一、同种瓣内皮细胞再孵化的进展（论文文献综述）
计双双[1]（2021）在《膜活性铱复合寡聚精氨酸多肽的抗肿瘤研究》文中提出生物膜一直是自然界存在的细胞杀伤机制的重要靶标,由于生物膜结构均一、不受遗传突变影响、功能重要,许多学者认为其是对抗肿瘤细胞特别是耐药肿瘤细胞的一个潜力靶点。膜活性多肽是指一类通过与细胞膜相互作用发挥它们的生物活性,或破坏细胞膜导致细胞溶解,或通过细胞膜进入胞内转运物质或发挥其他杀伤机制的多肽。这种与细胞膜作用的生物活性使得膜活性多肽具有成为肿瘤细胞新靶点的抗癌药物的潜力。膜活性多肽的膜活性特征易引起活体产生严重的溶血毒副反应,特别是裂膜的抗菌肽类由于溶血问题在活体应用所受限制严重,因此设计不裂细胞膜的膜活性多肽符合活体应用的需求。同时面对临床严峻的肿瘤细胞耐药问题,开发与临床化疗药物作用机制不重叠的新型致死机制的膜活性肽符合肿瘤化疗的长远需求。除溶血问题外,膜活性肽的抗癌应用还面临在体内易被酶解、血液半衰期短、缺乏肿瘤靶向性等问题。针对目前膜活性肽抗癌应用面临的问题,本课题展开了以下研究:本论文的第一部分中,我们设计了一系列膜活性非裂膜的铱复合寡聚精氨酸多肽（Ir-peptides）并考察了疏水性、电荷、拓扑结构对其活性的影响。同时,这种构建的新型膜活性化合物表现出少有的胀亡的细胞致死机制,与现有市面上的抗癌药物机制不重叠。另外,这种新型的膜活性化合物对于肿瘤亲本细胞和耐药细胞表现出相似的杀伤活性,对正常细胞的杀伤毒性弱于肿瘤细胞,并且胀亡的致死机制能够引起小鼠骨髓来源的树突状细胞（Bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs）的成熟和活体内抗肿瘤免疫相关细胞因子的上调。本论文的第二部分中介绍了一种通过调节Ir-peptides与人血清白蛋白之间疏水力和静电力构建的纳米递送系统。构建的Ir-cR8-HSA NPs进入细胞后多肽从溶酶体中逃逸,维持了胀亡的杀伤机制,并且激活了活体抗肿瘤免疫效应和免疫记忆的保护功能。与单独使用Ir-cR8相比,这种白蛋白纳米粒形式溶血毒性明显减弱、血清稳定性显着提升、血液消除半衰期从不足半小时延长至约15 h,24 h肿瘤蓄积量提高了约3倍。此外,与上市的PTX-HSANPs相比,Ir-cR8-HSA NPs在相同给药条件下具有更好的抑瘤效果,表现为该组小鼠的4T1皮下肿瘤完全消退、4T1原位瘤生长抑制效果最显着。免疫记忆的保护作用使得Ir-cR8-HSA NPs治疗的小鼠能够抵抗同种肿瘤细胞从皮下和尾静脉的二次侵袭,对于抑制肿瘤复发有一定意义。以上两部分的研究提出了抗肿瘤新机制的膜活性多肽设计的理论基础,并基于膜活性多肽与白蛋白之间普遍存在的疏水作用和静电作用构建了具有一定适用性的膜活性多肽递送模板,一定程度上为克服其活体应用瓶颈提供了策略。这类多肽及其白蛋白制剂胀亡的致死肿瘤细胞方式相比于大多数化疗药物的凋亡机制具有更强的激活免疫的潜力,并且基于静电作用在肿瘤细胞和正常细胞间具有一定选择杀伤性,相比于传统化疗药物非选择性的杀伤作用具有一定的优越性。
聂佳莹[2]（2021）在《新机械方案制备富集脂肪源细胞外囊泡的成脂水凝胶并构建组织工程脂肪》文中提出背景:脂肪移植术已广泛用于美容和重建手术中的软组织填充,但存在移植后不确定重吸收（例如30%-70%的重吸收）、有限的存活率以及对供体部位不可避免的伤害等缺陷。商业化的透明质酸和胶原蛋白可以用作软组织填充产品,但是它们的填充效果不能长期保持。因此,迫切需要开发一种作为永久性软组织填充剂的可注射产品。脱细胞脂肪组织（decellularized adipose tissues,DAT）支架具有与脂肪组织细胞外基质相似的生物学特性,包括结构,机械模量和蛋白质组成。基于DAT的优势,DAT已在脂肪组织工程学中得到了广泛的研究。但是,进一步改善DAT的血管生成将有利于DAT的脂肪形成。此外,DAT水凝胶的可注射性更适合于微创填充。因此,我们创造性地使用机械方法从脂肪抽吸物中分离出脂肪组织来源的细胞外囊泡（adipose tissue derived extracellular vesicles,AT-EVs）作为血管生成和脂肪生成的诱导剂,并制备了富含AT-EVs的DAT水凝胶用于组织工程脂肪。方法:本研究分为两个部分,其一是AT-EVs和DAT的获取和表征。首先采用CD63-perilipin免疫荧光染色法检测AT-EVs在脂肪组织中的分布;然后通过匀浆并反复冷冻和融化（下文简称为冻融）从脂肪抽吸物中获取脂肪组织提取液（Adipose liquid extract,ALE）和少脂质脂肪组织。通过差速离心法从ALE中分离出AT-EVs,使用透射电镜、Nano Sight粒径分析、western blotting对AT-EVs进行表征。DAT水凝胶是通过优化的脱细胞技术制备的,使用扫描电镜对DAT水凝胶进行表征。其二是联合AT-EVs与DAT水凝胶构建工程组织脂肪。首先是通过将三个不同浓度的AT-EVs与血管内皮细胞和3T3-L1脂肪祖细胞共培养,筛选出AT-EVs促进血管生成和脂肪生成的最佳剂量。然后以最佳剂量与DAT水凝胶混合,将富集AT-EVs的DAT水凝胶注射到重度免疫缺陷小鼠-SCID小鼠的右背部皮下,并在左侧背部皮下注射等体积的DAT水凝胶作为对照组。术后第14天,将AT-EVs补充注射到右侧背部的新生组织中,并向左侧背部注射相同量的PBS溶液作为对照。在术后第2、4和8周收集两侧的样品,并进行体积测量、HE染色以及CD31-perilipin免疫荧光染色。结果:经CD63-perilipin免疫荧光染色发现,在脂肪组织的细胞间隙中存在AT-EVs,通过组织匀浆后差速离心,我们可以获取结构为圆形双层膜囊、颗粒粒径在33.0～272.5 nm之间,峰粒径为141.5 nm、与脂肪组织相比,表达较高的EVs表面标记物（CD63和TSG101）,不表达细胞骨架蛋白（β-actin）和细胞外基质蛋白（纤维连接蛋白）的AT-EVs。脂肪组织经脱细胞之后,SEM显示DAT主要由排列松散的条纹状胶原构成,多孔,未见脂滴和细胞核。制备成DAT水凝胶后,SEM示微观结构更致密,孔隙更多,孔径明显小于DAT。体外实验示,AT-EVs促进血管生成和脂肪生成的最佳剂量为50μg/ml。在体内实验中,结果显示实验组水凝胶在术后第4周和第8周体积保留率高于对照组。CD31荧光染色示实验组水凝胶血管新生高于对照组在术后第2周、第4周和第8周。HE染色、perilipin荧光染色示实验组水凝胶脂肪新生高于对照组在术后在第4周和第8周。结论:新机械方案可以在不通过体外培养的条件下获取AT-EVs,且富含AT-EVs的DAT水凝胶可促进血管生成和脂肪生成,并可以作为脂肪组织工程学的有前途的生物材料。
