NQO-1蛋白的表达。此外,Nrf2的DNA结合活性实验分析发现,相比vehicle组,Ang Ⅱ刺激引起Nrf2的转录活性增加,Adropin处理能进一步显着增加Nrf2的转录活性。结论:Adropin处理可能通过增强Nrf2/HO-1信号通路提高细胞抗氧化能力,减轻细胞活性氧水平从而抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原合成。
白丛霞[3]（2021）在《OVGP1升高血压的机制研究及高血压脑出血circRNA标志物研究》文中研究说明目的:高血压是一种由环境和遗传因素共同决定的复杂疾病。近年来有证据表明表观遗传参与高血压病理过程,但其机制尚未阐明。DNA甲基化是表观遗传学调控的方式之一,本课题组前期发现高血压人群中输卵管糖蛋白1（Oviductalglycoprotein 1,OVGP1）启动子区cg20823859位点甲基化程度降低,在高血压人群血浆和大鼠球囊损伤血管重塑模型中OVGP1表达上调。然而,OVGP1参与血压调节和血管重塑的具体机制尚不清楚。本研究主要通过构建转基因和敲除小鼠模型,观察过表达和敲除OVGP1后血压和血管重塑的变化及分子机制,旨在探讨OVGP1参与血压调节和血管重塑的具体分子机制,为高血压新药的开发及血管重塑性疾病的治疗提供理论依据。方法与结果:通过构建全身性Ovgp1转基因小鼠（Transgenic,TG）,TG和同窝对照小鼠（Wild type,WT）采用尾套法和电子监测血压发现TG小鼠的收缩压和舒张压均高于WT同窝小鼠;血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）（490ng/kg/min）诱导后,与WT小鼠相比,TG组小鼠的血压显着升高。采用CRISPR/CAS9的技术构建了 Ovgp1全身性敲除小鼠（Knockout,KO）。通过尾套法和电子监测血压发现,与对照组（WT）相比,KO组小鼠的血压在基础水平和AngⅡ诱导后在均低于其同窝WT小鼠。为了探讨OVGP1引起血压升高的可能机制,本研究采用免疫组织化学染色和免疫荧光染色的方法检测了小鼠不同组织中OVGP1的表达,结果显示OVGP1在全身组织广泛性表达,在血管组织中表达较高,主要在血管中膜平滑肌层表达。在重塑血管中表达升高,且主要在新生的内膜中表达,主要是增生的平滑肌细胞。小鼠血尿生化指标检测发现过表达OVGP1对小鼠肾功能无显着影响。通过小动物超声观察到过表达OVGP1后可增加主动脉直径,但对心脏结构和射血功能均无明显影响,因此推测OVGP1可能通过影响血管重塑发挥作用。采用AngⅡ诱导的血管重塑模型,经超声、HE、Masson染色显示TG小鼠主动脉壁增厚,胶原沉积增加;实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）显示TG组小鼠炎症因子IL-6、MCP-1表达升高,纤维化因子CollagenⅠ表达升高,α-Smooth Muscle Actin（α-SMA）表达降低;免疫荧光染色表明TG组CollagenⅠ表达升高,α-SMA表达降低;DHE染色发现与WT相比,TG组血管活性氧（Reactive oxygen species,ROS）产生增加,RT-PCR检测发现TG组NADPH、NOX2表达水平上调。进一步病理染色结果显示敲除OVGP1减轻了AngⅡ诱导的血管壁增厚,胶原沉积和氧化应激;RT-PCR检测发现敲除OVGP1减轻了AngⅡ诱导的炎症因子IL-6、MCP-1表达升高。进一步构建了小鼠股动脉损伤模型,分别在第14天和第28天取材进行HE染色和新生内膜厚度、内膜与中膜比（I/M）统计。结果发现,过表达OVGP1促进血管损伤后内膜增生,敲除OVGP1抑制血管损伤后内膜增生。免疫荧光染色发现过表达OVGP1促进新生内膜中PCNA和MMP9表达升高。血管张力实验发现,与WT相比,TG组小鼠苯肾上腺素（Phenylephrine,PHE）诱导的肠系膜上动脉血管收缩张力增加,内皮依赖性舒张剂乙酰胆碱（Acetylcholine,ACH）和非内皮依赖性舒张剂硝普纳（Sodium Nitroprusside,SNP）诱导的肠系膜上动脉血管舒张功能降低。在AngⅡ诱导后,进一步加重了上述的血管功能障碍。KO小鼠血管张力实验发现,与WT相比,敲除OVGP1减轻了AngⅡ诱导的肠系膜上动脉血管功能障碍。为探讨OVGP1在平滑肌细胞中的功能机制,本研究在人主动脉平滑肌细胞中过表达OVGP1后采用转录组测序,共检测到781个差异基因,与敲低OVGP1的表达谱芯片结果取交集,共得到155个共同差异表达的基因。GO和KEGG分析发现,差异基因主要参与胞外基质重塑,调控细胞增殖,磷酸化信号转导,参与细胞迁移,炎症反应等过程,参与Wnt信号通路、PI3K-AKT等信号通路。这些通路与血管重塑密切相关,选取在多条通路中均有参与的基因进行RT-PCR和Western blot验证,发现WNT2和IGFBP5在过表达OVGP1后显着上调,可能是OVGP1的靶基因之一。采用CCK8和Transwell小室迁移实验,发现过表达OVGP1引起平滑肌增殖、迁移和ROS产生,在PDGF-BB诱导后加重了这一反应,敲低OVGP1后抑制了PDGF-BB引起的增殖和迁移。PI3K-AKT信号通路在上述结果中被显着富集,且在心血管疾病中具有重要的作用。检测过表达和敲低OVGP1后AKT通路变化,结果显示,过表达OVGP1后AKT的磷酸化水平升高,PDGF-BB诱导后进一步升高;敲低OVGP1抑制了AKT磷酸化水平,表明AKT是OVGP1的下游通路。为进一步明确OVGP1的作用机制,本研究采用质谱检测的方法筛选OVGP1相互作用蛋白并采用ColP进行验证,结果发现OVGP1与MYH9在平滑肌细胞中相互作用,并在平滑肌细胞和主动脉血管中存在共定位。敲低MYH9抑制了过表达OVGP1引起的平滑肌细胞氧化应激和肥大,抑制了OVGP1下游通路AKT的磷酸化水平。在动物水平上给予MYH9抑制剂布雷他汀（Blebbistatin,BLEB）后,观察TG小鼠血压水平和血管重塑情况,结果显示,与对照组（Saline）相比,MYH9抑制剂BLEB显着改善了过表达OVGP1引起的血管重塑和血压升高;改善了过表达OVGP1引起的血管功能障碍。结论:OVGP1通过与MYH9相互作用,激活下游AKT信号通路,ROS产生增加,引起血管氧化应激、炎症和胶原沉积,导致血管重塑及功能障碍,引起血压升高。目的:环状RNA（circRNA）由于在外周血中较为稳定,可作为疾病诊断较有潜力的生物标志物,circRNA参与缺血性脑卒中的病理生理过程,然而在出血性脑卒中的表达特征和功能机制尚不清楚。本研究旨在探讨高血压脑出血（ICH）后circRNA的表达特征和潜在的诊断价值。方法与结果:本研究采用转录组测序（RNA-seq）的方法在发现人群（44例ICH患者,42例高血压（HTN）对照和43例脑梗死（CI）患者）和独立的验证人群（20例ICH患者,18例HTN对照和16例CI患者）中检测circRNA的表达谱。通过在两个人群中进行ICH vs HTN和CI vs HTN比较,发现15个circRNA包括5个上调和10个下调circRNA仅在ICH中一致性表达。进一步采用实时定量聚合酶链反应在所有样本中对候选circRNA进行验证,结果发现,与HTN和CI相比,ICH中的 hsacirc0001240 和 hsacirc0001947 表达上调,hsacirc0001386 表达下调。采用逻辑回归分析发现,与HTN相比,3个circRNA组合诊断ICH的曲线面积为0.92,敏感性为86%,特异性为88%。结合ICH危险因素,3个circRNA组合诊断ICH的曲线面积为 0.97。Spearman 相关性分析表明,hsacirc0001240,hsacirc0001947和hsacirc0001386的表达水平与ICH危险因素相关。circRNA-miRNA-mRNA网络分析表明,circRNA的靶标miRNA和mRNA的功能与ICH的病理过程相关,包括赖氨酸降解,脂肪酸代谢与生物合成,整联蛋白细胞表面相互作用和免疫系统功能。结论:这是首次报道ICH外周血中circRNA的表达谱,并提出三种circRNA可作为ICH的潜在生物标志物。
金圣博[4]（2020）在《基于Toll样受体信号介导炎症反应探讨温针灸对自发性高血压大鼠的抗炎机制》文中进行了进一步梳理目的:本实验以自发性高血压大鼠为动物模型,在“从脾论治”高血压病的理论指导下,探寻温针灸足三里穴对自发性高血压大鼠降压机制,同时通过Toll受体信号通路（TLR4/My D88/NF-κB）介导下游炎症反应,从而探讨温针灸对自发性高血压大鼠抗炎机制及内皮细胞保护作用机制,为高血压病中医药临床防治提供可靠的基础理论依据。材料与方法:将10只雄性京都种大鼠（WKY）纳入空白组,依照随机数字表格法将40只雄性自发性高血压大鼠（SHR）随机分至模型组、温针灸组、针刺组、艾灸组,每组10只。常规饲料适应性喂养一周,采用智能无创血压计测量各组大鼠尾动脉血压,测量3次取平均值。开始实验,予正常组和模型组大鼠单纯固定20min,日一次,不予针灸干预;予温针灸组大鼠温针灸双侧足三里穴20min;予针刺组大鼠针刺双侧足三里穴20min;予艾灸组大鼠艾灸双侧足三里穴20min,日一次,连续治疗15天,同时测量实验开始后的第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21天上午9点～11点的各组大鼠血压,连续测量3次取平均值,录入Excel并待统计。治疗结束,予各组大鼠水合氯醛（10%）腹腔麻醉,固定、脱毛、消毒,沿腹中线开腹,暴露腹主动脉并迅速采血,将血液离心后取上清液放入无菌EP管中冻存备用,采用ELISA法检测血清炎症因子IL-6、IFN-β、TNF-α含量;血清免疫指标Ig A、Ig M、Ig G含量;血管收缩因子Ang-Ⅱ、ET-1、VEGF含量。取一段完整的腹主动脉1cm,漂洗后用4%多聚甲醛溶液固定,HE染色法进行修块、包埋、制片,荧光显微镜下观察腹主动脉壁病理形态学变化。探查腹部,迅速取脾脏组织50mg放入EP管中冻存备用,HE染色法将固定好的大鼠脾脏组织修块、包埋、制片,荧光显微镜下观察脾脏组织病理学改变及炎性细胞浸润状态;采用Western Blot法,取脾脏组织50mg,研磨、离心,吸取上清液,提取脾脏组织蛋白质,使用BCA检测法测定蛋白质浓度,通过Image J软件计算灰带条图片灰度值,定量分析出各组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达量及NF-κB p65蛋白磷酸化水平;取脾脏组织100mg,提取大鼠脾脏组织m RNA,采用q PCR法,通过逆转录反应、PCR扩增反应,导出q PCR数据并计算分析出TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA的表达水平。