一、脑损伤后GFAP和NGF的表达研究进展（论文文献综述）
吴子健[1]（2021）在《通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究》文中进行了进一步梳理目的 本次研究结合急性脊髓损伤（acute spinal cord injury,ASCI）的研究现状和热点,基于导师的临床经验,以通过抑制水通道蛋白4（aquaporin 4,AQP4）的表达从而减轻ASCI后脊髓水肿为切入点,旨在探讨通腑逐瘀法治则指导下抵当汤加减治疗ASCI的可能作用机制,以期为推广通腑逐瘀法治疗ASCI提供理论依据。方法 第一部分:10周龄SD大鼠30只,按随机数字表法随机分为假手术组（A组）、自制打击器2cm组（B1组）、自制打击器4cm组（B2组）、NYU组1.25cm组（C1组）、NYU组2.5cm组（C2组）,每组各6只。除Sham组外,其余各组采用改良Allen’s法造模。B1、B2组将9g打击杆分别从2cm、4cm处自由坠落撞击T10脊髓,C1、C2组使用NYU打击器分别从1.25cm、2.5cm处撞击T10脊髓。各组造模完成后分别于1、3、5、7d进行BBB评分和Reuter评分,7d后行灌注取材,石蜡包埋切片,尼氏染色,观察各组组织受损程度和神经元存活率。第二部分:10周龄SD大鼠60只按随机分配方法随机分为假手术组（Sham）、模型组（Model）、抵当汤组（DDD）、TGN-020组（TGN-020）和抵当汤联合TGN-020组（DDD+TGN-020）,每组各12只。Sham组仅打开椎板暴露脊髓但不损伤脊髓;其余各组均采用自制脊髓打击器从40mm高度对脊髓进行打击。Sham组和Model组术后不予任何治疗措施干预,DDD组于术后3d予以抵当汤加减每日灌胃,持续3d,根据大鼠与人用药剂量体表面积换算法,DDD组大鼠每日用药剂量为5.04g/kg,采用蒸馏水进行稀释一定比例配制后予以灌胃处理,每日早晚各1次。TGN-020组处理方法:腹腔注射给药,每日用药剂量为5mg/kg,给药时间为3d。DDD+TGN-020组处理方法:予TGN-020腹腔注射给药,随后给予DDD灌胃处理。干预结束后进行行为学评价（BBB评分、斜板实验及Reuter评分）观察大鼠神经功能恢复情况,取材后进行脊髓组织大体观察和含水率检测、HE染色观察组织受损程度,尼氏染色观察神经元形态,免疫荧光检测各组脊髓组织AQP4、GFAP共表达的阳性细胞个数,Western Blot法检测各组脊髓组织中AQP4、GFAP、CSPG、PCNA、NGF、BDNF、GAP-43蛋白的表达量,q PCR法检测各组脊髓组织中CSPG、PCNA基因的表达量,电镜下观察各组髓鞘和神经元组织形态,高尔基染色观察树突和树突棘形态。第三部分:8周龄SD大鼠40只随机分为空白血清组和含药血清组,含药血清组给予5.04g/kg DDD灌胃,持续3d,空白血清组予等剂量超纯水灌胃,持续3d,干预结束后提取血清备用。每次取胚胎大鼠8-12只,通过机械-酶消化法提取星形胶质细胞（Astrocytes,AS）,细胞采用10%的高糖培养基培养,观察细胞传代至第3代进行后续实验。首先,免疫荧光鉴定细胞中GFAP含量,随后进行实验分组:空白组（Control group,CG）、模型组（Model group,MG）、空白血清组（Blank serum group,BSG）、DDD含药血清组（DDD）、TGN-020干预组（TGN-020）、DDD联合TGN-020组（DDD+TGN-020）,除MG外,其余各组均以划痕法进行造模,造模完成后DDD予以含药血清干预,BSG予以等剂量空白血清干预,TGN-020予以100nm TGN-020干预,DDD+TGN-020先予TGN-020干预后再予DDD干预。MTT法检测DDD含药血清干预AS的安全干预浓度、最佳干预时间和干预浓度,MTT法检测各组对RAS活性的影响,免疫荧光染色法检测RAS中AQP4和GFAP共表达的细胞数,Western Blot法检测各组RAS中AQP4、GFAP和NGF、BDNF、GAP-43蛋白的表达量,镜下观察DDD含药血清对RAS迁移率的影响。统计学方法:实验所得数据均使用SPSS21.0软件进行统计学处理,计量资料以均值±标准误（`X±S）表示,所得数据均经过正态性分布检测,若符合正态分布,则采用单因素方差分析,方差齐则采用LSD法,方差不齐则采用Games-Howell法;若不符合正态分布,则采用非参检验。以P<0.05提示差异具有统计学意义。结果 第一部分:自制脊髓打击器与NYU打击器建立脊髓损伤模型研究1.各组脊髓外观形态比较A组T10节段处硬脊膜完整,脊髓组织呈均匀乳白色,形态饱满圆润;B1、B2、C1、C2组T10节段处硬脊膜均完整,颜色呈不同程度的鲜红色或暗红色,损伤处可见水肿、瘀血及瘢痕组织增生,相对于B1、C1组,B2、C2组水肿更严重、瘀血范围更广、颜色更深、瘢痕组织更多。2.行为学评分比较BBB评分结果显示,A组术后除因手术致运动量减少外,未出现双下肢功能异常的表现,评分为21分;其余各组均出现不同程度的运动功能障碍,具体表现为:B2与B1、C2与C1相比,BBB评分显着降低,差异具统计学意义（P<0.05）;B1与C1、B2与C2相比,BBB评分无显着差异（P>0.05）。Reuter评分结果显示,A组术后未发现感觉功能异常现象;其余各组术后均出现不同程度的感觉功能异常现象,具体表现为B2、C2组术后1d牵张反射消失,肌力、肌张力减弱或消失,疼痛回缩反射迟钝,背部感觉存在或消失;B1、C1组术后1d除肌力消失外,牵张反射、肌张力、疼痛回缩反射、背部感觉均存在,术后3d肌力开始恢复。B2与B1、C2与C1相比,Reuter评分显着降低,差异具统计学意义（P<0.05）。B1与C1、B2与C2相比,Reuter评分无显着差异（P>0.05）。3.尼氏染色尼氏染色结果显示,A组脊髓组织结构完整,灰白质边界清晰,神经元细胞形态规则、胞核大、核仁清晰可见、数量多,胞质内可见斑块样尼氏体。相比A组,其余各组结构破坏更严重,灰白质结构不清,组织空白间隙更大,损伤处可见细胞呈空泡样改变或细胞皱缩、体积减小,神经元数量减少,尼氏体模糊或消失。4.脊髓受损面积比结果表明,A组未见受损区域,比值为0,其余各组均高于A组,差异具有统计意义（P<0.05）;相对于B1和C1,B2和C2损伤面积比值明显升高,差异具有统计意义（P<0.05）;B1与B2、C1与C2损伤面积比值差异不具有统计意义（P>0.05）。5.各组脊髓前、后角神经元损伤程度比较通过分析前、后角神经元阳性细胞数结果显示,A组神经元数目多,尼氏体含量多,其余各组均少于A组,差异具有统计意义（P<0.05）;相对于B1和C1,B2和C2神经元阳性细胞数明显减少,差异具有统计意义（P<0.05）;B1与B2、C1与C2神经元阳性细胞数差异不具有统计意义（P>0.05）。第二部分:抵当汤加减调节AQP4表达对SCI大鼠脊髓水肿的作用研究1.