冯世明[3]（2021）在《异种脱细胞动脉基质修复猪肝外胆道缺损及良性狭窄的机制研究》文中指出[目的]研究人源异种脱细胞动脉基质修复滇南小耳猪肝外胆道缺损模型的短段（2-3cm）、长段（4-6cm）及长期（12个月）效果;探究吻合口瘢痕愈合时上皮间质转化（EMT）的形成机制。[方法]通过滇南小耳猪肝外胆道缺损模型的建立与不同长度脱细胞动脉基质修补后的血液学检查判断人源异种脱细胞动脉基质的修复效果;通过HE染色、Masson染色、免疫组化等实验方法判断胆道瘢痕愈合的机制。[结果]短段的人源异种脱细胞动脉基质可以稳定修复滇南小耳猪肝外胆道缺损模型,血液学显示短段人源异种脱细胞动脉基质可以改善胆道离断性损伤的吻合口愈合效果;长段修复较短段效果差,有待进一步深入研究;胆道的节段性缺损愈合时形成上皮间质转化。[结论]人源异种脱细胞动脉基质能够修复滇南小耳猪的肝外胆道缺损长达12个月,修复部位发生上皮间质转化,可以为临床上胆道损伤的修复提供新的治疗方法。[目的]检测VEGF对胆管上皮细胞增殖迁移能力的影响;制备VEGF-DOPA-脱细胞动脉基质并检测其作为组织工程化胆管的适用性。[方法]通过二步酶消化法制备脱细胞基质;通过CCK8、Transwell、细胞划痕及平板克隆等实验检测VEGF对胆管上皮细胞的迁移及增殖的影响;使用2mg/ml的DOPA-Tris-HCL溶液浸泡人源脱细胞动脉基质形成邻二苯酚基团平台,使用VEGF-A修饰该平台;通过CCK8检测材料浸出液的细胞毒性;通过镜下观察、HE染色、免疫荧光、Western Blot、电镜观察等实验技术检测猪胆管上皮细胞在该平台上的粘附、增殖特性;通过裸鼠皮下基质胶成血管实验检测材料诱导血管形成能力。[结果]VEGF可以促进胆管上皮细胞的增殖迁移;VEGF-DOPA-脱细胞动脉基质不具有细胞毒性,具有良好的生物相容性,在体外可以促进胆管上皮细胞的粘附,可以加快脱细胞动脉基质的再细胞化进程,且该材料可以促进血管定向生长。[结论]VEGF-DOPA-脱细胞动脉基质可以为组织工程胆管快速提供切实可行的材料,有望发展成为商品化的组织工程化胆管,为胆道损伤尤其是肝外胆道损伤的治疗提供更加优化的解决方案。
亦桐[4]（2018）在《脂肪细胞的分泌功能影响脱细胞血管支架在动物体内钙化进程的研究》文中进行了进一步梳理第一部分异种与同种动脉脱细胞血管材料在大鼠体内的免疫反应及钙化表现目的:先天性心脏病（Congenital Heart Disease,CHD）是最常见的先天性出生缺陷,随着我国放开二胎政策以及产检、手术水平的增加,预计先心病患儿数量逐年增多。CHD常需要应用不同材质、不同口径的血管材料进行手术治疗,然而目前市面上的血管或瓣膜材料都会在患者体内产生炎症反应从而钙化衰败。本研究期望探索有效的脱细胞血管材料的建造方法。通过大鼠皮下模型,来评价同种脱细胞血管材料和异种脱细胞血管材料在动物体内的炎症反应,以及钙化情况,从而初步了解两种材料引起机体免疫反应及钙化的相关性。方法:取供体大鼠的颈动脉材料约5cm,以及猪颈动脉5cm,将血管材料裁剪成0.5×0.5cm的血管片。用胰酶法对血管材料进行脱细胞处理,并且对脱细胞水平进行鉴定。将符合标准的血管材料冻干保存。用胰酶法制作猪颈动脉和大鼠降颈动脉脱细胞血管材料,并且对脱细胞水平进行鉴定。实验组在6周龄SD大鼠皮下植入同种脱细胞血管材料（N=6）;对照组6周龄SD大鼠皮下植入猪颈动脉脱细胞血管（N=6）,每只四个位点。两组内取材时间分别为血管移植后2周和4周。通过HE染色、天狼星红染色、免疫荧光染色、免疫组化以及Von Kossa硝酸银法检查材料于动物体内移植后的再细胞化及钙化情况是否有差异。结果:（1）脱细胞镜下结果显示,胰酶法脱细胞处理的血管材料没有细胞核残余,血管材料外观形态基本正常。猪脱细胞血管DNA平均光密度值为（4.59±0.49）,未经脱细胞血管处理的猪血管DNA光密度值（564.35±26.13）。同种脱细胞血管DNA平均光密度值（5.45±0.24）,处理前的同种血管DNA光密度值（497.1±7.12）。表明该处理方法可以有效去除血管组织中的细胞成分。（2）天狼猩红染色显示2h胰酶的处理的血管组织绿色弹性纤维缺失断裂明显,表明血管外膜、中膜弹性纤维有明显损害。胰酶处理1h,Ⅰ、Ⅲ型弹力纤维波浪状结构保存相对完好。0.05%胰酶浓度37℃处理1h的血管材料能够有效去除细胞成分,并且保留较好的血管弹性纤维形态。（3）两周后从大鼠体内取出血管,血管移植物基本保持原有形状外观,没有分解的征象,外边可见包裹的纤维组织。HE染色可见大量的自体细胞渗入脱细胞血管的纤维蛋白支架内。每个时间点两组血管细胞渗入数量均有明显差异（二周P=0.023,四周P=0.019）。宿主细胞通过血管两侧的断裂位置渗入的程度更深,数量更多。在远离断端的靠近血管壁中心的位置,细胞渗入主要发生在内外膜（行进方向为血管横截面方向）,渗入速度较血管断端慢。4周的皮下植入,可以见到包裹血管的纤维组织中有滋养血管生长,包裹血管材料周围的纤维组织内也布满自体细胞,自体组织与移植血管组织没有明显界限,需要通过移植组织的弹性纤维条状形态进行区分。（4）细胞免疫荧光染色发现,同种脱细胞血管中引起的巨大多核巨噬细胞的数量少于异种脱细胞血管。二周时同种脱细胞血管镜下的多核巨噬细胞渗入个数为 1.60± 1.70 个/7.6*104μm2,异种脱细胞血管为 2.14±1.64 个/7.6*104μm2,两组没有显着性差异（P=0.055）。四周时,多核巨噬细胞渗入增多,同种材料中6.58±2.72个/7.6*104 μ m2,异种材料中7.85±3.15个/7.6*104 μ m2,两组有显着性差异（P=0.012）。镜下可见,巨大多核的巨噬细胞多出现于血管材料表面,难以渗入血管材料内部。CD68免疫组化染色的巨噬细胞明显聚集于血管内外膜接触表面,提示血管与自体组织接触表面发生着巨噬细胞介导的炎症反应。（5）钙化染色结果发现,4周时,两组的钙化镜下未见明显差异,原子火焰法检测钙化2周时同种脱细胞血管钙化为1.08±0.34μg/mg,异种脱细胞血管钙化为1.23±0.32μg/mg（P=0.44）;4周时同种脱细胞血管钙化为1.75±0.34μg/mg,异种脱细胞血管钙化为3.06±0.30μg/mg（P<0.01）。同种脱细胞血管的钙化程度两周、四周时均明显轻于异种血管组。结论:通过0.05%胰酶、SDS、Triton的化学消化法可以制作脱细胞率达99%以上的细胞外基质。同种或异种脱细胞血管支架,虽然去除了 99%以上的细胞成分,在动物体内实验仍然引起以巨噬细胞为主的炎症细胞聚集。同种脱细胞血管支架在动物体内引起多核巨噬细胞的数量明显少于异种脱细胞血管支架。同种脱细胞血管支架在动物体内4周引起的钙化程度明显小于异种脱细胞血管支架。脱细胞血管的钙化反应与巨噬细胞介导的免疫炎症反应明显相关,然而具体机制仍需要进一步探究。第二部分脂肪干细胞体外分化得到的脂肪细胞分泌功能的鉴定目的:种子细胞的应用在血管组织工程里十分普遍,他们可以通过自身分泌的活性因子改变血管材料局部微环境,改善机体细胞对材料的细胞免疫反应,引导材料重塑。正常体内血管周围是存在密集结缔组织和脂肪组织包裹的,血管周围的脂肪细胞分泌功能影响着血管钙化的病理生理过程。然而对于脂肪细胞的培养,没有标准流程,本研究拟从大鼠腹股沟脂肪组织中提取脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）,探索其分化为脂肪细胞的条件,并且检测其分泌抗钙化因子的能力。为将来在组织工程血管中的应用提供基础支持。方法:通过Ⅰ型胶原酶消化法提取大鼠腹股沟脂肪干细胞,并在光镜下进行形态学观察,应用流式细胞学对P3代进行表型检验。对P1、P2、P3、P4、P5代均进行成脂分化培养,比较哪一代ADSCs分化为脂肪细胞的效率较高,油红0染色,计数统计成脂分化率。