实验相关数据使用SPSS 22.0软件进行统计学分析。实验结果以均数±标准差（x±s）表示;组间数据差异比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）,以P<0.05表示具有统计学差异。结果:1.各组大鼠治疗前后血压变化:实验第2天温针灸组、针刺组血压开始逐渐下降,实验第7天血压开始显着下降,温针灸组下降幅度大于针刺组;实验第15天实验干预结束,血压降幅明显程度依次为温针灸组、针刺组、艾灸组;实验干预结束后继续测量血压至第21天发现,温针灸组与艾灸组血压较为平稳,无明显浮动,而针刺组、模型组、正常组血压均有不同程度上浮,其中针刺组血压上升幅度较为明显。2.各组大鼠脾脏动脉周围淋巴鞘及淋巴细胞分布情况:正常组与温针灸组白髓面积相对较大,动脉周围淋巴鞘组织较厚,可清晰观察到鞘内侧淋巴小结,鞘外侧分布大量且密集的淋巴细胞;而模型组、针刺组和艾灸组白髓和脾小结所占面积均有不同程度缩小,动脉周围淋巴鞘显着缩小,鞘周围淋巴细胞分布也较为稀少,其中以模型组缩小程度最为明显。3.各组大鼠血清炎症因子IL-6、IFN-β、TNF-α含量分析:与正常组比较,模型组、针刺组、艾灸组IL-6、TNF-α含量显着升高,IFN-β含量显着降低;温针灸组TNF-α含量显着升高,IFN-β含量显着降低。与模型组比较,温针灸组IL-6、TNF-α含量显着降低、IFN-β含量显着升高;针刺组TNF-α含量显着降低,艾灸组IFN-β含量显着升高。与温针灸组比较,针刺组与艾灸组IL-6、TNF-α含量显着升高,IFN-β含量显着降低。与针刺组比较,艾灸组TNF-α含量显着升高。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。4.血压异常与免疫炎症状态之间存在密切关联且相互影响:大鼠收缩压、舒张压与IL-6、TNF-α含量之间呈正相关,与IFN-β含量之间呈负相关,说明随着大鼠血压值的升高,血清内IL-6、TNF-α含量也随之增加,加快血清炎症因子的表达,而IFN-β含量随之降低。5.Toll样受体信号通路（TLR4/My D88/NF-κB）中的各信号分子蛋白表达及NF-κB p65磷酸化水平:与正常组比较,模型组、针刺组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高,温针灸组只有TLR4蛋白表达和NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高,而艾灸组TLR4、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高;与模型组相比,温针灸组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着降低;与温针灸组比较,针刺组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高,而艾灸组TLR4、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。6.Toll样受体信号通路（TLR4/My D88/NF-κB）中的各信号分子基因表达情况:与正常组比较,模型组、针刺组、艾灸组大鼠脾脏组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达水平显着升高,温针灸组TLR4、My D88表达水平显着升高;与模型组比较,温针灸组大鼠脾脏组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达水平显着降低,针刺组TLR4表达水平有所降低,而艾灸组TLR4、My D88 m RNA表达水平下降;与温针灸组比较,针刺组和艾灸组大鼠脾脏组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达水平显着升高。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。7.各组腹主动脉壁HE染色结果分析:正常组主动脉壁内膜光滑完整,各层细胞排列有序,内皮细胞未见脱落、增生,中膜平滑肌细胞及弹性纤维紧密排列有序;模型组腹主动脉壁内膜明显增生、增厚、凸起,内皮细胞存在脱落情况,中膜平滑肌层排列混乱,有增生、肥大,部分区域出现变形、萎缩,弹性纤维间隔参差不齐,偶有断裂、皱褶现象,外膜细胞欠平整,偶有脱落情况;温针灸组腹主动脉壁内膜略粗糙,少许内皮细胞脱落,中膜平滑肌细胞排列偶有弯曲、褶皱,弹性纤维间隙大致均匀,部分出现缩小现象;针刺组大鼠腹主动脉壁内膜粗糙、欠平整,内皮细胞存在脱落现象,中膜平滑肌细胞增生、肥大、排列紊乱,弹性纤维出现褶皱、变形,间隙欠均匀,部分外膜出现突起、变形及细胞脱落现象;艾灸组大鼠腹主动脉壁内膜褶皱、变形,内皮细胞有脱落现象,中膜平滑肌细胞部分萎缩、减少,排列欠整齐,弹性纤维间隙不均匀,外膜欠光滑,偶有增生现象。8.各组血清免疫学指标比较:与正常组比较,模型组和艾灸组血清Ig A、Ig G含量显着降低,血清Ig M含量显着升高,而针刺组血清Ig A含量显着降低;与模型组比较,温针灸组血清Ig A、Ig G含量显着升高,艾灸组血清Ig G含量显着降低;与温针灸组比较,针刺组血清Ig A含量显着降低,艾灸组血清Ig A、Ig G含量显着降低;与针刺组比较,艾灸组血清Ig G含量显着降低。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。9.各组血清AngⅡ、ET-1、VEGF含量比较:与正常组比较,模型组、艾灸组血清AngⅡ、ET-1、VEGF含量显着升高,温针灸组血清ET-1含量显着升高,针刺组血清AngⅡ、ET-1含量显着升高;与模型组比较,温针灸组AngⅡ、ET-1、VEGF含量显着降低,针刺组ET-1、VEGF含量显着降低,艾灸组ET-1含量显着降低;与温针灸组比较,针刺组ET-1含量显着增高,艾灸组AngⅡ、ET-1、VEGF含量显着增高,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:1温针灸足三里可显着降低自发性高血压大鼠血压,疗效平稳、持久。2血压异常与免疫炎症状态之间存在密切关联且相互影响;温针灸足三里穴可显着改善自发性高血压大鼠体内存在的炎症状态。3温针灸足三里穴可通过抑制大鼠脾组织Toll样受体信号通路中TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白及m RNA表达调控信号传导。4温针灸足三里穴可通过调控TLR4/My D88/NF-κB信号通路,减轻血清炎症状态,提高血清抗炎能力,良性调控血管舒缩功能,从而降低炎性损伤程度,发挥对内皮细胞的保护作用。
王瑞钰[5]（2020）在《TXNIP介导高血压血管内皮功能障碍的实验研究》文中认为第一部分高血压诱导血管内皮细胞TXNIP表达上调目的:高血压病程中伴随着明显的“氧化-抗氧化”失衡,氧化应激是导致血管内皮细胞功能障碍的重要原因之一。硫氧还蛋白互作蛋白（thioredoxin interacting protein,TXNIP）是体内重要的促氧化蛋白,在多种病理条件下可以被激活,进而促进组织细胞发生氧化性损伤。本部分主要探讨高血压状态下血管内皮细胞中TXNIP的表达变化及其影响机制。方法:使用“两肾一夹”（two-kidney and one-clip,2K1C）构建高血压大鼠动物模型,将30只雄性SD大鼠随机分为:正常对照组（control）、假手术组（sham）、高血压组（hypertension）,每组10只。使用无创尾动脉血压测量仪定期监测各组大鼠的血压和心率,排除建模不成功的大鼠。4周后收取各组大鼠心脏、主动脉和颈动脉进行苏木精-伊红染色、免疫组化和Western blot检测;同时使用酶联免疫吸附法检测大鼠血浆血管紧张素（angiotensin,Ang）Ⅱ的浓度。体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）,外源性使用Ang Ⅱ刺激细胞,模拟高血压状态下的内皮损伤;检测不同浓度和时间Ang Ⅱ处理后HUVEC中TXNIP的表达变化。使用Losartan（AT-1R阻断剂）和Tempol（一种可透膜的抗氧化剂）预处理HUVEC后,分别使用Western blot和细胞免疫荧光检测Ang Ⅱ刺激状态下HUVEC中TXNIP的表达变化。结果:（1）建模后高血压组大鼠的血压逐渐升高,术后4W时,高血压组的收缩压（181±6 vs.120±5 mmHg;P<0.01）和舒张压（156±8 vs.105±3 mmHg;P<0.01）均明显高于假手术组,各组间心率无显着变化。（2）与假手术组相比,高血压大鼠的心脏质量指数（4.38±0.16vs.3.67±0.19;P<0.05）、心肌细胞面积（586±44 vs.353±27μm2;P<0.01）、颈动脉和主动脉中膜厚度（38.28±2.37 vs.23.64±1.68μm;82.04±2.52 vs.54.68±1.43μm;均P<0.05）均显着增加,血浆Ang Ⅱ的浓度也明显升高（556.18±9.14 vs.501.78±7.16 pg/mL,P<0.01）。（3）与假手术组相比,高血压大鼠颈动脉和主动脉血管组织中TXNIP的蛋白表达水平明显升高,免疫组化进一步显示血管内皮细胞中TXNIP的升高最为显着。（4）体外实验发现Ang Ⅱ可以上调HUVEC中TXNIP的蛋白表达,且具有一定的时间依赖性。（5）Losartan和Tempol均可显着抑制Ang Ⅱ诱导的TXNIP表达上调。结论:高血压状态下,血管内皮细胞中TXNIP的表达上调,这一现象可能与Ang Ⅱ诱导的细胞氧化应激有关。第二部分TXNIP对高血压大鼠血管内皮功能的影响目的:血管内皮是血液循环和血管壁之间的屏障,可以分泌多种血管活性物质,对于维持血管张力和血流动力学稳定具有重要意义。高血压可以导致血管内皮功能障碍,但具体的损伤机制目前仍未完全阐明,本部分主要探讨TXNIP对高血压大鼠血管内皮功能的影响。