各组脊髓组织的大体观察从大体观察上来看,Sham组脊髓组织颜色鲜白,组织完整,未见瘀血部位和水肿;Model组在打击损伤部位可见明显的瘀血区域,瘀血颜色深红,瘀血范围较大,并可见明显脊髓水肿;DDD组在打击损伤部位可见较小的瘀血区域,瘀血部位颜色淡红,可见轻度水肿;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组大体观察相似,肉眼见无显着差异。2.各组脊髓组织含水率与Sham组相比,其余各组脊髓组织含水率均显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组脊髓组织含水率均显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组组间比较,脊髓组织含水率没有显着差异（P>0.05）。3.行为学观察结果各组大鼠BBB评分、斜板实验结果以及Reuter评分显示,与Sham组相比,其余各组BBB评分和斜板实验得分均显着降低（P<0.05）,Reuter评分均显着升高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组BBB评分均显着升高（P<0.05）,Reuter评分均显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组组间比较无显着差异（P>0.05）。4.HE染色Sham组组织结构完整,神经元等细胞形态结构良好,未见瘢痕组织或空洞形成,未见瘀血区域或炎性物质渗出。Model组损伤部位可见组织结构离乱,大量瘢痕组织和脊髓空洞的形成,可见明显的瘀血区域,并伴有大量的炎性细胞浸润,神经元等细胞皱缩,数量减少。其余三组可见组织形态结构较完整,可见少量脊髓空洞的形成,瘀血区域范围较小,炎性细胞清润较少,神经元等细胞形态结构较完整。使用Image J软件对各组空洞面积进行定量分析,结果显示,与Sham组相比,Model组脊髓空洞面积显着增加（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组脊髓空洞面积显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓空洞面积组间比较不具有显着差异（P>0.05）。5.尼氏染色观察各组神经元形态Sham组脊髓形态结构完整,灰质呈蝴蝶状,灰白质界限清晰,可见较多的神经元分布,神经元胞质内可见染色清晰的斑块状尼氏体,神经元胞体饱满,细胞核大,核仁明显。Model组脊髓组织破坏严重,结构不完整,灰、白质界限不清,可见大量的炎性细胞浸润,神经元皱缩、液化、坏死,形成较多的空泡,尼氏体较小或消失。相对Model组,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组脊髓结构较完整,隐约可见灰白质界限,神经元仍可见,数量较多,空泡样改变减少,尼氏体数量较多、较饱满。但相对于Sham组,神经元仍存在固缩,胞浆减少,核变小,尼氏体减少等病理改变。6.免疫荧光检测各组AQP4、GFAP的阳性细胞表达量AQP4阳性细胞表达呈绿色,GFAP阳性细胞表达呈红色,DAPI染色呈深蓝色,AQP4+/GFAP+细胞表达呈黄色树枝状,各组染色背景干净,表达清晰,细胞核数量无显着差异（P>0.05）,具有可比性。Sham组少见或未见明显的AQP4+/GFAP+细胞,Model组可见较多的AQP4+/GFAP+细胞,且细胞亮度高,胞体肿胀程度严重。与模型组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组细胞数量较少,亮度较低,细胞肿胀程度减轻。对各组的AQP4+/GFAP+细胞进行计数和统计,与Sham组相比,其余各组AQP4与GFAP的阳性细胞占比均显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组AQP4与GFAP的阳性细胞占比显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组间相比较,AQP4与GFAP的阳性细胞占比无显着差异（P>0.05）。7.Western Blot法检测各组AQP4、GFAP、PCNA、CSPG、NGF、BDNF、GAP-43的蛋白表达量各组蛋白条带背景清晰,无杂带现象,蛋白表达量趋势明显,具有可比性。与Sham组相比,各组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG蛋白的灰度值显着增高（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值显着降低（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG蛋白的灰度值显着降低（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值显着增高（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较结果显示,各组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG、NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值差异不具有统计学意义（P>0.05）。8.各组脊髓组织中PCNA和CSPG基因表达量各组基因检测的扩增曲线变化平稳,溶解曲线为平滑的单峰形态,说明引物设计好,模板未见污染,实验结果具有可比性。各组目的基因相对表达量结果显示,与Sham组相比,各组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较结果显示,各组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量差异不具有统计学意义（P>0.05）。9.透射电子显微镜观察髓鞘和神经元组织形态Sham组脊髓组织在透射电镜下可见髓鞘外形规则,厚薄均一,形似同心圆状,结构完整,未见破裂、缺失等改变,板层结构均匀致密,胞内线粒体丰富,胞浆饱满,清晰可见。Model组髓鞘结构不规则,部分髓鞘断裂缺失,厚薄不一,局部可见褶皱卷曲,板层结构松散、融合,线粒体肿胀,甚至部分溶解消失;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组可见髓鞘结构较完整,形态部分不规则但较Model组改善,部分髓鞘可见卷曲、厚薄不一,板层结构较均匀,虽有部分缺失,但松散程度相对Model组较轻,仍可见清晰的线粒体,但数量较Sham组少,胞体较小。10.电镜观察树突和树突棘形态各组脊髓经高尔基染色后结果显示:Sham组脊髓树突结构完整、形态规则、长度较长,树突上密布树突棘,树突棘分布整齐、均匀致密、数量较多;Model组脊髓树突形态不规则,部分断裂缺失,长度较短,较为纤细,树突棘数量少,稀疏分布,排列紊乱;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组脊髓树突形态有所改善、树突较长、结构较完整、周经较粗,树突棘数量较多,排列更为规则、整齐。