取出P3代ADSCs细胞进行成脂分化培养,免疫酶联染色法检测ADSCs和分化来的脂肪细胞分泌脂联素（Adiponectin,APN）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）的能力,设立标准品,做标准曲线,通过曲线计算样品浓度。细胞计数由两人不知道分组的情况下完成。结果中的数据以“均数±标准差”形式表示,两组间比较用T检验。多组间比较用ANOVA单因素方差分析,两两比较用LSD检验。使用SPSS.20.0进行统计分析,P<0.05被认为有统计学差异。结果:提取细胞经过24-48小时后开始贴壁,于5-7天开始形成集落或团簇生长,7天基本达到80%融合,细胞形态均一成长梭型外观,细胞排列紧密形成典型旋涡状结构。传代到P3代对细胞表型进行检测:少于3.6%的细胞表达造血干细胞表面因子CD34;CD29,CD166间质细胞表面标志,均有60%以上的表达;边缘型造血干细胞表面抗体ABCG2表达约为42%,与以往文献报道相符,可以确定提取成功ADSCs。对P3,P4,P5代进行成脂分化7天的平均成脂分化率分别为61.6± 15.4%、57.23±6.7%、55.8±12.96%,均高于55%,然而P1、P2成脂分化率分别为9.06±4.82%、35.6±12.1%,均低于35%（P<0.05）组间具有显着差异。虽然P3,P4,P5代两两无显着性差异,但与镜下可见P4、P5成脂分化出现较多细胞漂浮缺失部位,而P3代细胞贴壁情况良好。表明在第P3代的ADSCs诱导来的脂肪细胞成脂分化效率较好,成脂分化过后,漂浮死亡细胞较少。免疫酶联方法检测结果表明脂肪细胞可以大量分泌APN（67.86±2.36 ng/ml/天）、VEGF（757.91±21.83 pg/ml/天）HGF、（261.8±21.6pg/ml/天）。ADSCs 分泌的 APN（低于 1.56ng/ml/天）、VEGF（214.01±11.61 pg/ml/天）相对脂肪细胞分泌功能较低（P<0.01）。结论:脂肪来源的干细胞可以成功分化为具有分泌大量抗炎症因子APN和血管再生因子VEGF和HGF的脂肪细胞。脂肪干细胞的P3代在分化7天后达到成脂分化率较高。第三部分分化来的脂肪细胞的分泌功能影响异种脱细胞血管在动物体内的炎症及钙化反应目的:心外科血管移植材料到患者体内后,经历着一系列新细胞的长入以及免疫炎症因子的作用,其中巨噬细胞介导的炎症反应以及磷酸盐沉积与移植血管的钙化密切相关。故对于免疫炎症的干预可能是减轻材料钙化途径。体内外的研究均表明,脂联素（Adiponectin,APN）具有抑制钙化的作用。鉴于脂肪细胞可以分泌大量APN和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）,还有肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）的能力。本实验希望通过诱导脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）分化为脂肪细胞（Induced Adipocyte Cells,IACs）,并且用温度反应性培养皿建立脂肪细胞片（Induced Adipocyte Cell-Sheets,IAC-S）,直接粘附于脱细胞血管材料型工程血管材料。检测IAC-S在体内的分泌功能,以及对脱细胞血管材料炎症及钙化的影响。方法:用我们以前的方法建立脱细胞猪颈动脉血管材料,并对脱细胞有效性进行检测,裁剪成1.0×1.0厘米大小的血管片,冻干备用。对实验组大鼠腹股沟脂肪干细胞的提取并且传代培养,并且将P3代细胞种植于温度反应性培养皿上,融合至80%时进行成脂肪细胞分化,建造脂肪细胞片。对脂肪细胞片的分泌APN、VEGF、HGF的分泌功能进行鉴定。应用转移膜将IAC-S完整转移并且粘附在猪脱细胞血管材料外膜,制作成IAC-S处理的脱细胞血管材料。实验组将IAC-S血管（N=6）移植于相应的供体大鼠,对照组移植猪颈动脉脱细胞血管（N=6）,1、2、4、8周时,依次取出每个位点移植物。分别做HE染色、免疫荧光染色、Von Kossa硝酸银染色、以及原子火焰法检测材料钙含量检测。连续变量符合正态分布时以均数±标准差表示;不符合正态分布用四分位数表示;采用独立样本T检验方式或非参数检验。比较两组巨噬细胞（Macrophage）渗入数量以及分型（Macrophage 1,M1;Macrophage 2,M2）,M1/M2比值,钙化程度。P<0.05表示差异有显着性。统计分析采用SPSS20.0软件。结果:（1）成功通过胰酶法制做出来了脱细胞猪颈动脉材料。（2）大鼠腹股沟脂肪组织能够成功分离、诱导培养出具有分泌功能的脂肪细胞。通过温度反应性培养皿,我们可以建造出完整的IAC-S。通过细胞转移膜,可以把IAC-S转移到脱细胞血管材料表面,构成贴和IAC-S的脱细胞血管材料。（3）免疫酶联染色法可以检测到APN和VEGF分泌量在成脂分化过后明显增高:APN由低于1.56ng/ml/细胞片/天升高到70.25±6.1 ng/细胞片/天（P<0.01）;VEGF 由 226.93±40.72 pg/细胞片/天升高到 805±25.92 pg/细胞片/天（P<0.01）。然而 HGF 分泌量由 368.9±31.02 pg/细胞片/天降低到265.39 ± 10.74pg/细胞片/天（P<0.01）。（4）免疫荧光染色表明IAC-S在移植一月后仍具有分泌APN的能力。（5）在第4和8周,单纯脱细胞血管组中,CCR7+细胞（M1）明显高于CD163+细胞（M2）的比例（P<0.001）,并且第8周时多核巨噬细胞明显增多。然而,IAC-S处理组的血管材料中,M2型巨噬细胞相对于M1型则占有较大比例（P<0.001）（5）脱细胞血管组的M1/M2均大于1,每个时间点的促炎型M1巨噬细胞均多于M2抗炎巨噬细胞;而IAC-S组M1/M2均小于1,每个时间点的抗炎型M2巨噬细胞均多于M1促炎巨噬细胞。（6）单纯脱细胞血管组的钙化程度明显升高,两组在2、4、8周的取材均有统计学差异性（P<0.05）。结论:温度反应性培养皿可以成功建立具有分泌功能的脂肪细胞片,该脂肪细胞片在体内外均能分泌APN、VEGF、HGF因子。脂肪细胞片覆盖的脱细胞血管支架在动物体内能够引起渗入的巨噬细胞表型的改变,使得M2抗炎型巨噬细胞比例增高,并且钙化程度明显降低。
罗程[5]（2012）在《环孢素预处理对同种带瓣血管移植的保护作用》文中进行了进一步梳理背景：白1966年Ross首次应用同种异体带瓣主动脉治疗肺动脉闭锁病人获得成功后,抗生素灭菌、程控降温、深低温保存等技术的发展,推动了同种带瓣血管（valved homograft conduit, VHC）在心脏外科手术中的广泛应用。同种带瓣血管结构自然、中心血流及抗返流、免疫性低、不易形成血栓、不易附着细菌等特性,成为复杂先天性心脏病重建右（左）室流出道的主要生物材料。但临床上经常会遇到同种瓣膜由于内在异常而退化的情况。虽然这种情况并不一定导致瓣膜功能异常。在年轻患者中可见到同种瓣膜植入后早期衰败,这种结构性衰败可能有其免疫学基础。因为瓣膜的供受体之间不进行主要组织相容性复合体抗原的配型检验,而且患者不常规接受免疫抑制治疗。术后常因发生反流、狭窄及免疫排斥而导致管道早期失功,需二次或多次手术更换VHC。VHC在小儿表现出较成人使用寿命短、耐久性差的特点,同种异体血管移植后也会引起宿主机体的钙化反应,其最终结果造成移植物狭窄和闭塞,这是同种异体血管移植成功的一大障碍。