方法:将32只雄性SD大鼠随机分为以下4组（每组8只）:假手术组（sham）、假手术+TXNIP抑制剂组（sham+Resveratrol）、高血压组（hypertension）、高血压+TXNIP抑制剂组（hypertension+Resveratrol）。采用2K1C法构建高血压大鼠模型,建模后第二天予以Resveratrol（2mg/kg/d）或等体积的溶剂灌胃,连续给药4W后收取大鼠颈动脉、胸主动脉和血浆。血管张力测定仪检测大鼠胸主动脉的内皮依赖性舒张功能。Western blot检测大鼠血管组织中TXNIP、e NOS、p-e NOS（ser 1177）以及几种经典的氧化还原反应调节蛋白（NOX2、NOX4、SOD2、NRF2）的表达。通过检测血浆丙二醛（malondialdehyde,MDA）浓度、SOD活性以及主动脉二氢乙啶（dihydroethidium,DHE）染色评估全身及血管组织的氧化应激水平。结果:（1）Resveratrol可以明显抑制大鼠颈动脉和主动脉血管组织中TXNIP的表达。（2）与假手术组相比,高血压大鼠胸主动脉对乙酰胆碱诱导的血管舒张反应明显减退,同时血管组织中e NOS的蛋白表达和p-e NOS（ser 1177）/e NOS比率明显减低（均P<0.05）;抑制TXNIP可以显着改善高血压大鼠血管的舒张功能,同时上调血管组织中e NOS的蛋白表达和功能激活（均P<0.05）。（3）高血压大鼠全身及血管组织出现明显的氧化应激;与高血压大鼠相比,抑制TXNIP后高血压大鼠的血浆MDA浓度明显降低（9.39±1.11 vs.16.61±0.67μM;P<0.05）,SOD活性明显增加（68.65±6.37 vs.48.18±4.61 U/m L;P<0.05）;DHE染色显示抑制TXNIP可以有效减少高血压大鼠主动脉血管组织中ROS生成（P<0.01）;Western blot进一步显示抑制TXNIP可以上调高血压大鼠主动脉血管组织中抗氧化蛋白（SOD2和NRF2）的表达,抑制氧化酶（NOX4和NOX2）的表达。结论:高血压大鼠血管内皮依赖性舒张功能减退,抑制TXNIP可以显着改善高血压大鼠血管内皮功能,抑制全身及血管组织的氧化应激。第三部分TXNIP对人脐静脉内皮细胞功能的调控作用目的:高血压病程中,血液循环中升高的Ang Ⅱ是导致内皮功能障碍的主要病理刺激因素之一,Ang Ⅱ可以通过促进细胞氧化应激和凋亡等方式诱导血管内皮细胞功能损伤。本部分主要探索外源性Ang Ⅱ刺激下,TXNIP对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）功能的调节作用。方法:构建特异性TXNIP小干扰RNA（si RNA）和阴性对照（negative control,NC）RNA,体外转染HUVEC,随后使用Ang Ⅱ（10-6M）处理HUVEC。根据处理方式不同,分为以下5组:Control、Control+TXNIP-si RNA、Ang Ⅱ、Ang Ⅱ+NC-si RNA和Ang Ⅱ+TXNIP-si RNA。DCFH荧光染色检测细胞内ROS生成;Annexin V/PI染色、流式细胞仪检测细胞凋亡;DAF-FM荧光染色检测细胞内一氧化氮（nitric oxide,NO）的合成。Western blot检测AKT、p-AKT（ser 473）、e NOS、p-e NOS（ser 1177）以及其他氧化还原反应调节蛋白（NOX2、NOX4、SOD2、NRF2）和凋亡相关蛋白（ASK1、BCL2、BAX、cleaved-Caspase 3、Caspase 9）的表达变化。结果:（1）TXNIP-si RNA可以显着抑制HUVEC中TXNIP在m RNA和蛋白水平的表达（均P<0.01）,NC-si RNA对TXNIP的表达无明显影响（P>0.05）。（2）与Control组相比,Ang Ⅱ处理后HUVEC细胞内ROS生成增多,细胞凋亡率明显升高;同时e NOS的活性下调,细胞内NO的合成明显减少（均P<0.05）。（3）与Ang Ⅱ+NC-si RNA组相比,敲减TXNIP可以明显减少Ang Ⅱ刺激下HUVEC中ROS的生成（P<0.01）,同时抑制NOX2和NOX4的蛋白表达,上调SOD2和NRF2的蛋白表达（均P<0.05）。（4）与Ang Ⅱ+NC-si RNA组相比,Ang Ⅱ+TXNIP-si RNA组中HUVEC的细胞凋亡率明显降低[（8.75±0.23）%vs.（14.23±1.60）%,P<0.05],ASK1、cleaved-Caspase 3和Caspase 9的蛋白表达也显着降低（均P<0.05）,而BCL2/BAX的比值升高（P<0.05）。（5）Ang Ⅱ刺激状态下,敲减TXNIP可以上调HUVEC中p-AKT（ser473）/AKT和p-e NOS（ser 1177）/e NOS的比值（均P<0.05）,并能部分恢复细胞内受损的NO合成（P<0.05）。结论:TXNIP参与并介导了Ang Ⅱ诱导的血管内皮细胞功能障碍,抑制TXNIP可以通过减轻氧化应激和细胞凋亡改善血管内皮细胞的生理功能。第四部分TXNIP调控血管内皮细胞功能的机制研究目的:TXNIP是体内主要的内源性硫氧还蛋白（thioredoxin,TRX）系统抑制蛋白。然而高血压状态下,TXNIP是否通过影响TRX系统的激活进而导致血管内皮细胞功能障碍目前仍不明确。本部分主要探索TXNIP调控血管内皮细胞功能的内在分子机制。方法:TXNIP-si RNA和NC-si RNA转染HUVEC后外源性使用Ang Ⅱ处理细胞,分组方式与第三部分相同。RT-q PCR、Western blot、细胞免疫荧光检测各组细胞中TRX的表达;提取HUVEC核蛋白检测细胞核中TRX、AP-1、REF-1的表达;使用硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase,TRXR）试剂盒检测细胞中TRXR活性变化。随后使用PX-12（一种TRX的抑制剂）预处理HUVEC,根据处理方式不同,分为以下4组:Control组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+TXNIP-si RNA组、Ang Ⅱ+TXNIP-si RNA+PX-12组;检测各组细胞内ROS、细胞凋亡率以及e NOS和p-e NOS（ser 1177）的蛋白表达变化。以GV230为载体构建TRX过表达质粒（GV230-TRX）和阴性对照质粒（GV230-NC）,分别转染HUVEC,分别在正常或Ang Ⅱ刺激状态下,检测HUVEC中e NOS和p-e NOS（ser 1177）的蛋白表达及细胞内NO的合成变化。结果:（1）Ang Ⅱ可以代偿性激活HUVEC的TRX系统,与Control组相比,Ang Ⅱ组中TRX的m RNA和蛋白水平均有所升高（均P<0.05）,但TRXR活性无明显变化（P>0.05）。（2）与Ang Ⅱ+NC-si RNA组相比,Ang Ⅱ+TXNIP-si RNA组中TRX的蛋白和m RNA表达水平进一步增加,TRXR的活性显着增强（均P<0.05）。（3）Ang Ⅱ刺激状态下,敲减TXNIP可以促进HUVEC中TRX发生核转位,上调细胞核内转录因子AP-1和REF-1的蛋白表达（均P<0.05）。（4）TXNIP对HUVEC氧化应激、细胞凋亡和e NOS功能激活的调节作用可以被PX-12完全逆转。（5）Ang Ⅱ刺激状态下,过表达TRX可以显着上调HUVEC中p-e NOS（ser 1177）/e NOS的比值,并能促进细胞内NO的合成（均P<0.05）。结论:高血压状态下,TXNIP主要是通过负调控TRX系统的方式介导血管内皮功能障碍;维持TXNIP/TRX系统的稳态可能有助于减轻高血压对血管内皮细胞的损伤。
谭令[6]（2020）在《三草降压汤对SHR肾脏TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路调控的研究》文中进行了进一步梳理背景:目前,全世界近三分之一成年人患有的高血压[1],我国高血压患者已达3亿之多[2]。因此,高血压已成为消耗社会医疗资源的主要影响因素之一,给国家和家庭带来了的经济负担日趋严重。高血压所引起的心、脑、肾等靶器官损害是高血压患者尤其不能忽视的风险,其中高血压导致的肾脏损害发生率已高达18%[3],仅次于糖尿病肾病和肾小球肾炎。在高血压的中医治疗方面,伤寒大家刘渡舟教授创立的三草降压汤（Sancao Decoction,SCD）临床疗效显着,SCD由芍药甘草汤加龙胆草、益母草、夏枯草组成,具有清肝泻火、养阴柔肝、活血通经和利水散结等功效。本课题组前期研究已发现SCD可通过抗炎作用显着降低血压,因此,本研究拟在此基础上探究其能否通过抗炎作用进一步改善高血压造成的肾脏损害。目的:1.观察SCD对自发性高血压大鼠的血压、肾功能、尿液生化指标及肾脏组织形态学变化的改善作用。2.通过检测肾脏组织中Toll样受体4（TLR4）、核转录因子-κ B（NF-κ B）、Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）等蛋白的表达,探索SCD对TLR4/NF-κ B/NLRP3信号通路表达的影响,从而明确SCD改善高血压肾损害及其可能机制。方法:选取24只20周龄的雄性自发性高血压大鼠（Spontaneously Hypertensive Rat,SHR）,随机分为模型组（SHR组）、卡托普利组（CPT组）（30mg/kg）、三草降压汤组（SCD组）（10.6g/kg）,8只同周龄的雄性WKY大鼠作为正常对照组（WKY组）。各组连续灌胃给药12周,分别于给药第4周、第8周和第12周检测各组大鼠血压,并于给药12周后,留取各组大鼠24小时尿液,生化法检测尿微量白蛋白（mAlb）、尿肌酐（UCRE）和尿蛋白（UP）等指标,实验结束后腹主动脉取血,取血清用生化法检测各组大鼠血肌酐（SCR）、尿素氮（BUN）和血尿酸（UA）等肾功能指标。采用苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理变化,Masson染色评估肾组织纤维化程度。采用免疫组织化学法（IHC）检测Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）核转录因子-κB（NF-κ B）、Nod样受体蛋白3（NLRP3）和白细胞介素-1 β（IL-1 β）蛋白的表达。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测单核细胞趋化因子-1（MCP-1）和IL-1 β蛋白的表达量。