对各组脊髓树突长度及树突棘进行定量分析,结果显示,与Sham组相比,Model组树突长度明显降低（P<0.05）,树突棘数量明显减少（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组树突长度明显增加（P<0.05）,树突棘数量显着增多（P<0.05）;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组组间相比,差异不具有统计学意义（P>0.05）。第三部分:抵当汤加减含药血清对反应性星形胶质细胞的活化、迁移及神经生长相关细胞因子分泌的作用1.原代AS镜下观察原代细胞培养2d,镜下可见AS细胞呈不规则形状散在分布,部分细胞形似星形,细胞核大、呈椭圆形,细胞胞浆丰富,从胞体向四周发出长而有分支的突起;将原代细胞传代至第三代可见细胞生长状态良好,适宜进行后续实验。2.AS鉴定免疫荧光染色结果显示,GFAP染色呈阳性,阴性对照组未见任何阳性染色,提示GFAP呈特异性表达,所提取的细胞为AS。3.DDD含药血清对AS的安全干预浓度,以及干预RAS的最佳干预时间和最佳干预浓度DDD含药血清干预AS的安全浓度范围为:0-15%,DDD含药血清干预RAS最佳的干预浓度为10%,最佳干预时间为48h。4.DDD含药血清对RAS活性的影响MTT结果显示,与CG组相比,其余各组RAS活性均降低（P<0.05）;与MG相比,BSG组RAS活性无显着差异（P>0.05）,DDD、TGN-020和DDD+TGN-020组RAS活性均显着下降（P<0.05）;DDD、TGN-020和DDD+TGN-020组间比较无显着差异（P>0.05）。5.DDD含药血清对RAS迁移率的影响损伤24h后,各组RAS与对侧细胞完全分离,中间形成一条空白的划痕区域,划痕区未见或少见RAS;48h后部分细胞开始向对侧延伸突触,划痕区域出现部分肥大的RAS,细胞胞浆丰富,胞体呈球形,发亮,细胞加速分裂;72h后划痕区域缩小,部分RAS与对侧RAS突触交织,划痕开始愈合。在整个愈合过程中,24h各组划痕区域面积比无显着差异（P>0.05）;自48h开始,与MG组相比,BSG划痕区域面积比无显着差异,其余各组均明显较大（P<0.05）。DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较无显着差异（P>0.05）。72h后,MG组与BSG组划痕区域面积比无显着差异（P>0.05）。与MG组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组划痕区域面积比明显较大（P<0.05）,组间比较无显着差异（P>0.05）。以上划痕区域面积比的改变反映了RAS在损伤发生后向受损区域的迁移速率。6.各组对RAS中AQP4、GFAP荧光表达量的影响使用免疫荧光染色法对RAS中AQP4、GFAP和细胞核进行了标记。染色结果显示,AQP4+细胞呈绿色,GFAP+细胞呈红色,细胞核呈蓝色,荧光双标的细胞呈黄色的不规则树枝状。其中,CG组仅见12个零星分布的AQP4+/GFAP+细胞;MG组和BSG可见较多的AQP4+/GFAP+细胞,亮度较高,细胞肿胀程度严重;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组可见较少的AQP4+/GFAP+细胞,亮度较低,细胞肿胀程度较轻。对AQP4+/GFAP+细胞进行计数统计,结果表明,与CG相比,其他各组阳性细胞占比显着增多（P<0.05）;与MG相比,除BSG组无显着差异外（P>0.05）,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组阳性细胞占比显着减少（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组阳性细胞占比组间相比无显着差异（P>0.05）。7.各组对RAS中AQP4、GFAP和NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量的影响结果显示,与CG组相比,其余各组AQP4和GFAP蛋白表达量均显着增高（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量均显着降低（P<0.05）;与MG组相比,除BSG组无明显差异外（P>0.05）,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组AQP4和GFAP蛋白表达量均显着降低（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量均显着增高（P<0.05）,3组组间比较无显着差异（P>0.05）。结论 1.自制简易脊髓打击器从20mm、40mm高处垂直撞击脊髓组织具有和NYU打击器从12.5mm、25mm处打击脊髓损伤程度相似的脊髓损伤动物模型,自制简易脊髓打击器安全性高,稳定性好,操作简便,价格低廉,可供科研工作者参考。2.通腑逐瘀法治则指导下抵当汤加减可有效消除SCI大鼠损伤处水肿,促进神经功能康复。其具体的作用机制为:通过抑制AQP4的表达可抑制反应性星形胶质细胞活化,减少胶质瘢痕形成,提高神经营养因子、神经生长因子及细胞膜生长相关蛋白的表达,促进神经功能康复。3.DDD含药血清能通过抑制AQP4的表达,有效减轻RAS水肿,减少RAS活化和减缓RAS迁移,促进RAS中神经营养因子的分泌。
朱业淘[2]（2021）在《联用神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响研究》文中研究指明背景:重型颅脑创伤是目前世界上导致青年人死亡和残疾的主要原因之一,重型颅脑创伤后常导致神经功能废损,而传统治疗方法的效果往往难以令人满意;因此如何改善重型颅脑创伤的预后一直是医疗界的难题。早些年已有相关研究证实在重型颅脑创伤后,损伤脑组织中有部分新生神经细胞生成,但数量极为有限,并不能使受损的神经功能得到充分的改善。神经因子作为一类对神经细胞营养作用且能够调节神经细胞存活的蛋白质,已经被多项研究证实可以在体外促进神经细胞的增殖和抗神经细胞凋亡以改善受损的神经功能,并且在神经缺血性和退行性疾病的邻域已经得到了较为宽泛的研究,在治疗颅脑创伤的研究方面,则少见有研究神经因子对重型颅脑创伤后大鼠神经细胞的影响,而将神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子联用应用观察对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能影响的研究更是罕见。