因此如何降低同种异体血管的钙化成为一个新的研究方向。血管钙化过程过去被认为是一个被动过程,与自然老化和细胞凋亡有关。近来研究认为它是一个主动的、细胞参与调节的过程。细胞外钙调蛋白（包括MGP和胎球蛋白-A）是钙磷沉积的强抑制剂。正常情况下,主动脉和冠状动脉壁,以及早期内膜纤维化病变（粥样斑形成之前）中没有MGP表达,但是在动脉粥样硬化性损伤,尤其是脂质丰富的斑快和钙化区域周围表达显着增加。在每一个有钙质沉积的标本中均能检测出MGP,尤其是微钙化的区域。免疫组织化学研究使用抗人类MGP单克隆抗体染色动脉粥样硬化性损伤的动脉壁,发现局部大量的MGP聚集。这说明MGP是一种强有力的抑制动脉钙化的局部作用因子。异体血管移植前必须经过预处理,以消除血管上的异体抗原。降低同种异体血管免疫钙化的方法有多种,如酒精、甲醛、甘油浸泡；戊二醛（glutaraldehyde, GA）、多聚环氧化合物（polyepoxycompound, PC）交联；深低温冷冻、冻干加辐射、青霉素和链霉素离体预处理、玻璃化法、自体内皮细胞衬里等。国内外学者在降低同种异体血管抗钙化方面均做了大量的研究。异体血管去内皮后自体内皮细胞衬里为一种比较理想的方法。摸索出更好的保存和处理同种异体血管的方法,使其像自体血管一样被运用,具有非常重要的意义。结合上述各方面,将自体血管内皮细胞经体外培养,种植于经冻干辐照处理的异体血管,将可能减轻同种异体血管移植的钙化,为其临床运用展现出光明的前景。近年来随着基因工程技术在组织工程的应用,有望通过基因重组技术对种植的血管内皮细胞进行基因修饰,不仅可减轻钙化的问题,而且通过改变抗凝和促凝基因的表达水平.从而增强内皮细胞凝血活性,将提供一个更为理想的方法.这在国内外已有相关文献报道。另外一种方法是用环孢素预处理同种组织,这在早期曾应用于狗的同种静脉,该处理方法可提高移植物的存活,电镜扫描也发现退行性变减轻。环孢素是一种高效免疫抑制剂,已在临床应用于个别瓣膜置换的患者,因为该药有严重的不良反应,一般主张瓣膜移植后慎用。已有大量资料显示同种瓣移植后早期使用免疫抑制剂具有抗钙化作用,其机制在于抑制移植后早期的免疫排斥,减轻了内皮细胞和平滑肌细胞所受到的免疫攻击,保护了内皮细胞和平滑肌细胞。Augelli等对接受移植同种静脉的狗应用与不应用环孢素治疗进行观察,发现应用环孢素狗的移植物存留率提高。周江桥等用自制的环孢素A（CsA）复合肾灌注液对移植肾进行灌注,观察其对肾缺血再灌注损伤的保护作用,结果显示,实验组血清BUN及Cr值明显低于对照组（A组及B组）,证明CsA对移植肾具有保护作用。血管钙化过程过去被认为是一个被动过程,与自然老化和细胞凋亡有关。近来研究认为它是一个主动的、细胞参与调节的过程。细胞外钙调蛋白（包括MGP和胎球蛋白-A）是钙磷沉积的强抑制剂。正常情况下,主动脉和冠状动脉壁,以及早期内膜纤维化病变（粥样斑形成之前）中没有MGP表达,但是在动脉粥样硬化性损伤,尤其是脂质丰富的斑快和钙化区域周围表达显着增加。在每一个有钙质沉积的标本中均能检测出MGP,尤其是微钙化的区域。免疫组织化学研究使用抗人类MGP单克隆抗体染色动脉粥样硬化性损伤的动脉壁,发现局部大量的MGP聚集。这说明MGP是一种强有力的抑制动脉钙化的局部作用因子。因此,通过PCR检测环孢素处理后的同种带瓣血管基质Gla蛋白（Matrix Gla Protein,MGP）的表达水平可了解钙化反应的发生,并可对其强烈程度进行评价。目前未见文献报道有关用环孢素预处理同种瓣膜钙化影响的对照随访研究。目的：研究同种带瓣管道移植环孢素预处理后,糖代谢、免疫反应、移植血管钙含量及MGP mRNA在移植血管中的表达情况,探讨环孢素预处理对同种带瓣血管移植的保护作用。方法：将成年白兔50只随机分2组,体重2.50-3.50Kg。左侧颈动脉（接受移植时的供体带瓣主动脉接受环孢素预处理）作为处理组,右侧颈动脉（接受移植时的供体带瓣主动脉不接受环孢素预处理）作对照组。再将每个组的白兔随机分为5个小组,每组5只,于移植后2,4,8,12周切取移植标本,进行光镜和电镜观察,糖代谢的测定取血后流式细胞仪测定CD25,免疫组化测定CD40的表达,测定钙含量、RT-PCR检测MGP mRNA蛋白。结果：1.形态学：实验组的内皮细胞脱落和平滑肌细胞钙化较对照组轻。2.免疫反应的趋势：实验组：在移植后2-4周CD25、CD40的表达水平明显低于对照组,差别有统计学意义（P<0.05）,但在移植后8、12周的表达水平与对照组比较差别差别无统计学意义（P>0.05）。3.钙含量的变化趋势：实验组在移植后2,4,8,12,周4个不同时间点的钙含量明显低于对照组,差别有统计学意义（P<0.05）。4.基质Gla蛋白（Matrix Gla Protein, MGP） mRNA的表达：移植后2,4周MGP mRNA水平逐渐升高。移植后8,12周水平开始下降。呈现先升高后下降的动态变化。结论：1.环孢素预处理的同种带瓣血管可提高移植血管通畅率,降低血栓形成,血管内皮细胞改变较轻。2.使用免疫抑制剂可以降低移植血管的钙含量,抗钙化的机理在于对带瓣血管内皮细胞和平滑肌细胞的保护。3.同种带瓣血管移植后的钙含量不与当时的免疫排斥水平成正比,但二者互为因果,互相影响。4. MGP mRNA水平的动态变化可能与环孢素抑制血管平滑肌细胞的表型转化及增殖有关。
王国锋[6]（2011）在《腹腔预处理去细胞光氧化猪主动脉瓣膜制备组织工程瓣膜》文中研究表明第一部分去细胞结合光氧化对猪主动脉瓣膜组织学和生物力学的影响目的：采用去细胞结合染料介导的光氧化法处理猪主动脉瓣膜,寻找合适去细胞方案；评价光氧化交联法对猪主动脉瓣膜的生物力学性能的影响。方法：体外性能的研究：将120个瓣膜随机分为12组,每组10个,通过对瓣膜多步骤的去细胞效果,以及胶原弹力纤维保存的完整性等方面评价,获得去细胞的合适方案；将修剪好的40去细胞猪主动脉瓣膜随机分为4组,每组10个。F组：为新鲜组,置于无菌PBS液中40℃保存备用。DP组：为去细胞结合光氧化处理组,共计三个亚组：DP12h组：为去细胞处理后再进行染料介导的光氧化处理12小时；DP24h组：去细胞后光氧化反应24小时；DP36h组：去细胞后光氧化反应36小时。通过热皱缩温度、组织含水量、最大抗张强度和最大拉伸距离及体外酶降解实验评价光氧化的最理想时间。体内性能研究：得到合适去细胞光氧化方案后,将45个瓣膜分为3组,新鲜组、戊二醛组、去细胞光氧化组。通过热皱缩温度、最大抗张强度和最大拉伸距离评价各瓣膜性能。然后建立大鼠皮下包埋模型,12周后获取组织标本,通过HE染色,比较各组瓣叶的形态结构变化及炎性反应情况；原子吸收光谱法测定组织钙含量,评价光氧化处理对去细胞猪主动脉瓣膜的体内生物稳定性及抗钙化性能影响。结果：采用多步骤去垢剂-酶消化法处理猪主动脉瓣膜,能够有效的去除瓣膜的细胞成分同时保留了完整的细胞外基质成分。第Ⅷ组脱细胞处理后的猪瓣膜比较理想,组织大体形态和新鲜猪瓣膜相似,光镜观察结果显示：细胞成分去除彻底,未见明显细胞残留成分,胶原弹力纤维保存较完整,组织结构无明显疏松。光镜结果显示,经光氧化反应进一步交联后去细胞瓣膜的组织结构将变紧凑,24小时可达最佳效果。