采用蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测TLR4、NF-κ B和NLRP3的蛋白表达情况。最后应用SPSS 20.0统计软件进行数据分析。结果:1.各组大鼠血压及心率的变化给药前,SHR 组、CPT 组及 SCD 组收缩压（Systolic Blood Pressure,SBP）、舒张压（Diastolic Blood Pressure,DBP）和平均动脉压（Mean Arterial Pressure,MAP）均无统计学差异（P>0.05）,且上述三类血压值均显着高于WKY组（P<0.01）;给药4周后、8周后及12周后,与WKY组相比,SHR组的收缩压、舒张压和平均动脉压均显着升高（P<0.01）,与SHR组相比,CPT组和SCD组的收缩压、舒张压和平均动脉压均明显降低（P<0.01）。在整个治疗过程中,与WKY组相比,SHR组、CPT组及SCD组的心率明显偏高,差异有统计学意义（P<0.01）,而SHR组、CPT组和SCD组三组之间的心率无统计学差异（P>0.05）。2.各组大鼠尿液生化指标的变化治疗后,与WKY组相比,SHR组大鼠的尿微量白蛋白、尿蛋白显着升高（P<0.01）,尿肌酐显着降低（P<0.01）,尿量明显减少（P<0.01）,24小时尿白蛋白定量和尿蛋白定量显着升高（P<0.01）;与SHR组大鼠相比,SCD组和CPT组大鼠的尿微量白蛋白和尿蛋白均显着降低（P<0.01）,且两组的尿肌酐浓度均明显增高（P<0.01）,SCD组的尿量显着增多（P<0.01）,而CPT组的尿量未见明显增多（P>0.05）,SCD组和CPT组的24小时尿白蛋白定量均显着降低（P<0.01）,但此两组的24小时尿蛋白定量无明显改变（P>0.05）。3.各组大鼠肾重、体质量和肾脏指数的变化治疗后,与WKY组相比,SHR组大鼠双侧肾脏总重量无明显改变（P>0.05）,但SHR组大鼠的体质量明显降低（P<0.01）,SHR组的肾脏指数显着升高（P<0.01）;与SHR组相比,SCD组和CPT组大鼠的体质量无明显改变（P>0.05）,CPT组大鼠的肾脏指数明显降低（P<0.01）,但SCD组大鼠的肾脏指数无明显降低（P>0.05）。4.各组大鼠肾功能的变化治疗后,与WKY组相比,SHR的尿素氮（BUN）、血肌酐（SCR）和血尿酸（UA）均显着升高（P<0.01）,与SHR组相比,SCD组和CPT组尿素氮、血肌酐和血尿酸均显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）。5.各组大鼠肾脏组织病理形态学的变化HE染色结果显示,与WKY组相比,SHR组大鼠部分肾小球重度萎缩,肾内动脉周围重度炎性浸润,肾小球系膜基质增生明显,肾小管扩张。与模型组相比,SCD组和CPT组大鼠肾小球萎缩程度减轻,肾小管无扩张。（2）Masson染色结果显示:与WKY组相比,SHR组大鼠肾组织内胶原纤维沉积明显增多,SCD组和CPT组胶原纤维的表达明显减少。6.SCD对TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路及其相关炎症因子表达的影响IHC及Western blot检测结果发现,与WKY组相比,SHR组的TLR4、MyD88、NF-κB、NLRP3和IL-1 β蛋白的表达量均显着升高（P<0.01）;与SHR组相比,CPT组和SCD组的TLR4、MyD88、NF-κ B、NLRP3和IL-1 β蛋白的表达量均显着降低（P<0.01）。ELISA检测结果表明,与WKY组相比,SHR组的MCP-1和IL-1 β的表达量显着升高（P<0.01）;与SHR组相比,CPT组和SCD组的MCP-1和IL-1 β表达量明显降低（P<0.01）。结论:1.三草降压汤能有效改善高血压肾损害,其作用主要通过降低血压,改善尿液生化异常,降低血肌酐、尿素氮和血尿酸水平,改善肾脏组织的病理形态等方面实现;2.三草降压汤可通过调控TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,抑制肾脏炎症反应,从而改善高血压肾损害。
魏惠平[7]（2020）在《当归醇提物对SHR血压及靶器官的影响及分子机制探讨》文中研究指明目的1.明确当归醇提物对SHR血压和靶器官的作用。2.基于Th17/Treg细胞平衡探讨当归醇提物干预SHR血压和靶器官损伤的分子机制。方法1.系统检索Cochrane、Web of science、PubMed、Embase、中国知网、万方、CBM七个数据库,纳入当归和含有当归的复方制剂治疗高血压及其并发症的相关研究。使用EXCEL 2013和SPSS 21对数据进行整合与处理,并通过气泡图来呈现结果。2.结合70%乙醇热回流法和喷雾干燥法制备当归有机酸;建立高效液相色谱法测定当归醇提物中阿魏酸含量的方法,通过阿魏酸含量控制当归醇提物的质量。3.动物分组:空白组9只WKY大鼠,模型组、阳性对照组（贝那普利）、当归醇提物低、中、高剂量组各9只SHR大鼠。空白组和模型组用等体积生理盐水,阳性对照组用贝那普利片10mg/d,当归醇提物低、中、高剂量组分别用对应剂量,进行灌胃,每日1次,连续8周。监测各组大鼠血压及其他生理参数;通过大鼠心脏彩超、HE染色、Masson染色评估心脏形态结构和功能;采用ELISA、Western Blot、RT-PCR实验方法检测血清中NF-κβ、VCAM-1、ET-1、ICAM-1、eNOS含量,并基于蛋白-基因层面监测RAAS系统和氧化应激成分的表达;评价当归醇取物对SHR肝肾功能的影响。4.基于网络药理学筛选当归治疗高血压及靶器官保护的信号通路。5.建立SHR模型,随机分为模型组、贝那普利组、当归醇提物高剂量组,并设空白组（WKY）。ELISA法检测血清炎症指标IL-6、CRP以及Th17、Treg表达因子IL-17、IL-23、IL-10、TGFβ1含量;流式细胞技术检测外周血中Th17、Treg细胞,并计算Th17/Treg比率;qPCR检测大鼠肾组织转录因子FoxP3和RORγt的表达;Western Blot检测大鼠肾组织p38、p-p38、FoxO1、p-FoxO1、SGK1和IL-23R表达。结果1.Evidence Mapping分析纳入的RCT研究,总有效性结局指标占69.4%,有效率与对照组相比具有统计学差异;纳入研究干预措施中所用的中药药性将其分为补气活血法、补气养血法、补气养阴活血法等八大类,大部分药性类型为活血化瘀方;纳入文献中治疗组与对照组在降压、靶器官保护,不良反应等方面具有统计学差异。2.当归醇提物的制备及质量控制当归醇提物呈棕褐色细粉。高效液相色谱条件为C18色谱柱,流动相由乙腈-0.1%磷酸溶液组成,梯度洗脱,洗脱时间为:0-30 min,A:95%-5%（v/v）,B:5%-95%（v/v）;检测波长为316 nm;该方法专属性强,精密度,回收率能满足体外分析要求;当归醇提物中阿魏酸平均含量为（151.525±0.002）%（μg/g）。3.当归醇提物对SHR的降压效果评价指标及肝肾功能影响血压及一般状况:给药2、4、6、8周后,贝那普利组、当归醇提物高剂量组收缩压和舒张压均低于模型组（P<0.01）。与模型组相比,贝那普利组与当归醇提物中、高剂量组大鼠活动积极,反应灵敏,睡眠少、体毛光泽,弓背表现少,体重升高。心脏形态结构和功能:（1）彩超:与空白组相比,模型组大鼠心脏LVEDD、LVESD减小,IVSTD及LVPWTD均明显增厚,EF、FS、E/A降低（P<0.05）。与模型组相比,贝那普利组LVEDD、LVESD增加,EF、FS、E/A提高,IVSTD、LVPWTD降低,高剂量当归醇提物明显增了LVEDD、LVESD、EF、FS、E/A,差异具有统计学意义（P<0.05）。（2）HE染色:与空白组比较,模型组SHR心肌细胞体积增大、心肌纤维走形紊乱、细胞核染色加深、细胞间隙增大伴明显的组织胶原沉积及炎症细胞浸润;与模型组相比,贝那普利组及当归醇提物高剂量组SHR心肌纤维走形整齐、细胞核染色正常,未见明显的炎症细胞浸润及细胞间质胶原沉积。（3）Masson染色显示:与空白组比较,模型组心肌组织间隙可见大量胶原纤维沉积、细胞间隙增宽、心肌细胞形态受压失去原有的梭形结构、血管周围大量的胶原沉积;与模型组比较,贝那普利及当归醇提物高剂量组心肌纤维间隙、血管周围胶原沉积明显减少、心肌细胞梭形结构清晰可见。血管内皮功能及RAAS系统指标:（1）与空白组比较,模型组大鼠VCAM-1、ET-1、ICAM-1蛋SHR白表达上升,基因表达明显上调,氧化应激因子eNOS蛋白表达下降,基因表达明显下调（P<0.01）;与模型组比较,贝那普利组及当归醇提物高剂量组VCAM-1、ET-1、ICAM-1蛋白表达下降,基因表达下调,而eNOS蛋白表达升高,基因表达上调（P<0.01）。（2）与空白组比较,模型组大鼠AT1-R蛋白表达升高,基因表达上调,AT2-R蛋白表达下降,基因表达下调（P<0.05）;与模型组比较,贝那普利组及当归醇提物组AT1-R蛋白表达下降,基因的表达下调,AT2-R蛋白表达升高,基因表达上调（P<0.05）。肝肾功能影响的初步评价:与空白组比较,实验各组大鼠血清生化指标ALT、AST、BUN、CREA均在同一水平,无统计学差异（P>0.05）。4.网络药理学探讨当归防治高血压的机制研究当归治疗高血压时主要涉及生物膜合成、脑肠轴发育、细胞内钙信号转导、平滑肌收缩、刺激cAMP合成、脂多糖反应、G蛋白耦连的信号转导等生物过程;MAPK/SGK1/FoxO1/RORγt/IL-23R信号通路可能通过调节Th17/Treg细胞的平衡发挥降低SHR模型血压及靶器官保护的作用。5.当归醇提物干预SHR血压和靶器官损伤的作用机制肾脏组织病理:与空白组比较,SHR模型组大鼠肾小球纤维化明显,肾小管上皮细胞肿胀,管腔变窄,肾小管周围的毛细血管受压,形态欠规则,间质肿胀,炎性细胞浸润;与模型组比较,贝那普利组、当归醇提物高剂量组大鼠肾小球纤维化减轻,肾小管形态规则,炎性浸润减少。血清炎症指标:（1）与模型组比较,贝那普利组、当归醇提物高剂量组IL-6、CRP的表达降低（P<0.05）。（2）与空白组比较,模型组大鼠Th17细胞百分比上升,Treg细胞百分比明显下降,Th17/Treg细胞比值上升;与模型组大鼠比较,贝那普利组、当归醇提物高剂量组Th17细胞百分比下降,Treg细胞百分比上升,Th17/Treg细胞比值明显下降（P<0.05）。（3）与模型组比较,贝那普利组、当归醇提物高剂量组IL-17、IL-23均降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）与模型组比较,贝那普利组、当归醇提物高剂量组IL-10、TGFβ1均降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。RORγt、FoxP3的表达:（1）与空白组相比,模型组RORγt表达降低（P<0.05）;贝那普利组、当归醇提物高剂量组RORγt表达均低于模型组（P<0.05）。（2）与空白组相比,模型组Fox P3表达升高（P<0.05）;贝那普利组、当归醇提物高剂量组Fox P3表达均升高于模型组（P<0.05）。p38/MAPK通路相关因子的表达:与空白组比较,模型组SHR肾脏组织中p-p38、SGK1、p-FoxO1和IL-23R的表达水平升高（P<0.05）;与模型组相比,贝那普利组、当归醇提物高剂量组大鼠肾脏组织中p-p38、SGK1、p-FoxO1和IL-23R的表达水平降低（P<0.05）。结论1.目前的研究现状提示当归对高血压治疗的降压及靶器官保护有效且不良反应较低,但其疗效有待更多的研究进一步证明。2.当归醇提物可以改善SHR一般情况,一定程度上降低SHR血压,能够逆转SHR心肌重塑、改善内皮功能,且无明显肝、肾功能影响。3.Th17/Treg平衡失调是SHR模型高血压发病的关键因素,当归醇提物高剂量组通过调节p38MAPK/SGK1/FoxO1/RORγt/IL-23R介导的Th17/Treg平衡,降低SHR血压,防治其靶器官损伤。