目的:探索联合应用不同的神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响,观察不同实验组大鼠肢体功能恢复差异,探索外源性神经因子治疗重型颅脑创伤的合适策略及机制。方法:将48只SD大鼠随机分为四个组,即神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组、联用神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子组以及对照组。颅脑创伤模型参照改良Feeney法制作,在造模一天后,对照组通过脑室注射途径注射生理盐水,各个实验组分别由脑室途径注入相应的神经因子。采用免疫组化法、免疫荧光法比较各组大鼠脑内损伤皮层、室管膜下区、海马齿状回以及损伤对侧相应区域阳性细胞的表达;采用前肢放置实验和平衡实验观察大鼠的肢体功能情况,比较各组大鼠肢体功能恢复情况的差异。结果:（1）在造模3 d、7d、14d后神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组、联合组相应区域的神经元、神经胶质细胞数量明显多于对照组,差异有显着性意义（P<0.05）,同时神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组神经元、神经胶质细胞明显少于联合组（P<0.05）,而神经生长因子组和碱性成纤维细胞生长因子组对应的各个区域阳性细胞数量没有明显差异;（2）在造模5天后,行为学实验评分对比中,对照组评分均高于神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组以及联合组,差异具有统计学意义（P<0.05）,且联合组评分低于碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:联合应用外源性神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子较单用二者之一更能促进神经细胞的增殖和大鼠肢体功能的恢复。
吴永继[3]（2021）在《杜仲水提物对脂多糖诱导的小鼠神经炎症的保护作用及其机制研究》文中研究表明多项研究表明,神经炎症是参与神经元变性的关键过程,同时也是多种神经退行性疾病的发病因素之一。近年来,研究者以抑制神经炎症为切入点,寻找缓解或治疗上述疾病的抗炎药物。杜仲属于杜仲科杜仲属的单一树种,具有较强的降血压、降血糖、抗氧化、抗炎及神经保护等药理作用。杜仲对中枢神经系统疾病的治疗作用的相关报道也越来越多,且已成为治疗神经退行性疾病的中药配方中不可缺少的组成部分。但杜仲水提物（water extract of Eucommia ulmoides Oliver,WEE）是否具有抑制神经炎症、改善神经炎症引起的认知功能障碍、抑郁样行为及肠道菌群等作用的报道甚少。本研究利用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）建立神经炎症的小鼠模型及细胞模型,通过在体试验与体外试验相结合,探讨WEE对LPS诱导的神经炎症的缓解作用及潜在的分子机制,旨在为杜仲的综合性利用及开发新的抗炎天然药物提供科学依据。主要的试验结果如下:（1）WEE抑制LPS诱导的大脑组织中SOD、GSH-Px活力下降及MDA含量减少的程度,表现出一定的抗氧化性。通过水迷宫试验和爬杆试验发现,WEE能够改善LPS诱导的小鼠认知功能障碍;通过旷场试验及高架十字迷宫试验发现,与LPS组小鼠相比,WEE能够改善LPS诱导的小鼠抑郁样行为;为探究小鼠行为学变化的原因,分析海马中与学习记忆相关蛋白的表达及不同小棘的比例变化。结果发现,与LPS组相比,WEE能够增加海马中Mushroom状小棘的比例,上调突触相关蛋白如:突触泡蛋白（synaptophysin,SYP）,树突棘素（spinophilin,SPN）和突触后致密蛋白（PSD95）的表达水平,改善LPS诱导的小鼠认知功能障碍及抑郁样行为。（2）LPS引起小鼠海马颗粒细胞下层（Subgranular zone,SGZ）Brd U+和DCX+的细胞数量减少,分子层（Mesomolecular layer,ML）中Brd U+细胞数量增多,WEE明显增加了DCX+细胞的数量。与LPS组相比,WEE降低了LPS诱导的新生细胞向胶质细胞分化的程度,增加祖细胞不对称分裂的百分比。以上结果表明,WEE对LPS诱导的小鼠海马中成体神经的发生具有一定的保护作用。通过Sholl及Skeleton/Fractal方法对小胶质细胞的形态进行分析发现,WEE能明显影响LPS诱导的小鼠海马中小胶质细胞的形态变化及复杂性。（3）通过免疫荧光染色分析星形胶质细胞与小胶质细胞在海马不同区域的密度,结果发现,与LPS组相比,WEE明显降低GFAP+细胞在海马CA1,CA3,ML和门区的密度及海马中GFAP蛋白表达。类似地,与LPS组相比,WEE能明显降低Iba1+细胞在CA1,CA3及门区的密度。通过q PCR检测发现,与LPS组相比,WEE显着降低IL-1β、IL-6、IL-1ra、i NOS、Arg-1的m RNA表达水平,同时降低MMP9、MCP-1、m PPARγ的m RNA水平。通过Western blot发现,WEE通过抑制LPS激活的NFκB、p38 MAPK信号通路、凋亡及内质网应激的相关蛋白的表达发挥神经保护作用。（4）通过免疫荧光染色与Western blot分析大脑皮层中小胶质细胞及星形胶质细胞的表达发现,与LPS组比,WEE降低小鼠大脑皮层中GFAP+与Iba1+的细胞密度及相应蛋白表达量。通过q PCR检测发现,与LPS组相比,WEE能够明显抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10及IL-1ra等炎症因子在大脑皮层中的表达。Western blot结果表明,WEE能够抑制LPS激活的NFκB、p38 MAPK通路及凋亡相关蛋白的表达发挥神经保护作用。（5）通过16S rRNA测序分析发现,WEE能通过调节肠道菌群的结构组成保护小鼠肠道免受LPS的损伤。且与LPS组相比,WEE能够抑制小鼠结肠中TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10,IL-1ra及Occludin的表达,增加结肠中紧密相关蛋白的表达,缓解肠道炎症的发生。（6）通过LPS作用于BV2细胞建立细胞炎症模型发现,与LPS组相比,WEE增加BV2细胞的存活率,降低细胞的分化程度及ROS的含量,且能够抑制LPS诱导的炎症相关因子的表达,并表现出一定的浓度依赖性。Western blot结果表明,WEE能够抑制LPS激活的NFκB、p38 MAPK信号通路与凋亡相关蛋白的表达水平缓解细胞炎症。综上所述,WEE能够改善LPS诱导的小鼠认知功能障碍及抑郁样行为;对LPS诱导海马中成体神经发生起到保护作用;抑制小鼠大脑皮层与海马中炎症相关因子与TLR4、NFκB、p38 MAPK介导的信号通路、凋亡及内质网应激相关蛋白的表达发挥神经保护作用。