机械性能检测显示,光氧化交联去细胞后的瓣膜,其机械性能将逐渐恢复,至光氧化24小时后去细胞猪主动脉瓣膜的机械性能与新鲜组比较无统计学差异（P>0.05）；体外抗酶降解实验结果表明,去细胞光氧化后的猪主动脉瓣膜抗酶解能力相比新鲜的猪主动脉瓣膜有所提高,光氧化处理24小时后的抗酶解能力要优于12小时,与再处理12小时的效果无明显差异（P>0.05）。体内性能研究结果显示,大鼠皮下包埋实验中,新鲜对照组的猪主动脉瓣膜发生了比较严重、广泛的炎性反应,并出现了一定程度的溶解；去细胞光氧化组的炎性反应是所有组别中最轻的。钙含量测定结果显示去细胞光氧化组钙化程度最低,与其它两组有统计学差异（P<0.05）；去细胞光氧化组的生物稳定性要优于新鲜的猪主动脉瓣膜及戊二醛组,瓣叶无明显降解,炎性细胞浸润少且范围局限,组织结构保存较好并有新生血管形成。戊二醛处理组可见明显大片团聚钙化区域,钙含量测定结果与其它两组比较有统计学差异（P<0.05）。结论：1.采用多步骤去垢剂一酶消化法（0.25%曲那通X-100 24h,0.05%胰蛋白酶和0.02%EDTA 10min,30u/m1DNase-Ⅰ和0.3mg、mlRNase-A 12h）是适合猪主动脉瓣膜的较佳脱细胞方案,能够有效去除其细胞成分,同时完整保存胶原纤维及弹力纤维。2.光氧化反应对去细胞猪主动脉瓣膜的交联作用呈时间依赖性,至光氧化反应24小时性能表现最佳。3.相比新鲜猪主动脉瓣膜,去细胞光氧化反应交联的猪主动脉瓣膜脉免疫原性低,生物耐受程度好。而相对戊二醛处理的猪主动脉瓣膜则具有更好的抗钙化性能。4.去细胞结合光氧化处理有可能成为前景广泛、适合于处理猪主动脉瓣膜新型处理方法。第二部分腹腔预处理制备组织工程瓣膜目的：评价腹腔预处理的去细胞光氧化的猪主动脉瓣膜在体内生物学性能及抗栓性能,细胞生长情况。方法：成年狗10只,雌雄不拘,随机分为两组,一组为腹腔预处理组,一组为普通组。去细胞光氧化的猪主动脉瓣膜,植入狗的腹腔内5天,然后取出裁剪成带瓣血管片,吻合到同一只狗的腹主动脉上,2月后取出,普通组是将去细胞光氧化的猪主动脉瓣膜裁剪成带瓣血管片直接吻合到狗的腹主动脉上,2月后取出。观察其细胞生成情况,Ⅷ因子染色和α-SMA免疫组化染色观察其内皮细胞和肌成纤维细胞的生长情况,通过热皱缩温度、最大抗张强度和最大拉伸距离评价其机械性能。结果：两组狗术后均无死亡,大体观察两组带瓣血管片光滑,无血栓形成。Ⅷ因子染色和α-SMA染色显示预处理组的带瓣血管片上有大量的肌成纤维细胞生成,表面有单层排列的内皮细胞,普通组有少量的肌成纤维细胞和散在的内皮细胞生成。机械性能研究显示腹腔预处理组的带瓣血管片热皱缩温度、最大抗张强度和最大拉伸距离明显强于普通组的带瓣血管片p<0.05。结论：去细胞结合光氧化反应处理的猪主动脉瓣膜植入体内后无不良反应,生物稳定性好,无血栓形成腹腔预处理制备的组织工程瓣膜体内能够再细胞化,其机械性能保持好,抗栓性能好。腹腔预处理方法有望成为构建组织工程瓣膜的新途径。
张茂柏[7]（2009）在《活性同种瓣的制备保存研究》文中认为人工心脏瓣膜发展至今已有50年历史,大约研制出近百种人工瓣膜,尽管现代人工瓣膜的性能己经显着提高,但仍然无法克服其固有缺点。20世纪60年代,同种瓣膜开始临床使用,其优良的血流动力学和良好的生物相容性,吸引了许多学者的注意力。近年来,同种瓣的低温保存及临床应用已经逐步在国内外开展起来,但由于各方的技术方法的不同,实际保存效果和临床应用也有差异。目的:在相同条件下,通过不同的降温、复温方法对同种生物瓣进行液氮保存,研究更加有效的同种瓣膜制备保存方法,探讨降温、复温过程中可能对同种瓣膜造成损伤的原因以及降低瓣膜损害的处理方法。方法:采集供体心脏（猪）20例,无菌条件下获取主、肺动脉瓣及瓣上血管,经灭菌处理后,随机分为实验组和对照组,分别以-1℃/min和-0.5℃/min的速率降温,至液氮保存6个月后,分别予以快速复温和阶段复温。应用组织形态学和免疫组织化学的方法对同种瓣膜的细胞结构和活性进行检测。结果:光镜下组织形态学显示,两组均可见到内皮细胞的存在,胶原纤维、弹力纤维清晰可见,但对照组内皮细胞脱落及弹力纤维的破坏程度较实验组更为严重,两组相比较P＜0.05（Z=-3.053,P=0.002）;对照组的波形蛋白表达较少,与实验组相比较,P＜0.05（Z=-2.881,P=-0.004）。电镜下所见实验组的内皮细胞较为完整,其内弹力膜的破坏程度也较对照组轻。结论:以-1℃/min的速率降温对同种瓣膜进行液氮保存,解冻时快速复温的方法,对同种瓣膜的损伤更小,对于瓣膜移植后的耐久性有更好的预期。
孙学军[8]（2007）在《阿托伐他汀对深低温保存心脏瓣膜MHC-Ⅱ分子表达的影响》文中认为第一部分活性同种心脏瓣膜制备与保存过程目的:探讨合适的活性同种心脏瓣膜制备与保存方法。方法:用兔子作为活性同种心脏瓣膜的供体动物,采集实验所需的心脏瓣膜,将供体心脏瓣膜进行一系列处理后深低温保存,保存时间大约为2周,对瓣膜进行组织学、破坏强度、组织含水量、热皱缩温度、MHC-Ⅱ抗体的检测。结果:试验供体的兔子心脏瓣膜切除过程中,主动脉瓣膜和二尖瓣整体都保持了结构的完整性;经过深低温保存2周后,瓣膜在生物力学各方面良好,深低温保存后瓣腆组织的内皮细胞有小部分脱落。HE染色显示少许的炎症反应,形念学可见剩余的内皮细胞呈现扁平单层排列,梭形或者多边形,典型的呈“铺路石”状改变;VG+ET显示内皮下暴露的弹力纤维与胶原纤维的排列整齐、均匀、有序,符合瓣膜的受力情况;免疫荧光标记MHC-Ⅱ分子相关抗原的细胞发出特异性的黄绿色荧光;DAPI复染的有核细胞均匀的发出蓝色荧光。结论:该种方法对瓣膜的制备和保存适用、简便、有效,为活性同种心脏瓣膜的制备和保存提供了有效的途径。第二步部分活性同种心脏瓣膜免疫排斥反应的研究目的:构建活性同种心脏瓣膜免疫排斥反应模型,并通过研究瓣膜的组织形态学、物理学、生物力学、免疫学特性,研究免疫排斥反应对瓣膜的影响,利用阿托伐他汀对瓣膜组织的MHC-Ⅱ分子表达的抑制作用,降低活性同种心脏瓣膜免疫排斥反应,减少由于免疫反应引起瓣膜的退化和钙化现象,延长心脏瓣膜移植后寿命。方法:取出经深低温保存后的心脏瓣膜,将16只实验组动物分成4组,分别把主动脉瓣环和二尖瓣环各一半埋置动物的皮下,实验组分别以1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg阿托伐他汀灌胃,空白对照组同样方法给等量的生理盐水,给药4周,检测瓣膜的各项指标。结果:试验组和对照组动物伤口愈合良好,对照组皮下埋置的瓣膜包裹现象较实验组明显,瓣膜的组织形态学和MHC-Ⅱ抗体两项中试验组均明显好于对照组,其余各项指标的检测结果也有不同的差异,DAPI复染各组并无显着差异。结论:实验组与对照组相比,在免疫排斥和组织形态学方面都起到了保护的作用,阿托伐他汀对由MHC-Ⅱ分子引起的同种心脏瓣膜移植后排斥反应有抑制作用。