刘丹[8]（2020）在《雌激素水平对2K1C大鼠肾功能及血管收缩和舒张因子的影响》文中进行了进一步梳理目的:研究雌激素水平对正常血压大鼠和2K1C大鼠肾功能、收缩和舒张因子以及对2K1C大鼠肾组织肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）mRNA及蛋白表达的影响。方法:取雄性大鼠30只,雌性大鼠75只。手术组大鼠通过狭窄一侧肾动脉完成2K1C手术建立肾型高血压模型,其中30只雌性SD大鼠同时完成切除双侧卵巢,建立高血压合并雌激素低下动物模型。15只雌性SD大鼠切除双侧卵巢建立单纯雌激素低下模型。实验共分为7组,分别是雄性假手术组（sham-M）,雌性假手术组（sham-F）,单纯去势组（OVX）,雄性手术组（2K1C-M）,雌性手术组（2K1C-F）,雌性手术去势组（2K1C-OVX）,去势手术补充雌二醇组（2K1C-OVX-E2）。2K1C-OVX-E2组术后每天皮下注射17β-雌二醇（15μg/kg）。术后32周,麻醉后测量血压。取血、肾组织,测定相关指标及RAS组分的mRNA及蛋白的表达。结果:1.雌激素对血压影响不大。2.雌激素对肾功能的影响:2K1C-OVX-E2组BUN水平高于2K1C-OVX组。3.雌激素对收缩和舒张因子的影响:与2K1C-M组相比,2K1C-F组6-K-PGF1a水平下降。与2K1C-F组相比,2K1C-OVX组肾组织ET-1含量和TXB2水平降低,血浆6-K-PGF1a水平升高。与2K1C-OVX组相比,2K1C-OVX-E2组肾组织ET-1含量升高。4.雌激素对氧化应激的影响:2K1C-OVX-E2组肾组织MDA含量高于2K1C-OVX组。5.雌激素对RAS的影响:与2K1C-M组相比,2K1C-F组Ang（1-7）含量降低。与2K1C-M组和2K1C-OVX组相比,2K1C-F组肾素、ACE1、AT1aR、AT1bR的mRNA表达升高,AT2R的mRNA表达降低;2K1C-F组ACE2和MasR的mRNA和蛋白表达低于2K1C-M组和2K1C-OVX组。结论:1)雌激素可能通过促进6-K-PGF1a/TXB2失衡、激活RAS系统,损伤2K1C大鼠的肾功能。2)雌激素可降低2K1C大鼠肾组织中Ang（1-7）-ACE2-MasR轴的活性。
刘晖[9]（2019）在《基于血管紧张素转化酶2的人参皂苷Rg3肾脏保护作用研究》文中提出人参皂苷Rg3（Rg3）是人参在高温炮制过程中生成的稀有皂苷,具有优良的抗肿瘤活性。目前国内已有制药企业对Rg3进行工业化生产,开发为辅助抗肿瘤的中药一类新药,在临床上广泛应用并取得了良好的效果。此外,多项研究显示Rg3还具有良好的心血管保护作用,其机制包括抗炎、抗氧化、抗纤维化、调节肾素-血管紧张素系统（RAS）活性等。高血压常常导致肾脏损伤,而肾脏疾病也是高血压发展的重要原因之一。高血压和肾脏疾病互为因果,常常造成恶性循环,最终发展为重度高血压和慢性终末期肾病,是人类健康的重大威胁之一。在肾病和高血压互相促进对方进展的过程中,RAS扮演了关键性的角色。血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）和血管紧张素1型受体拮抗剂（ARB）是临床上预防、治疗肾性高血压和高血压肾病的一线药物。本课题组在之前的研究中发现,在自发性高血压大鼠（SHR）模型中,Rg3能通过减轻心肌组织中的血管紧张素II（Ang II）和炎症反应,抑制心肌纤维化,减缓高血压导致的大鼠心室重构,改善其心功能。高血压同样可导致SHR的肾脏损伤,如前所述,RAS功能失调是SHR损伤的重要机制。鉴于Rg3在预防SHR心脏损伤中展现的调控RAS、抑制炎症和纤维化的作用,我们开展了Rg3预防SHR肾脏损伤的研究。实验结果显示,Rg3虽然不能显着降低SHR的血压,但通过降低肾脏组织中的Ang II,抑制Ang II介导的炎症、氧化应激和纤维化,Rg3能有效地缓解SHR的肾脏损伤和病理改变。其机制可能是Rg3上调了肾脏组织中能够降解Ang II的血管紧张素转化酶2（ACE2）的表达。为进一步确认Rg3对Ang II参与介导的高血压肾脏损伤的缓解作用及其机制,我们利用微型胶囊渗透泵给小鼠皮下缓释Ang II,造成小鼠的肾脏损伤,同时用Rg3进行治疗,观察其效果并分析其作用机制。实验结果显示,对于外源性Ang II造成的小鼠肾脏损伤,Rg3同样具有缓解作用,其机制仍然是通过上调肾脏组织中的ACE2表达,增加了Ang II的降解,抑制了Ang II介导的炎症、氧化应激和纤维化。为了证实ACE2上调是Rg3发挥肾脏保护作用的关键机制,我们构建了ACE2基因敲除小鼠（KO）。继续使用微型胶囊渗透泵给小鼠皮下缓释Ang II造成小鼠的肾脏损伤,对比Rg3在野生型（WT）小鼠和KO小鼠上的肾脏保护作用有何不同。实验结果显示,由于KO小鼠的肾脏组织中不表达ACE2,Rg3无法通过上调ACE2的表达来增加Ang II的降解,对Ang II介导的炎症、氧化应激和纤维化没有明显的抑制作用。因此,对外源性Ang II造成的KO小鼠肾脏损伤,Rg3没有明显的缓解作用。据文献报道,自发性高血糖小鼠（db/db）在血糖升高的早期,其肾脏组织中的ACE2表达会代偿性上调,发挥一定的肾脏保护作用,减缓糖尿病肾病的进展。但随着小鼠年龄增大,这种ACE2的代偿性上调会逐渐失效,小鼠的肾脏损伤进入失代偿期,发展为糖尿病肾病。鉴于Rg3在预防高血压肾病进展时同样上调了肾脏组织中的ACE2,我们使用Rg3对db/db小鼠进行治疗,观察Rg3的肾脏保护作用,分析Rg3对肾脏组织中ACE2表达水平的影响。实验结果显示,Rg3不能显着降低db/db小鼠的血糖,但能延长db/db小鼠肾脏组织中ACE2的代偿性上调,从而降低其肾脏组织中的Ang II水平,抑制Ang II介导的炎症、氧化应激和纤维化,发挥肾脏保护作用,进一步减缓糖尿病肾病的进展。综上所述,Rg3能通过上调肾脏组织中的ACE2,分别减缓SHR的高血压肾病和db/db小鼠的糖尿病肾病的进展。Rg3除了具有良好的抗肿瘤作用,作为辅助治疗肿瘤的药物在临床上广泛使用,也有作为辅助治疗高血压、糖尿病,预防其肾脏并发症的药物的潜力。此外,最新的研究显示,上调肿瘤微环境中的ACE2,可能有助于抑制肿瘤的侵袭转移。因此,上调组织中的ACE2表达,可能是Rg3发挥抗肿瘤作用和心血管保护作用、肾脏保护作用的共同机制之一,这有待于更多实验的开展进行验证。
张慧荣[10]（2019）在《有氧运动对高血压大鼠肠系膜动脉RAS系统及Mas受体DNA甲基化的影响》文中研究指明目的:探讨有氧运动对高血压大鼠肠系膜动脉RAS系统的影响,以及RAS系统舒张轴受体Mas受体的DNA甲基化水平在有氧运动改善高血压大鼠肠系膜动脉功能中的作用。研究方法:研究对象选用12周龄自发性高血压大鼠（Spontaneously hypertensive rat,SHR）,同时选用同龄雄性正常血压对照组WKY（Wistar-Kyoto）大鼠,随机分为高血压安静对照组（SHR-C）,高血压运动组（SHR-E）,正常血压安静对照组（WKY-C）,正常血压运动组（WKY-E）。运动组进行中等强度的有氧跑台锻炼。尾动脉无创测定血压,12周后,取各组大鼠肠系膜动脉分别采用微血管张力测定肠系膜动脉对血管紧张素Ⅱ和去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）的收缩反应;高效液相色谱法测定血管紧张素活性物质如血管紧张素原（Angiotensinogen,Agt）、血管紧张素Ⅰ（AngiotensinⅠ,AngⅠ）、血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）的含量;蛋白免疫印迹法观察血管紧张素酶1（Angiotensin-Converting-Enzyme 1,ACE1）、血管紧张素酶2（Angiotensin-Converting-Enzyme 2,ACE2）、AT1受体（Angiotensin II receptor type 1,AT1R）、Mas受体（MAS proto-oncogene receptor,MasR）的表达情况;q-PCR法测定Mas受体mRNA的水平;亚硫酸氢盐测序PCR测定Mas1基因启动子区的DNA甲基化程度。研究结果:1)与WKY-C组相比,SHR-C组大鼠的收缩压、舒张压、平均动脉压和体重显着增加（P<0.05）;有氧运动降低了高血压大鼠的收缩压、舒张压、平均动脉压和体重（P<0.05）。2)与WKY-C组相比,SHR-C组中AngⅡ诱发的肠系膜动脉收缩程度显着增多（P<0.05）;与SHR-C组相比,SHR-E组肠系膜动脉对AngⅡ的收缩反应显着下调（P<0.05）。3)与WKY-C组相比,SHR-C组血浆内RAS系统Agt、AngⅠ、AngⅡ的含量显着增加（P<0.05）;有氧运动使高血压大鼠血浆内AngⅠ、AngⅡ的含量显着下降（P<0.05）。4)与WKY-C组相比,SHR-C组肠系膜动脉的ACE1、AT1R、ACE2、MasR蛋白表达显着上调（P<0.05）;与SHR-C组相比,SHR-E组肠系膜动脉的ACE1、AT1R、ACE2、MasR蛋白表达显着下调（P<0.05）。与WKY-C组相比,SHR-C组的ACE2/ACE1、MasR/AT1R比值显着降低（P<0.05）;与SHR-C组相比,ACE2/ACE1、MasR/AT1R比值显着上升（P<0.05）。5)与WKY-C组大鼠相比,SHR-C组大鼠的Mas受体mRNA水平显着上调（P<0.05）。有氧运动显着下调了高血压大鼠的Mas受体mRNA水平（P<0.05）。6)与WKY-C组相比,SHR-C组大鼠的Mas1基因启动子区甲基化程度显着降低（P<0.05）,而高血压运动组的甲基化程度显着增加（P<0.05）,发生了甲基化。结论:1)有氧运动有效降低了血浆中血管紧张素活性物质的水平,减少了高血压大鼠肠系膜动脉中RAS系统收缩轴、舒张轴关键转化酶ACE1、ACE2及受体AT1R、MasR表达;调节了高血压大鼠肠系膜动脉ACE1-AT1R与ACE2-MasR两轴的平衡,提高了高血压大鼠肠系膜动脉中舒张轴的比值;2)其中Mas受体的Mas1基因启动子区高甲基化有可能是运动调节的舒张轴的原因中的一个。