薛娜英[4]（2020）在《电针对脑缺血大鼠海马GFAP和NGF表达的影响》文中研究表明目的探讨（1）电针对脑缺血大鼠行为学以及脑缺血半暗带区、海马CA1、CA2、CA3、齿状回（dentate gyrus,DG）区胶质细胞原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）和神经生长因子（nerve grow factor,NGF）表达的影响。（2）电针对高血脂合并脑缺血模型大鼠血脂、行为学、脑组织形态学和脑缺血半暗带区、海马CA1、CA2、CA3、DG区GFAP和NGF表达的影响。方法实验一将24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血模型组、电针1组、电针2组。大鼠使用普通饲料喂养7天,第8天采用50%FeCl3诱导建立脑血栓模型。电针1组造模前电针“丰隆”,每天1次,治疗7天,第8天造模后电针“丰隆”、“百会”穴,每天1次,持续7天。电针2组第8天造模后电针“丰隆”、“百会”穴,每天1次,持续7天。造模完成1天后对所有大鼠进行神经功能评分,术后第1、7天采用免疫组织化学法检测缺血侧皮层缺血半暗带和大脑海马CA1、CA2、CA3、DG区GFAP和NGF的表达。实验二将49只雄性SD大鼠随机分为正常组、高血脂合并假手术组、高血脂合并脑缺血模型组、电针1组、电针2组。正常组大鼠使用普通饲料喂养63天。假手术组大鼠使用高脂饲料喂养63天。模型组和电针组大鼠喂养高脂饲料49天,第50天采用50%FeCl3诱导建立高血脂合并脑血栓模型。电针1组造模前电针“丰隆”,每天1次,治疗7天,造模后电针“丰隆”、“百会”穴,每天1次,持续14天。电针2组造模后电针“丰隆”、“百会”穴,每天1次,持续14天。造模完成1天后对所有大鼠进行神经功能评分,术后第1、7、14天检测血清中总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）水平,采用 HE（hematoxylin-eosin,HE）染色法观察神经元细胞形态学变化;采用免疫组织化学法检测缺血侧皮层缺血半暗带和大脑海马CA1、CA2、CA3、DG区GFAP和NGF的表达。结果实验一:（1）神经行为学:模型组大鼠出现向对侧转圈的神经缺损症状,且神经功能评分较高。与模型组相比,电针组的神经缺损症状减轻,神经功能评分降低,其中电针1组的差异有统计学意义（P<0.05）。（2）免疫组化结果:在缺血半暗带中,模型组GFAP的平均光密度在术后1、7天普遍升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比,电针1组GFAP的平均光密度在术后7天具有增高趋势;电针2组GFAP的平均光密度在术后1天增高,差异有统计学意义（P<0.05）。海马CA1中,模型组GFAP的平均光密度在术后1、7天普遍升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组相比,电针1组、2组GFAP的平均光密度在术后1、7天降低,差异有统计学意义（P<0.05）。海马CA2区,模型组GFAP的平均光密度在术后1、7天普遍升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组相比,电针1组GFAP的平均光密度在术后1、7天降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;电针2组GFAP的平均光密度术后1、7天具有降低趋势。海马CA3区,模型组GFAP的平均光密度在术后1、7天普遍升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组相比,电针1组、2组GFAP的平均光密度在术后1、7天降低,差异具有统计学意义（P<0.01）。海马DG区,模型组GFAP的平均光密度在术后1、7天普遍升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组相比,电针1组GFAP的平均光密度在术后1、7天降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;电针2组GFAP的平均光密度在术后7天降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。海马CA1区,模型组NGF的平均光密度在术后1、7天普遍升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组相比,电针1组NGF的平均光密度在术后7天升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;电针2组NGF的平均光密度在术后1、7天升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。实验二:（1）血脂四项:高脂血症大鼠合并脑缺血模型组大鼠术后1、7、14天TC、LDL升高,差异具有统计学意义（P<0.05）,术后7天HDL降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,术后14天TG升高,差异具有统计学意义（P<0.05）,说明高脂血症模型造模成功且模型稳定。与模型组相比,电针1组术后1天TC下降,差异具有统计学意义（P<0.05）,术后7天LDL下降,差异具有统计学意义（P<0.05）,术后14天LDL、TG下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;电针2组术后1天TC下降,差异具有统计学意义（P<0.05）,术后14天TG、LDL下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。说明电针干预可能有降低大鼠血清血脂水平的作用,电针1组的降低程度比电针2组高,说明电针预治疗降血脂的效果更好。（2）神经行为学:模型组大鼠出现对侧上肢无力,向对侧转圈等神经缺损症状,神经功能缺损评分得分较高。与模型组相比,电针1组、2组的神经缺损症状减轻,神经功能评分降低,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）脑组织形态:缺血半暗带,正常组神经元细胞形态完整,整体组织形态正常;模型组神经元胞体缩小,胞核固缩或溶解,细胞周围间隙增大,细胞排列紊乱;电针组神经元形态接近正常,可见部分异常形态神经元细胞,整体组织形态接近正常。海马CA1、CA2、CA3、DG区,正常组神经元细胞排列整齐,层次清晰,形态完整;模型组细胞排列不规则,部分细胞散乱分布;电针组神经元排列相对整齐,形态相对完整。