张毅勋[9]（2007）在《降温顺序对猪主动脉瓣制备保存影响的实验研究》文中研究指明目的:确定猪主动脉瓣保存过程中在相变点时较为合理的降温顺序。促进生物瓣膜保存技术的提高,进一步延长生物瓣膜的使用寿命。方法:本课题于猪宰杀后20min内清洁条件下取出心脏,立即置于冰生理盐水运送,无菌条件下取带瓣主动脉,清洗、修剪、将瓣环置入含抗生素的M199营养液中。37℃下孵化、灭菌处理,进行细菌学检测。将灭菌后的心脏瓣膜用M199液漂洗三次,漂洗后先在4℃冰箱平衡15min。然后瓣膜置入冻存管中,加入冻存液（含10%二甲基亚砜、10%胎牛血清、80%M199）后标记,放入程控降温仪,设定程序,测量猪主动脉瓣膜的相变点（0℃—-4℃）,并以-1℃/min的速率通过程序降温降至0℃,然后在相变点时以不同的降温速率（分别以-1℃/min、-2℃/min、-3℃/min、-4℃/min、-5℃/min分为5组）降温,待降至-4℃时,继续以-1℃/min的速率降温至-60℃,将程序降温仪降温后瓣膜组织置于-80℃的冰箱,使其在-80℃恒温状态下保存24小时后移入液氮贮存,14天后复温检测。在各实验组之间,通过对瓣膜组织结构、超微结构、理化性质及生物力学等特性的评价,探讨相变点时生物瓣组织结构不同降温速率中的最佳速率,用以确定生物瓣保存过程中最佳的程序降温顺序,进一步延长生物瓣膜的使用寿命。结果:猪主动脉瓣膜相变点为0℃—-4℃;组织学结果显示,-4℃/min组瓣膜表面内皮细胞较完整。各层结构清晰可辨,纤维网架结构保持完整。其他各组内皮细胞脱落多见,内皮下胶原较为松散,偶有胶原纤维断裂现象;扫描电镜显示-4℃/min组瓣膜表面内皮细胞覆盖较完整,其他各组可见散在或小片状内皮细胞,较为局限。细胞下纤维成分均清晰可见;透射电镜示-4℃/min组细胞形态较为一致,细胞呈卵圆形或柱形,细胞表面有绒毛状突起,细胞内可见大量质膜小泡、内质网、线粒体等结构。其他各组细胞溶解、破裂现象较为常见;各组瓣叶厚度未见明显差异（F=0.807;P=0.54）;瓣膜组织含水量随着组别呈逐渐增高趋势（F=8.238;P=0.001）;组织热皱缩温度-4℃/min组与其他各组均有显着性差异（F=4.674;P=0.012）。其余各组之间无显着性差异;生物力学特性-4℃/min组与其他四组瓣膜相比破坏强度（F=3.904;P=0.023）及伸长比（F=15.752;P=0.000）有显着性差异,其他各组之间无统计学意义。结论:0℃—-4℃为猪主动脉瓣膜的相变温度;相变点时增加降温速率可以改善瓣膜保存状况;猪主动脉瓣膜制备保存过程中以-1℃/min的降温速率常规降温,相变点时给予增加至-4℃/min,超过相变点后仍以-1℃/min进行的降温顺序是目前猪主动脉瓣膜制备保存中最为有效的方法。
吴松[10]（2007）在《脱细胞异种心脏瓣膜/可降解聚合材料构建复合组织工程瓣膜的初步试验研究》文中研究表明脱细胞异种心脏瓣膜／可降解聚合材料构建复合组织工程瓣膜的初步试验研究目的：构建新型复合瓣膜，进行体外生物力学测试和动物体内移植试验，对其进行初步评价，为进一步的试验研究提供依据。方法：新鲜猪主动脉瓣经trypsin／EDTA法脱全部细胞后做为支架，用可降解聚合材料3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯（3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate，PHBHHx）涂层，构建复合瓣膜（hybrid valve），进行如下试验：（1）采用单轴生物拉伸机对hybrid valve进行体外生物力学测试，以新鲜猪主动脉瓣（fresh valve）和脱细胞未涂层猪主动脉瓣（uncoated valve）做为对照，观察脱细胞和涂层处理对瓣叶生物力学相应指标的影响。（2）以脱细胞羊肺动脉血管片为支架，用PHBHHx涂层，构建复合补片（hybrid patch）并植入New Zealand白兔腹主动脉内（9只），进行小动物血管内生物相容性试验，以脱细胞未涂层羊肺动脉血管片（uncoated patch）做为对照（9只），在体观察涂层材料PHBHHx的细胞相容性、引导性和抗血栓性。（3）体外生物力学测试和小动物血管内相容性试验结果满意后，开始hybrid valve的大动物体内移植试验。方法：在全麻常温非体外循环下，将hybrid valve带瓣管道植入成年小尾寒羊的肺动脉瓣位（4只），以脱细胞未涂层瓣膜（uncoated valve）做为对照（2只）。术后18周将受试动物处死，取出植入瓣膜进行组织学、免疫荧光染色、扫描电镜检查和钙含量测定，对hybrid valve进行初步评价。结果：（1）hybrid valve具有自然瓣膜的形态结构，瓣叶柔软，体外生物力学测试结果表明，瓣膜抗拉强度明显提高，有助于增强耐疲劳性。（2）hybrid patch兔血管内生物相容性研究表明，hybrid patch形态满意，管腔面无血栓，新生内膜增生适度，自体再细胞化完全，全身炎症反应轻微。（3）hybrid valve羊体内移植试验结果显示，hybrid valve瓣膜形态良好，瓣叶柔软，无明显钙化和血栓形成；扫描电镜显示，瓣膜表面光滑；免疫荧光染色检测，证实瓣膜表面新生内膜（neointima）组织中类内皮细胞（endothelial-like cells）呈CD31阳性反应，沿瓣叶表面单层连续排列，瓣膜间质细胞呈现SMA阳性反应；钙含量测定表明，hybrid valve钙含量明显低于uncoated valve（P＜0.05）。结论：复合瓣膜（hybrid valve）具有自然瓣膜的三维形态结构，良好的生物力学特性、生物相容性和细胞引导性。它主要通过引导或诱导自身组织再生，进行一定程度的瓣膜间质重建、修复和塑型，已经初步具备组织工程瓣膜的雏形，是一种有前途的心脏瓣膜替代物。
二、同种瓣内皮细胞再孵化的进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、同种瓣内皮细胞再孵化的进展（论文提纲范文）
（1）膜活性铱复合寡聚精氨酸多肽的抗肿瘤研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 细胞致死靶点-生物膜 |
| 1.2 膜活性肽的简介 |
| 1.2.1 抗菌肽 |
| 1.2.2 细胞膜穿透肽 |
| 1.3 膜活性肽的抗癌改造 |
| 1.3.1 膜活性肽的序列改造 |
| 1.3.2 膜活性肽的化学修饰 |
| 1.3.3 膜活性肽的递送 |
| 1.4 膜活性肽药物的发展 |
| 1.5 白蛋白作为药物载体的发展 |
| 1.6 化疗药物的免疫激活能力 |
| 1.7 多种致死方式的免疫激活潜力 |
| 1.8 金属抗癌药物的发展 |
| 1.9 本课题的提出 |
| 第2章 铱复合寡聚精氨酸多肽设计与初步抗癌研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 本课题的提出与实验方案设计 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 仪器与试剂 |
| 2.3.2 多肽序列 |
| 2.3.3 Ir-aRn和Ir-cRn的合成 |
| 2.3.4 Ir-RL1和Ir-RL2的合成与纯化 |
| 2.3.5 Ir-peptides的荧光发射光谱 |
| 2.3.6 异构体的分离及鉴定 |
| 2.3.7 铱复合多肽的光毒性 |
| 2.3.8 浓度-荧光强度标准曲线的建立 |
| 2.3.9 铱复合多肽的配位效率及配位前后疏水性变化 |
| 2.3.10 铱复合多肽的水油分配系数 |
| 2.3.11 铱复合多肽的细胞杀伤活性 |
| 2.3.12 HeLa细胞对铱复合多肽的摄取 |
| 2.3.13 铱复合多肽的溶血能力 |
| 2.3.14 铱复合多肽对HeLa细胞的时间依赖性杀伤活性 |
| 2.3.15 铱复合多肽与HeLa细胞的时间-动力学观察 |