二、肾型高血压大鼠不同血管组织中血管紧张素的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肾型高血压大鼠不同血管组织中血管紧张素的变化（论文提纲范文）
（1）绝经后高血压患者中医证型分布特点及淫羊藿苷干预的相关机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 肾素-血管紧张素系统与绝经后高血压研究进展 |
| 1 绝经后高血压概述 |
| 2 肾素-血管紧张素系统概述 |
| 3 雌激素通过调节肾素-血管紧张素系统治疗绝经后高血压 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 补肾法治疗绝经后高血压的研究进展 |
| 1 中医对绝经后高血压的认识 |
| 2 补肾法治疗绝经后高血压的理论依据 |
| 3 补肾法治疗绝经后高血压的研究进展 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 补肾法联合降压药治疗绝经后及围绝经期高血压的系统评价和Meta分析 |
| 1 研究目的 |
| 2 资料与方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 文献检索结果 |
| 3.2 纳入文献的一般特征 |
| 3.3 纳入文献的用药规律统计 |
| 3.4 纳入文献的质量评价 |
| 3.5 Meta分析结果 |
| 3.6 不良反应分析 |
| 3.7 发表偏倚检测 |
| 3.8 敏感性分析 |
| 3.9 亚组分析 |
| 3.10 试验序贯分析 |
| 4 讨论 |
| 5 研究结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 绝经后高血压患者中医证型分布及动态血压特点研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究内容和研究方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 基线资料 |
| 3.2 高血压分级分布 |
| 3.3 中医证型分布 |
| 3.4 昼夜节律类型分布 |
| 3.5 不同绝经年限动态血压参数比较 |
| 3.6 年龄与动态血压参数的相关性 |
| 3.7 血压变异性相关因素的多元线性回归 |
| 4 讨论 |
| 5 研究结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 淫羊藿苷通过调节RAS对雌性去势SHR发挥血压保护作用 |
| 1 研究目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 统计学方法 |
| 5 实验结果 |
| 5.1 一般情况 |
| 5.2 淫羊藿苷对大鼠体重的影响 |
| 5.3 淫羊藿苷对大鼠血压的影响 |
| 5.4 淫羊藿苷对大鼠心率的影响 |
| 5.5 淫羊藿苷对大鼠脏器系数的影响 |
| 5.6 淫羊藿苷对大鼠ACE1-AngⅡ-AT1R轴的影响 |
| 5.7 淫羊藿苷对大鼠ACE2-Ang(1-7) -MasR轴的影响 |
| 5.8 淫羊藿苷对大鼠E_2含量及GPR30蛋白表达的影响 |
| 5.9 淫羊藿苷对大鼠心肌组织ERK1/2通路的影响 |
| 6 讨论 |
| 6.1 淫羊藿苷对SHR大鼠血压的影响 |
| 6.2 SHR和WKY大鼠循环和心肌组织RAS组分存在差异 |
| 6.3 淫羊藿苷对SHR大鼠循环和心肌组织RAS组分的影响 |
| 6.4 淫羊藿苷对SHR大鼠E_2及其受体GPR30的影响 |
| 6.5 淫羊藿苷对SHR大鼠心肌组织ERK1/2通路的影响 |
| 7 研究结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Adropin在高血压患者血清中的表达水平变化 |
| 3.2 高血压患者一般临床资料 |
| 3.3 Adropin水平与左室质量指数的相关性研究 |
| 3.4 Adropin水平在高血压左室肥厚中的诊断价值分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 重组Adropin对自发性高血压大鼠心肌重构的影响 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SHR大鼠心肌重构的发生及Adropin表达水平的下降 |
| 3.2 Adropin处理延缓高血压大鼠心肌重构的进展 |
| 3.3 Adropin处理抑制SHR大鼠心肌组织炎症水平的影响 |
| 3.4 Adropin处理降低SHR大鼠心肌组织氧化应激水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 Adropin在小鼠病理性心肌重构中的作用及机制 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 小鼠病理性心肌重构的形成及Adropin表达水平的下降 |
| 3.2 Adropin处理延缓TAC诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.3 Adropin处理延缓Ang Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.4 Adropin敲除增加Ang Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.5 Nrf2 过表达减轻Adropin缺失加重Ang Ⅱ模型小鼠病理性心肌重构的程度 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四部分 Adropin在 Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用及其机制 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Ang Ⅱ对 CFs细胞Adropin表达的影响 |
| 3.2 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞Adropin蛋白表达变化的影响 |
| 3.3 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞增殖的影响 |
| 3.4 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞胶原合成的影响 |
| 3.5 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞氧化应激的影响 |
| 3.6 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞引起Nrf2/HO-1 信号通路变化的影响 |
| 3.7 Adropin增强Ang Ⅱ刺激CFs细胞中的Nrf2 转录活性 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 Adropin:一种新的心脏疾病生物标记物 |
| 参考文献 |
（3）OVGP1升高血压的机制研究及高血压脑出血circRNA标志物研究（论文提纲范文）
| 第一部分 OVGP1升高血压的作用及机制研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 研究对象与方法 |
| 1. 研究对象 |
| 1.1 Ovgp1全身性转基因小鼠 |
| 1.2 Ovgp1全身性敲除小鼠 |
| 1.3 人主动脉平滑肌细胞 |
| 2. 实验材料与仪器 |
| 2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2 实验仪器 |
| 3. 实验方法 |
| 3.1 构建Ovgp1全身性转基因小鼠模型 |
| 3.2 转基因小鼠基因型鉴定 |
| 3.3 构建Ovgp1全身性敲除小鼠模型 |
| 3.4 血管紧张素诱导的高血压模型小鼠构建 |
| 3.5 小鼠血压监测 |
| 3.6 小鼠超声检测 |
| 3.7 小鼠血尿生化检测 |
| 3.8 小鼠取材 |
| 3.9 组织包埋与切片 |
| 3.10 组织病理染色 |
| 3.11 RT-RCR检测目的基因的表达 |
| 3.12 蛋白提取和蛋白免疫印迹(Western blot)实验 |
| 3.13 酶联免疫吸附实验（ELISA) |
| 3.14 血管张力测定实验 |
| 3.15 小鼠股动脉导丝损伤模型构建 |
| 3.16 小鼠股动脉取材 |
| 3.17 小鼠股动脉病理染色 |
| 3.18 细胞培养 |
| 3.19 平滑肌细赋表达OVGP1后转录组测序 |
| 3.20 Pull-down实验捕捉OVGP1相互作用蛋白 |
| 3.21 质谱检测 |
| 3.22 质谱检测结果验证 |
| 3.23 免疫共沉淀实验(CoIP) |
| 3.24 TG小鼠注射MYH9抑制剂Blebbistatin (BLEB) |
| 3.25 数据统计 |
| 研究结果 |
| 1.OVGP1在髙血压小鼠血浆中升高 |
| 2.OVGPl促进小鼠血压升高 |
| 2.1 Ovgp1转基因小鼠基因型和表达情况鉴定结果 |