（4）免疫组化结果:在缺血半暗带中,模型组GFAP的平均光密度在术后1、7、14天普遍增高,差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组相比,电针1组GFAP的平均光密度在术后7天增高,术后14天降低,差异有统计学意义（P<0.01）;电针2组GFAP的平均光密度在术后1天、14天降低,差异有统计学意义（P<0.05）。海马CA1区,模型组GFAP的平均光密度在术后1、7天增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比,电针1组、2组GFAP的平均光密度在术后1、7、14天普遍降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。海马CA2区,模型组GFAP的平均光密度在术后1、7、14天普遍增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比,电针1组GFAP的平均光密度在术后7天具有升高趋势,术后14天降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;电针2组GFAP的平均光密度在术后7天具有升高趋势,术后14天降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。海马CA3区,模型组GFAP的平均光密度在术后1、7、14天普遍增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比,电针1组GFAP的平均光密度在术后7天升高,术后14天降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;电针2组GFAP的平均光密度在术后7天具有升高趋势,术后14天有降低趋势。海马DG区,模型组GFAP的平均光密度在术后1、14天升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比,电针1组GFAP的平均光密度在术后7天升高,差异具有统计学意义（P<0.01）,术后14天有降低趋势;电针2组GFAP的平均光密度在术后7天升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。海马CA1区,模型组NGF的平均光密度术后1、7、14天具有升高趋势。与模型组相比,电针1组NGF的平均光密度在术后1、7、14天升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;电针2组NGF的平均光密度在术后1天升高,差异具有统计学意义（P<0.05）,在术后7、14天有升高趋势。结论在脑缺血阶段电针“丰隆”,脑缺血后后电针“丰隆”、“百会”,能够减轻脑缺血大鼠神经缺损功能,降低神经功能评分,促进脑组织及神经元细胞形态的恢复,调节大鼠缺血侧缺血半暗带和海马CA1、CA2、CA3、DG区GFAP与CA1区NGF的表达,调节星形胶质细胞的活化表达,修复受损的神经系统。在高血脂阶段电针“丰隆”,脑缺血后电针“丰隆”、“百会”,能够调节大鼠血清中血脂的代谢,减轻脑缺血大鼠神经缺损功能,促进脑组织及神经元细胞形态的恢复,调节大鼠缺血侧缺血半暗带和海马CA1、CA2、CA3、DG 区 GFAP 与 CA1 区 NGF 的表达。
王艳秋[5]（2020）在《川芎嗪联合神经干细胞移植干预局灶性脑缺血大鼠的作用机制研究》文中指出研究目的:前期实验研究发现,脑缺血后可以一定程度的刺激脑内内源性神经发生,参与缺血后的自发性修复,但是内源性神经发生并不能产生足够数量的成熟神经元和神经胶质细胞,因此对神经干细胞（NSCs）移植的关注与研究逐渐增多。课题组前期研究表明川芎嗪（TMP）对大脑中动脉阻塞（MCAO）模型大鼠神经发生及NSCs向缺血损伤区定向迁移有明显促进作用。SDF-1/CXCR4是经典的促进干细胞迁移的调控通路,Nrf2作为正性调节因子能够促进SDF-1的受体CXCR4的转录来促进骨髓干细胞迁移。本研究通过观察TMP联合移植NSCs对MCAO模型大鼠的干预作用,并基于干细胞生物学行为调控探讨TMP联合移植NSCs对缺血性脑卒中的作用机制。研究方法:使用线栓法建立大鼠MCAO模型,缺血后90min后再灌注。造模成功的大鼠按照神经功能评分随机分层分为模型组（Model）、川芎嗪（TMP）组、神经干细胞（NSCs）移植组、TMP联合NSCs移植组。同时设立伪手术（Sham）组做为对照。TMP及TMP+NSCs移植组术后次日进行腹腔注射给药TMP 40mg/kg,1次/d;NSCs移植组及TMP+NSCs移植组术后3天向缺血侧纹状体移植NSCs 3*107个/只。术后3d及取材前3d连续腹腔注射50 mg/kg BrdU。进行神经功能评分（mNSS）、肌力测验、网格行走、旷场实验及强迫游泳实验来考察TMP对大鼠神经功能和行动能力的改善;免疫荧光法检测 BrdU+、BrdU+/DCX+、BrdU+/NeuN+、BrdU+/GFAP+细胞分布情况观察NSCs的增殖、迁移、分化情况;PKH26+染色检测移植的NSCs的存活及迁移情况。Western blot检测SDF-1、CXCR4的蛋白表达及信号通路Nrf2、KEAP1、HO-1、NQO1的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测CXCR4、SDF-1、VEGF和NGF基因的mRNA水平,研究NSCs发生迁移的作用机制。研究结果:1.TMP联合NSCs移植对MCAO模型大鼠神经修复效果评价:与伪手术组相比,缺血后MCAO模型大鼠体重、肌力、旷场行动能力明显下降,神经行为学评分显着升高,缺血病变对侧前肢错步指数升高,游泳静止时间变长,证明我们成功复制MCAO模型。TMP、NSCs移植、TMP+NSCs移植治疗后的大鼠神经功能行为学评分降低,肌力恢复,行动能力提升,错步指数下降,游泳时间增加,尤其以TMP+NSC移植组的治疗效果最佳。2.TMP联合NSCs移植对MCAO模型大鼠外源性NSCs存活、迁移和分化的影响:通过免疫荧光检测法观察到PKH26阳性的细胞,提示NSCs成功注射到纹状体并存活;而且除移植位点外,在附近也可以观察到PKH26阳性的细胞,提示存活的NSCs发生一定范围的迁移,且TMP+NSCs移植组迁移细胞数量更多、迁移距离更远。同时我们还检测了 PKH26分别与NeuN、GFAP双标的细胞,并没有发现双标阳性的细胞,提示移植到脑内的NSCs在目前检测范围内,未发现分化为神经元和星型胶质细胞。3.TMP联合NSCs移植对内源性NSCs增殖、迁移、分化的影响:缺血后,与伪手术组比较模型组 BrdU+、BrdU+/DCX+、BrdU+/NeuN+、BrdU+/GFAP+细胞数有所升高。与模型组相比,TMP、NSCs移植单独治疗以及两者联合组的BrdU+、BrdU+/DCX+、BrdU+/NeuN+、BrdU+/GFAP+细胞数均明显升高,且以联合治疗组最明显。4.TMP和NSCs移植对Nrf2/HO-1/CXCR4通路的影响:TMP组、NSCs移植组和TMP+NSCs移植组的CXCR4蛋白的表达均显着升高,同时三个治疗组Nrf2、HO-1、NQO1的蛋白表达上调、KEAP1蛋白表达降低。与模型组相比,TMP组、NSCs移植组和TMP+NSCs移植组可以上调SDF-1、CXCR4、VEGF、NGF基因。研究结论:1.TMP、NSCs移植以及TMP联合NSCs移植均可改善MCAO模型大鼠的神经行为学变化,尤以TMP联合NSCs移植作用最佳;2.提高移植到MCAO模型脑内NSCs的存活、迁移和分化,为TMP联合NSCs移植治疗MCAO模型大鼠的作用途径之一;3.促进脑区神经营养因子分泌,改善脑内微环境,并促进内源性NSCs增殖、迁移和分化,为TMP与联合NSCs移植对MCAO模型大鼠发挥神经保护的另一重要途径;4.激活Nrf2/HO-1/CXCR4通路,可能是TMP联合NSCs移植促进内源神经发生以及外源移植性NSCs存活、迁移和分化的部分作用机制。
