问:单克隆抗体制备的基本原理与过程?有什么意义?
- 答:要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞,但这种B淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖,应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一,得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性,它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性,也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性,用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群,可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。
过程的话,你看示意图吧
问:单克隆抗体的制备技术路线和关键点
- 答:杂交细胞的筛选比较重要
问:抗体制备时如何设计理想的免疫原?
- 答:在抗体制备过程中,免疫原是影响抗体质量的最重要因素之一。
Ø 首先确认序列并通过访问NCBI等多个数据库来检索相关信息;
Ø 运用多种专业软件,评估稀有密码子、蛋白表达状态对抗体制备的影响,综合分析蛋白的保守结构域、特异性、B细胞线性表位、信号肽、跨膜结构域、亲水性等多种属性,初步筛选合适的抗原区域;
Ø 针对相关基因组/蛋白质数据库进行高级BLAST,进一步筛选候选抗原序列,以避免不期望的序列同源性并使潜在的抗体交叉反应性最小化;
Ø 必要时进行同源物/直系同源物/同种型的多重蛋白比对;
Ø 查找相关文献,是否有相关参考序列;
Ø 根据制备抗体的相关经验,最终确定设计抗原的理想区域。
像ABclonal,多年来一直专注于抗体平台与蛋白平台建设,不断引进先进的抗体和蛋白技术优化两大平台。
问:抗体的制备方法有哪些
- 答:抗体由 浆细胞产生
传统抗体生产就是 动物免疫反应,然后在血清中提取
确定是产量低,纯度低(这种方法已经过时)
问:抗体的制备方法有哪些?
- 答:直接法
1.检查抗原法 这是最早的方法,用已知特异性抗体与荧光素结合,制成荧光特异性抗体,直接与细胞或组织中相应抗原结合,在荧光显微镜下即可见抗原存在部位呈现特异性荧光。此法很特异和简便,但一种荧光抗体只能检查一种抗原,敏感性较差。
2.检查抗体法 将抗原标记上荧光素,即为荧光抗原,用此荧光抗原与细胞或组织内相应抗体反应,而将抗体定位检测出来。
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