| 2.2 Ovgp1敲除小鼠基因型鉴定结果 |
| 2.3 Ovgp1转基因小鼠血压升高 |
| 2.4 敲除Ovgp1减轻了AngⅡ诱导的血压升高 |
| 3. 探讨OVGP1升高血压的机制 |
| 3.1 OVGP1在小鼠组织中表达检测 |
| 3.2 小鼠血尿生化检测结果 |
| 3.3 小鼠超声检测结果 |
| 3.4 OVGP1在AngⅡ诱导的血管重塑模型中表达升高 |
| 3.5 OVGP1在股动脉损伤模型重塑血管中表达升高 |
| 3.6 OVGP1在血管损伤后新生内膜中呈显着的时相表达 |
| 4. OVGP1促进血管重塑 |
| 4.1 OVGP1促进小鼠血管纤维化 |
| 4.2 OVGP1促进小鼠血管炎症反应 |
| 4.3 OVGP1促进小鼠主动脉氧化应激反应 |
| 4.4 OVGP1促进血管损伤后内膜重塑 |
| 5. OVGP1促进小鼠血管功能障碍 |
| 5.1 过表达OVGP1促进小鼠血管功能障碍 |
| 5.2 敲除OVGP1减轻了AngⅡ诱导的血管功能障碍 |
| 6. OVGP1在平滑肌细胞中的作用和机制 |
| 6.1 OVGP1主要在平滑肌细胞中表达 |
| 6.2 主动脉平滑肌细胞过表达OVGP1转录组测序结果 |
| 6.3 转录组测序结果验证 |
| 6.4 OVGP1促进平滑肌细胞增殖和迁移 |
| 6.5 OVGP1促进平滑肌细胞氧化应激 |
| 6.6 AKT/ERK是OVGP1下游的主要通路 |
| 7. OVGP1通过与MYH9相互作用影响平滑肌细胞的功能 |
| 7.1 OVGP1相互作用蛋白的筛选 |
| 7.2 CoIP验证OVGPl与MYH9相互作用 |
| 7.3 OVGP1与MYH9在平滑肌细胞和血管组织中共定位 |
| 7.4 OVGP1通过MYH9引起平滑肌细胞的氧化应激反应 |
| 7.5 敲低MYH9抑制OVGP1下游AKT通路的磷酸化 |
| 7.6 MYH9抑制剂Blebbistatin改善了OVGP1引起的血管重塑和血压升高 |
| 8. 研究结果总结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 高血压脑出血环状RNA表达谱鉴定及生物标志物研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 研究对象与方法 |
| 1.研究对象 |
| 2.实验材料 |
| 2.1 实验试剂 |
| 2.2 实验仪器 |
| 3.实验方法 |
| 3.1 样本收集和基线资料采集 |
| 3.2 RNA提取与浓度测定 |
| 3.3 文库构建与上机测序 |
| 3.4 信息分析流程 |
| 3.5 数据质控 |
| 3.6 circRNA识别 |
| 3.7 差异表达基因分析 |
| 3.8 生物信息学分析 |
| 3.9 RT-PCR验证 |
| 3.10 circRNA-miRNA-mRNA互作网络分析 |
| 3.11 统计分析 |
| 研究结果 |
| 1. 临床基线资料统计 |
| 2. 测序结果质量 |
| 3. circRNA的分类 |
| 4. 差异基因表达分析结果 |
| 4.1 发现人群ICH vs HTN差异表达基因 |
| 4.2 验证人群ICH vs HTN差异表达基因 |
| 4.3 CI vs HTN差异表达基因 |
| 4.4 ICH特异性差异表达的circRNA |
| 5. circRNA宿主基因功能分析 |
| 6. RT-RCR验证候选基因 |
| 7. circRNA作为脑出血诊断标志物的潜在价值 |
| 8. circRNA的表达情况与ICH患者临床特征的相关性分析 |
| 9.候选circRNA作为脑出血独立预测因子的研究 |
| 10. circRNA-miRNA-mRNA互作网络分析 |
| 11. circRNA的靶基因miRNA和mRNA的功能分析 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 综述 高血压表观遗传学的研究进展 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）基于Toll样受体信号介导炎症反应探讨温针灸对自发性高血压大鼠的抗炎机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 温针灸对自发性高血压大鼠血压及炎症状态的调控作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 温针灸对自发性高血压大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路调控机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 温针灸通过调控炎症反应发挥对自发性高血压大鼠内皮细胞保护作用的机制 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 附图1 Toll样受体家族及其信号传导通路 |
| 附图2 Toll受体信号通路影响血压机制 |
| 附图3 动物实验技术路线图 |
| 附图4 qPCR实验过程中部分扩增曲线 |
| 附图 5qPCR实验过程中部分熔解曲线 |
| 综述 |
| 综述一 TLRs通路各层级在高血压病及免疫功能调节中的作用机理分析 |
| 综述二 针灸调节血压及免疫功能机制的研究进展 |
| 综述三 高血压病与炎症因子之间的相关性分析 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（5）TXNIP介导高血压血管内皮功能障碍的实验研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 高血压诱导血管内皮细胞TXNIP表达上调 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 TXNIP对高血压大鼠血管内皮功能的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 TXNIP对人脐静脉内皮细胞功能的调控作用 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四部分 TXNIP调控血管内皮细胞功能的机制研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述:硫氧还蛋白系统与高血压的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士研究生期间发表的学术论文 |
（6）三草降压汤对SHR肾脏TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路调控的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医药治疗高血压肾损害的研究进展 |
| 1 概述 |
| 2 单味中药治疗高血压肾损害研究 |
| 3 中药药对治疗高血压肾损害的研究 |
| 4 复方治疗高血压肾损害研究 |
| 5 中成药治疗高血压肾损害研究 |
| 6 中药提取物治疗高血压肾损害研究 |
| 7 中西医结合治疗高血压肾损害研究 |
| 8 中医辨证治疗 |
| 9 其它中医疗法 |
| 10 结语 |
| 综述二 高血压肾损害的病理机制研究进展 |
| 1 遗传因素 |
| 2 环境因素 |
| 3 代谢因素 |
| 4 血流动力学异常 |
| 5 激素和旁分泌因子 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究部分 |
| 实验一 三草降压汤对SHR血压及肾损害的影响研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验二 三草降压汤对SHR肾脏TLR4/NF-κB/NLRP3通路的调控研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 第三部分 讨论 |
| 1 动物模型的选择依据 |
| 2 阳性对照药的选择依据 |
| 3 TLR4/NF-κ B/NLRP3信号通路及其相关炎症指标的选择 |
| 4 肾损伤标志物的选择依据 |
| 5 实验结果的分析讨论 |
| 6 三草降压汤的配伍规律分析 |
| 参考文献 |
| 第四部分 结语 |
| 1 小结 |
| 2 结论 |
| 3 创新点 |
| 4 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）当归醇提物对SHR血压及靶器官的影响及分子机制探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一章 当归防治高血压病的研究现状 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 文献来源 |
| 1.2 纳入排除标准 |
| 1.3 分析方法 |
| 1.4 结局指标 |
| 1.5 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 纳入研究的基本特征 |
| 2.2 Evidence Mapping |
| 3 讨论 |
| 3.1 当归及其复方制剂的有效性 |
| 3.2 当归及其复方制剂的安全性 |
| 3.3 纳入研究质量 |
| 3.4 当归的应用前景 |
| 3.5 优势与局限性 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 当归醇提物的制备及其质量控制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 当归醇提物的制备 |
| 1.2.2 阿魏酸含量的测定 |
| 1.2.3 当归醇提物中阿魏酸含量测定 |
| 2 结果 |
| 2.1 系统适用性 |
| 2.2 标准曲线与线性范围 |
| 2.3 精密度、相对回收率和稳定性 |
| 2.4 阿魏酸含量测定 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 当归醇提物对SHR血压及靶器官的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 当归醇提物降低SHR血压的疗效评价 |