韩朝[6]（2020）在《丝素蛋白水凝胶结合NSC对缺血缺氧脑损伤的修复及姜黄素的干预作用研究》文中指出背景来自实验动物疾病模型和早期临床试验的有力证据表明,神经干细胞移植是开发临床适用的外源性干细胞疗法的可行途径。基于目前在NSC生物学领域的进展和移植研究的积极成果,当代的观点是移植的NSC作为宿主本地“工厂”能够产生和分泌大量的免疫和神经营养因子,包括那些细胞外膜囊泡中包含因子,NSC移植物作为一种天然的生物制剂来源,能够调节和促进中枢神经系统（CNS）组织在急性或慢性组织损伤后的几个关键功能的恢复。但如何将NSC更为有效的定植于损伤器官组织,更加有效的让其分泌的因子作用于损伤微环境是神经组织工程亟待解决的问题。生物材料、细胞和刺激是神经组织工程的三个主要组成部分。组织工程神经材料已成为神经再生和功能恢复的一种潜在的替代自体神经移植物。各种材料的研究以改善特性和增强功能为出发点,生物可降解、生物相容、导电和免疫惰性的支架最终的目标是准确地模拟我们体内的细胞外基质,并通过各种聚合物、细胞和生长因子诱导出一种生物化学、地形学和电信号的组合,从而高效地进行神经定植及神经网络再生。选择合适的支架材料来促进神经细胞和非神经细胞的分化以及轴突的生长是神经组织工程整体设计策略的关键。在众多支架材料中,水凝胶已被证明是神经源性细胞培养和分化的良好选择。考虑到神经系统对再生的固有抗性,水凝胶已大量用于释放神经营养因子、神经生长抑制剂拮抗剂和其他神经生长促进剂。组内前期研究工作在静电力作用下获得的丝素蛋白水凝胶,电镜结果显示该凝胶具有纳米取向空隙,能够支持神经元的粘附生长。姜黄素广泛应用于各种疾病的防治。近年来,姜黄素作为神经源性和神经保护剂的应用受到越来越多的关注。姜黄素作为炎症条件因子,在神经干细胞的活力维持,神经向分化中的优势也得到了研究者的证实。目的本研究的目的分为三个方面:提取并稳定传代人胚胎来源神经干细胞,鉴定人神经干细胞的增殖能力、特异性标记物表达及分化能力,利用丝素蛋白水溶液来检验丝素蛋白是否影响神经干细胞的活力,增殖及分化能力,为后期利用丝素蛋白制备水凝胶支架结构奠定基础。通过静电场力作用丝素蛋白制备三维取向水凝胶,筛选适合的水凝胶浓度,结合NSC进行粘附培养、检测水凝胶结构对NSC的贴壁性,神经向分化能力的影响,尤其针对神经元轴突发育及伸展取向性进行研究。同步构建大鼠缺血缺氧性脑损伤模型,观察取向水凝胶及对照组无序水凝胶结合NSC移植治疗后的修复效果。探讨姜黄素作为炎症调控,多种信号激活的中药单体对NSC结合丝素水凝胶的神经组织工程组织的干预作用,为神经保护机制的研究和体外药物筛选提供新的思路。方法1.机械法消化提取人胚神经干细胞,无血清法悬浮培养法扩增神经球,CCK8检测NSC增殖能力,流式细胞仪及免疫荧光法检测神经干细胞干性标记物Nestin,Vimentin,Musashi-1,Notch,SOX1,SOX2,SSEA-1,CXCR4表达。经分化培养基培养至14天,经形态学,免疫荧光检测神经元Tub3、少突胶质GFAP、小胶质细胞的特异性标记蛋白O4的表达,明确分化能力。验证提取方法获得的神经干细胞属性。利用丝素蛋白水溶液（SF）加入到神经干细胞的培养基中,观察形态学,利用CCK8及PI染色检测SF对神经干细胞增殖及死亡的影响。免疫荧光染色检测SF对NSC干性的影响。2.静电法制备0.5%、1%、2%丝素蛋白水溶液并筛选合适的水凝胶浓度,将NSC在三维取向丝素蛋白水凝胶中分化培养,并将自然形成的无序丝素蛋白水凝胶作为对照组,Calcein-AM活细胞染色观察细胞形态,检测轴突的伸展方向,分化后经Tub3及GFAP染色并量化计算NSC向神经元及神经胶质细胞的分化比例。利用Fluo-AM试剂染色经流式细胞仪检测钙离子在两种细胞中的变化,共聚焦检测轴突蛋白Bassoon在分化后神经元突触中的表达,RT-PCR检测轴突相关基因GAP-43、NCAM1、PSD-95和Syp在两种细胞中的表达情况,分析有序水凝胶对轴突发育及轴突伸展的影响。3.构建大鼠缺血缺氧模型,选取三组损伤组（HI）、神经干细胞治疗组（NSC）及神经干细胞结合有序丝素蛋白水凝胶组（NSC+Silk）,每组10只。于出生后7天造模,10天治疗,28天行为学实验（圆柱筒、平衡木及水迷宫）,39天处死,固定、切片,进行GFAP免疫组化及Tub3、GFAP及Neu N的免疫荧光染色。获取海马区组织进行神经相关因子检测BDNF,NGF的ELISA检测。4.筛选1mg/ml,5mg/ml,10mg/ml,20mg/ml不同浓度的姜黄素作用于NSC,利用CCK8染色法检测NSC细胞活力。Ed U染色法检测不同浓度Cur对NSC增殖能力的影响。Annexin-V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡发生。检测不同浓度下Cur对NSC分化为神经细胞过程的影响,待分化培养12天,通过软件分析单位面积神经元数量及神经元轴突长度,收集分化培养6、12天的细胞样本检测GAP-43、NCAM1、PSD-95和Syp的mRNA表达,分析姜黄素对神经向分化的作用。结果1.经机械法原代提取的神经干细胞经7-10天可以形成标准的神经球集落,海马区的NSC增殖速度快,大小均匀,形态规则,指数生长期为5-7天,P1,3,5代的NSC增殖能力一致,倍增时间无显着性差异。获取的海马区NSC表达神经干细胞特异性标记物Nestin,Vimentin,Musashi-1,Notch,SOX1,SOX2,SSEA-1,CXCR4。能够在分化培养环境下分化为具有神经元形态细胞,并部分表达Tuj1、GFAP,神经元及神经胶质细胞特异性标记蛋白。2.对照组、两种浓度0.01%及0.1%的SF作用于NSC后倍增时间分别为:65.3h、76.2h及42.2h,检测SF对NSC细胞的死亡率影响,对照组,0.01%及0.1%分别为:31.5%,38.5%,40.6%,均不具有显着性差异。0.01%浓度的SF加入至培养基经免疫荧光染色检测Nestin,Vimentin,Musashi-1,Notch,SOX1,SOX2六个神经干细胞特异性标记物表达均为阳性。3.