| 2.3.16 铱复合多肽入胞机制 |
| 2.3.17 铱复合多肽的胞内分布 |
| 2.3.18 ROS对铱复合多肽致死细胞的影响 |
| 2.3.19 Caspase对铱复合多肽致死细胞的影响 |
| 2.3.20 铱复合多肽致死机制与坏死性凋亡的关联 |
| 2.3.21 铱复合多肽致死机制与铁死亡的关联 |
| 2.3.22 铱复合多肽致死机制与焦亡的关联 |
| 2.3.23 Calpain对铱复合多肽致死细胞的影响 |
| 2.3.24 树突状细胞的促成熟 |
| 2.3.25 抗肿瘤免疫细胞因子水平的上升 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 理化性质与活性关系 |
| 2.4.2 铱复合多肽的细胞杀伤行为 |
| 2.4.3 铱复合多肽的细胞杀伤机制 |
| 2.4.4 铱复合多肽的抗耐药及免疫激活潜力 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 铱配位寡聚精氨酸多肽白蛋白纳米粒的抗肿瘤研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 本课题的提出与实验方案设计 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 仪器与试剂 |
| 3.3.2 Ir-diimidazole的合成 |
| 3.3.3 Ir-cR8与人血清白蛋白的相互作用 |
| 3.3.4 铱复合多肽与人血清白蛋白的作用部位 |
| 3.3.5 电荷对铱复合多肽与人血清白蛋白结合常数的影响 |
| 3.3.6 铱复合多肽与人血清白蛋白的结合位点 |
| 3.3.7 电荷和比例对纳米粒组装的影响 |
| 3.3.8 构型对纳米粒组装的影响 |
| 3.3.9 Ir-cR8-HSA NPs的表征 |
| 3.3.10 Ir-cR8-HSA NPs的粒径稳定性 |
| 3.3.11 Ir-cR8-HSA NPs的体外释放 |
| 3.3.12 Ir-cR8-HSA NPs的血清稳定性 |
| 3.3.13 Ir-cR8-HSA NPs的溶血毒性 |
| 3.3.14 Ir-cR8-HSA NPs的选择性细胞杀伤毒性 |
| 3.3.15 Ir-cR8-HSA NPs的入胞及胞内分布 |
| 3.3.16 Ir-cR8-HSA NPs的溶酶体逃逸 |
| 3.3.17 Ir-cR8-HSA NPs的致死细胞机制 |
| 3.3.18 Ir-cR8-HSA NPs的药代动力学 |
| 3.3.19 Ir-cR8-HSA NPs的组织分布 |
| 3.3.20 Ir-cR8-HSA NPs对皮下瘤的抑制作用 |
| 3.3.21 皮下瘤的HE染色 |
| 3.3.22 Ir-cR8-HSA NPs对树突状细胞成熟的影响 |
| 3.3.23 Ir-cR8-HSA NPs对瘤内T细胞的影响 |
| 3.3.24 Ir-cR8-HSA NPs对肿瘤免疫抑制微环境的影响 |
| 3.3.25 Ir-cR8-HSA NPs对血清中免疫细胞因子的影响 |
| 3.3.26 Ir-cR8-HSA NPs组小鼠抵抗肿瘤细胞再侵袭 |
| 3.3.27 Ir-cR8-HSA NPs对原位瘤的抑制作用 |
| 3.3.28 Ir-cR8-HSA NPs对肝功能的影响 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 纳米粒的组装机制 |
| 3.4.2 Ir-cR8-HSA NPs的表征 |
| 3.4.3 Ir-cR8-HSA NPs的体外细胞研究 |
| 3.4.4 Ir-cR8-HSA NPs对皮下乳腺癌的抑制 |
| 3.4.5 Ir-cR8-HSA NPs激活机体免疫功能 |
| 3.4.6 Ir-cR8-HSA NPs对原位乳腺癌的抑制及肝毒性 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 多肽的液相和质谱鉴定图 |
| 附录二 缩略语表 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（2）新机械方案制备富集脂肪源细胞外囊泡的成脂水凝胶并构建组织工程脂肪（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 制备AT-EV(使用新机械方案)和DAT并进行表征 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.2.1 实验材料 |
| 1.2.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 CD63-perilipin脂肪组织免疫荧光染色 |
| 1.3.2 ALE和少脂质脂肪组织的获取 |
| 1.3.3 制备DAT水凝胶 |
| 1.3.4 AT-EVs的获取以及纯化 |
| 1.3.5 DAT水凝胶的表征-SEM |
| 1.3.6 AT-EVs的表征 |
| 1.3.7 统计分析 |
| 1.4 结果 |
| 1.4.1 AT-EVs在脂肪组织的分布 |
| 1.4.2 DAT水凝胶的表征 |
| 1.4.3 AT-EVs的表征 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 结论 |
| 参考文献 |
| 第2章 脂肪源细胞外囊泡联合脂肪组织水凝胶制备组织工程脂肪 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 主要试剂与仪器 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 AT-EVs的促血管作用 |
| 2.3.2 AT-EVs的促成脂分化中的作用 |
| 2.3.3 富含AT-EVs的 DAT水凝胶于SCID小鼠皮下构建脂肪组织工程 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 AT-EVs促进3T3-L1 脂肪祖细胞的成脂分化 |
| 2.4.2 AT-EVs促进血管内皮细胞管的形成 |
| 2.4.3 AT-EVs增加了脂肪组织新生物的体积保留 |
| 2.4.4 AT-EVs促进脂肪组织新生物的脂肪生成和血管生成 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 结论 |
| 参考文献 |
| 本研究创新性自我评价 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间研究成果 |
| 综述 脱细胞脂肪组织制备：能否成为异体注射或原位成脂的软组织填充物 |
| 参考文献 |