| 2.2 当归醇提物对SHR肝、肾功能影响的初步评价 |
| 3 讨论 |
| 3.1 当归醇提物逆转心肌重构作用机制 |
| 3.2 当归醇提物改善内皮功能的作用 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 网络药理学探讨当归防治高血压机制 |
| 1 资料方法 |
| 1.1 当归活性成分筛选 |
| 1.2 当归活性成分作用靶点预测 |
| 1.3 高血压疾病靶点预测 |
| 1.4 活性成分-靶点-疾病网络构建 |
| 1.5 靶蛋白互作网络构建 |
| 1.6 KEGG信号通路与GO生物过程富集分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 当归活性成分筛选 |
| 2.2 当归活性成分-靶点-疾病靶点网络构建 |
| 2.3 潜在靶点蛋白互作(PPI)网络图 |
| 2.4 当归治疗高血压KEGG信号通路富集分析 |
| 2.5 当归治疗高血压GO生物过程富集分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第五章 当归醇提物降低SHR血压及靶器官保护的分子机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 形态学评估当归醇提物对SHR模型靶器官的影响 |
| 1.2.2 当归醇提物对SHR血清IL-6和CRP的影响 |
| 1.2.3 当归醇提物对SHR血清Th17/Treg比例的影响 |
| 1.2.4 p38/MAPK通路相关因子的检测 |
| 1.2.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 对SHR模型肾组织HE染色的影响 |
| 2.2 对SHR模型IL-6和CRP表达的影响 |
| 2.3 对SHR模型Th17和Treg表达的影响 |
| 2.4 对SHR模型IL17和IL-23表达的影响 |
| 2.5 对SHR模型IL-10和TGFβ1表达的影响 |
| 2.6 Th17和Treg 转录因子RORγt、FoxP3的表达 |
| 2.7 对SHR模型p38、p-p38、SGK1、FoxO1、p-FoxO1和IL-23R表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 展望与不足 |
| 附录 |
| 附录1 中英文缩略词对照表 |
| 附件2 系统评价检索策略 |
| 附件3 系统评价纳入文献基本信息 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（8）雌激素水平对2K1C大鼠肾功能及血管收缩和舒张因子的影响（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1 雌激素水平对正常血压大鼠和RVH大鼠血压及肾功能的影响 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 2 雌激素水平对RVH大鼠肾组织中RAS组分mRNA及蛋白表达的影响 |
| 2.1 雌激素水平对肾组织中RAS组分mRNA表达的影响 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 研究方法 |
| 2.1.3 实验结果 |
| 2.2 雌激素水平对肾组织中RAS组分蛋白表达的影响 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 研究方法 |
| 2.2.3 数据统计分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 雌激素与花生四烯酸代谢产物 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士研究生期间发表的学术论文 |
| 新疆医科大学硕士研究生学位论文导师评阅表 |
（9）基于血管紧张素转化酶2的人参皂苷Rg3肾脏保护作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 文献综述1人参皂苷Rg3 的药理作用和临床应用 |
| 1.1 人参皂苷Rg3 的来源和结构 |
| 1.2 人参皂苷Rg3 的开发和商业化 |
| 1.3 人参皂苷Rg3 的抗肿瘤作用和临床应用 |
| 1.4 人参皂苷Rg3 的其它药理作用 |
| 1.5 用中医理论解读人参皂苷Rg3 的多重药理作用 |
| 第2章 文献综述2肾素血管紧张素系统研究进展及其对肾病的影响 |
| 2.1 肾素血管紧张素系统概述 |
| 2.2 ACE/Ang Ⅱ/AT1 轴的激活及其功能 |
| 2.3 ACE2/Ang1-7/Mas轴的发现及其功能 |
| 2.4 肾素血管紧张素系统和肾脏疾病 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 Rg3 通过上调ACE2 表达减轻SHR的肾脏损伤 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 第4章 Rg3 通过上调ACE2 表达改善Ang Ⅱ介导的高血压小鼠肾脏损伤 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 第5章 ACE2 基因敲除阻断Rg3 的肾脏保护作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 ACE2 基因敲除小鼠的构建、繁殖和鉴定 |
| 5.3 实验材料 |
| 5.4 实验方法 |
| 5.5 实验结果 |
| 5.6 讨论 |
| 第6章 Rg3 通过上调ACE2 表达改善db/db小鼠的糖尿病肾病 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.5 讨论 |
| 第7章 结论和展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在校期间科研成果 |
| 致谢 |
（10）有氧运动对高血压大鼠肠系膜动脉RAS系统及Mas受体DNA甲基化的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1.引言 |
| 1.1 问题的提出 |
| 1.2 选题的目的意义 |
| 2.文献综述 |
| 2.1 高血压与血管功能 |
| 2.2 血管功能与血管平滑肌 |
| 2.3 肾素-血管紧张素系统(Renin-Angiotensin-System,RAS) |
| 2.4 高血压与RAS系统 |
| 2.5 高血压的表观遗传机制 |
| 2.6 运动与高血压 |
| 2.7 运动与RAS系统 |
| 2.8 运动与表观遗传 |
| 3.研究设计 |
| 3.1 研究对象 |
| 3.2 研究方法 |
| 3.2.1 大鼠无创血压测定 |
| 3.2.2 离体肠系膜动脉血管环制备和收缩张力测定 |
| 3.2.3 高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)法检测肠系膜动脉RAS主要效应肽含量 |
| 3.2.4 免疫蛋白印记检测肠系膜动脉RAS成分蛋白表达 |
| 3.2.5 qPCR法检测肠系膜动脉Mas受体的mRNA水平 |
| 3.2.6 DNA亚硫酸氢盐测序PCR |
| 3.2.7 数据处理与分析 |
| 3.2.8 技术路线 |
| 3.3 研究重点、难点和创新点 |
| 3.3.1 研究重点 |
| 3.3.2 研究难点 |
| 3.3.3 研究创新点 |
| 4.研究结果与分析 |
| 4.1 研究结果 |
| 4.1.1 各组大鼠血压和体重变化 |
| 4.1.2 各组大鼠肠系膜动脉收缩特性 |
| 4.1.3 各组大鼠血浆Agt、AngⅠ、AngⅡ含量 |
| 4.1.4 各组大鼠肠系膜动脉中ACE1、AT1R、ACE2、MasR蛋白表达 |
| 4.1.5 各组大鼠肠系膜动脉Mas受体mRNA含量 |
| 4.1.6 各组大鼠肠系膜动脉Mas1基因DNA甲基化水平的影响 |
| 4.2 分析与讨论 |
| 4.2.1 有氧运动对高血压大鼠血压的影响 |
| 4.2.2 有氧运动对高血压大鼠肠系膜动脉功能的影响 |
| 4.2.3 有氧运动对高血压大鼠循环RAS和肠系膜动脉RAS系统的影响 |
| 4.2.4 有氧运动对高血压大鼠肠系膜动脉MasR的影响 |
| 5.研究结论与建议 |
| 5.1 研究结论 |
| 5.2 研究建议 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、肾型高血压大鼠不同血管组织中血管紧张素的变化（论文参考文献）
- [1]绝经后高血压患者中医证型分布特点及淫羊藿苷干预的相关机制研究[D]. 袁晶. 北京中医药大学, 2021(02)
- [2]Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究[D]. 胡欢. 南昌大学, 2021(01)
- [3]OVGP1升高血压的机制研究及高血压脑出血circRNA标志物研究[D]. 白丛霞. 北京协和医学院, 2021
- [4]基于Toll样受体信号介导炎症反应探讨温针灸对自发性高血压大鼠的抗炎机制[D]. 金圣博. 辽宁中医药大学, 2020(01)
- [5]TXNIP介导高血压血管内皮功能障碍的实验研究[D]. 王瑞钰. 重庆医科大学, 2020(01)
- [6]三草降压汤对SHR肾脏TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路调控的研究[D]. 谭令. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]当归醇提物对SHR血压及靶器官的影响及分子机制探讨[D]. 魏惠平. 甘肃中医药大学, 2020(08)
- [8]雌激素水平对2K1C大鼠肾功能及血管收缩和舒张因子的影响[D]. 刘丹. 新疆医科大学, 2020(03)
- [9]基于血管紧张素转化酶2的人参皂苷Rg3肾脏保护作用研究[D]. 刘晖. 吉林大学, 2019(02)
- [10]有氧运动对高血压大鼠肠系膜动脉RAS系统及Mas受体DNA甲基化的影响[D]. 张慧荣. 北京体育大学, 2019(08)