（3）异种脱细胞动脉基质修复猪肝外胆道缺损及良性狭窄的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 第一部分 猪肝外胆道缺损及良性狭窄的修复机制研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 再细胞化脱细胞动脉基质的制备及修饰 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 组织工程化胆管研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（4）脂肪细胞的分泌功能影响脱细胞血管支架在动物体内钙化进程的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 异种与同种动脉脱细胞血管材料在大鼠体内的免疫反应及钙化表现 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 脂肪干细胞体外分化得到的脂肪细胞分泌功能的鉴定 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 脂肪分泌功能对工程血管抗炎反应的意义 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述:组织工程血管的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（5）环孢素预处理对同种带瓣血管移植的保护作用（论文提纲范文）
| 主要英文缩写 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硏究生阶段发表文章 |
（6）腹腔预处理去细胞光氧化猪主动脉瓣膜制备组织工程瓣膜（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 去细胞结合光氧化对猪主动脉瓣膜组织学和生物力学的影响 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料和方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 结论 |
| 5. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 腹腔预处理构建组织工程瓣膜的实验研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料和方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 |
（7）活性同种瓣的制备保存研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 第二章 实验目的 |
| 第三章 材料与方法 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 主要材料和仪器 |
| 3.1.2 主要试剂配置 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 同种瓣的采集和制备 |
| 3.2.2 灭菌培养液氮保存 |
| 3.2.3 细菌学检查 |
| 3.2.4 组织学检查 |
| 3.2.5 结果的判定 |
| 第四章 结果 |
| 4.1 肉眼所见 |
| 4.2 光镜观察 |
| 4.3 两组对象心脏瓣膜波形蛋白表达的情况 |
| 4.4 电镜观察 |
| 第五章 讨论 |
| 5.1 心脏瓣膜细胞生物学 |
| 5.2 活性同种瓣的低温保存技术 |
| 5.3 活性同种瓣的评价指标 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 致谢 |
（8）阿托伐他汀对深低温保存心脏瓣膜MHC-Ⅱ分子表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 活性同种心脏瓣膜制备与保存过程 |
| 材料与方法 |
| 第二部分 活性同种心脏瓣膜免疫排斥反应的研究 |
| 材料与方法 |
| 统计学方法 |
| 试验结果 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 附表 |
| 综述 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（9）降温顺序对猪主动脉瓣制备保存影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 正文 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 统计学方法 |
| 实验结果 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 附图 |
| 综述 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（10）脱细胞异种心脏瓣膜/可降解聚合材料构建复合组织工程瓣膜的初步试验研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 脱细胞猪主动脉瓣的构建 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 脱细胞猪主动脉瓣/PHBHHx构建复合瓣膜 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 复合瓣膜的生物力学检测 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 复合材料小动物血管内相容性试验 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 复合瓣膜的大动物体内移植试验 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 图片和图表 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
四、同种瓣内皮细胞再孵化的进展（论文参考文献）
- [1]膜活性铱复合寡聚精氨酸多肽的抗肿瘤研究[D]. 计双双. 中国科学技术大学, 2021(09)
- [2]新机械方案制备富集脂肪源细胞外囊泡的成脂水凝胶并构建组织工程脂肪[D]. 聂佳莹. 南昌大学, 2021(01)
- [3]异种脱细胞动脉基质修复猪肝外胆道缺损及良性狭窄的机制研究[D]. 冯世明. 昆明医科大学, 2021(02)
- [4]脂肪细胞的分泌功能影响脱细胞血管支架在动物体内钙化进程的研究[D]. 亦桐. 北京协和医学院, 2018(02)
- [5]环孢素预处理对同种带瓣血管移植的保护作用[D]. 罗程. 广西医科大学, 2012(09)
- [6]腹腔预处理去细胞光氧化猪主动脉瓣膜制备组织工程瓣膜[D]. 王国锋. 中南大学, 2011(12)
- [7]活性同种瓣的制备保存研究[D]. 张茂柏. 山西医科大学, 2009(10)
- [8]阿托伐他汀对深低温保存心脏瓣膜MHC-Ⅱ分子表达的影响[D]. 孙学军. 山西医科大学, 2007(10)
- [9]降温顺序对猪主动脉瓣制备保存影响的实验研究[D]. 张毅勋. 山西医科大学, 2007(10)
- [10]脱细胞异种心脏瓣膜/可降解聚合材料构建复合组织工程瓣膜的初步试验研究[D]. 吴松. 中国协和医科大学, 2007(09)