静电场力作用获得1%浓度的取向丝素蛋白水凝胶最适合于NSC悬浮及分化培养,对比无序水凝胶材料,分化后的神经细胞在有序水凝胶表面获得的轴突伸展方向一致性提高,有序丝素蛋白水凝胶能够提升神经元的分化比例为10.7±3.1个,照比无序材料的7.3±2.5个有显着性提高,神经元轴突长度统计分析无序凝胶为105.7±10.2nm,有序凝胶为400.3±25.3nm,神经元轴突长度进行量化并统计。能够显着提高神经元的轴突长度,并增高轴突内Bassoon蛋白及的表达,GAP-43、NCAM1、PSD-95和Syp基因的表达在分化12天时发生显着升高。4.成功建立大鼠缺血缺氧模型,经NSC及NSC+Silk治疗后,脑缺损区域减小,对比损伤组GFAP表达胶质细胞在皮层区、CA1区、DG区及CA3区表达下降,但NSC组与NSC+Silk组之间没有显着性变化。治疗后神经元细胞比例增高,海马区的GFAP比例下降,海马区Neu N的表达在治疗后升高,均据有统计学差异。平衡木试验结果及圆柱桶试验均发生治疗组有明显的修复效果,水迷宫试验结果显示NSC+Silk组有更好的修复效果。在治疗后1天海马组织内的BDNF及NGF因子含量即发生显着性升高,并在后期维持高表达状态。5.1mg/ml姜黄素作用于神经干细胞,不影响NSC增殖,大于5mg/ml的Cur抑制NSC增殖。1mg/ml Cur作用后,Ed U标记率增大但无统计学差异。2.5mg/ml,5mg/ml Cur作用后阳性率降低,表明NSC的增殖率下降。1mg/ml Cur与Cont组相比较没有显着变化。表明高浓度Cur能显着诱导NSC细胞发生凋亡。0.5mg/ml,1mg/ml,2.5mg/ml浓度不影响神经干细胞的分化形态,但5mg/ml,10mg/ml浓度明显抑制神经干细胞分化后贴壁细胞的伸展。经Cur处理,单位面积的神经元数量显着高于对照组,神经元轴突的长度也在分化12天时显着高于对照组。轴突相关基因GAP-43、NCAM1、PSD-95和Syp的mRNA表达检测的表达在12天时照比对照组有所升高。结论1.本实验部分成功提取了人胚胎来源的海马区原代NSCs,能够稳定进行扩增培养及特异性标记物鉴定,NSC能成功分化为神经元、胶质细胞,符合NSCs的基本属性和生物学特性;2.检测了丝素蛋白水溶液作为支架材料的生物安全性,评价了其对NSCs形态学、增殖能力及干性能力均无影响,体现了其良好的生物相容性。可作为后续的神经组织工程材料进行深入研究。1%浓度的丝素蛋白水凝胶能够支持神经干细胞增殖。静电作用获得的有序丝素蛋白水凝胶能够提高神经干细胞向神经元分化比例。有序丝素蛋白水凝胶在向神经细胞分化中能够增强神经元轴突GAP-43、NCAM1、PSD-95和Syp基因表达,促进神经突触的发育及迁移。有序丝素蛋白水凝胶结合NSC治疗大鼠脑缺血缺氧模型,对运动行为及学习记忆有修复功效。3.高浓度（>2.5mg/ml）姜黄素导致NSC细胞死亡,低浓度（<1mg/ml）促进NSC细胞增殖。1mg/ml姜黄素能够促进人神经干细胞向神经元分化,提高分化效率,提高分化后神经元突触长度及突触相关基因GAP-43、NCAM1、PSD-95和Syp表达。
毛君如[7]（2019）在《化痰开窍电针对高血脂合并脑缺血大鼠SVZ区GFAP和NGF表达影响》文中研究说明目的:探讨（1）“化痰开窍”电针法对高血脂合并脑缺血模型大鼠血脂、行为学、脑组织形态学和缺血侧室管膜下区（SVZ区）、脑缺血半暗带区胶质细胞原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）和神经生长因子（Nerve Growth Factor,NGF）表达的影响。（2）电针对单纯脑缺血大鼠行为学、脑梗死体积以及缺血侧SVZ区GFAP和NGF蛋白表达的影响。方法:实验一:将90只雄性SD大鼠随机分为正常组、高血脂合并假手术组、高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血电针1组和2组。除正常组,其余各组大鼠均采用高脂饲料喂养42天,电针1组采用“丰隆”穴两侧电针,每天1次,连续7天。第50天,模型组和电针组用50%FeCl3诱导建立高血脂症合并大脑中动脉血栓闭塞模型,术后电针组采用电针“丰隆”和“百会”穴,每日1次,连续14天。采用生物化学法测定血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）水平,采用神经功能评分评估行为学改变,HE染色观察形态学改变,免疫组化法检测SVZ区、缺血半暗带区GFAP和NGF蛋白的表达。实验二:将72只雄性SD大鼠随机分为脑缺血模型组,假手术组,电针1组和电针2组。普通饲料喂养,电针1组电针两侧“丰隆”穴,每天1次,连续7天,第8天,用50%FeCl3诱导建立大脑中动脉血栓闭塞模型,电针1、2组电针“百会”、“丰隆”穴,每日1次,连续7天。采用神经功能评分法评估行为学改变,氯化三苯四氮唑（TTC）染色用于检测大鼠脑梗塞体积。免疫组化法检测大鼠脑缺血后第1,7天SVZ区的GFAP和NGF蛋白的表达。结果:实验一:（1）神经行为学:模型组大鼠神经功能评分较高,出现缺血侧前肢屈曲,后肢无力,向健侧转圈等神经缺损症状。电针1组神经缺损症状明显轻于模型组,有统计学意义（P<0.05）。与电针2组比较,电针1组大鼠神经功能缺损症状缓解较为明显。（2）血脂四项:模型组大鼠高血脂合并脑缺血术后TC、LDL升高,差异具有统计学意义（P<0.01）,HDL降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,证明高血脂症造模成功。与模型组相比,术后7天,电针组TG降低具有统计学意义（P<0.05）,说明电针可能有降血脂的作用,电针1组的减少比电针2组更明显,表明预治疗降血脂的效果更好。（3）脑组织形态:假手术组脑神经元形态几乎正常,整体组织结构正常。模型组可见皱缩神经元,整体组织形态结构显脑缺血症。电针治疗后,缺血区周围水肿减轻,细胞核逐渐恢复,整体组织形态结构逐渐恢复正常。（4）免疫组化结果显示:在大鼠侧脑室背外侧伸展,术后1天,与假手术比较,模型组GFAP面密度显着增加（P<0.05）。与模型组比较,电针组GFAP面密度持续增加至术后14天。术后7天,电针1组GFAP面密度和模型组比较,具有统计学意义（P<0.05）,电针1组面密度高于电针2组。在大鼠侧脑室外侧壁上段,术后1天,与假手术组比较,模型组GFAP面密度明显增加（P<0.01）。术后7天,与模型组比较,电针1组GFAP面密度具有统计学意义（P<0.05）。术后14天,与模型组比较,电针1组GFAP面密度具有统计学意义（P<0.01）;电针2组具有统计学意义（P<0.05）;与电针1组比较,电针2组GFAP面密度具有统计学意义（P<0.01）,电针1组面密度高于电针2组。在大鼠缺血半暗带区,术后1天,与假手术组比较,模型组GFAP面密度明显增加（P<0.01）。与模型组比较,电针1组具有统计学意义（P<0.05）。术后14天,与模型组比较,电针组具有统计学意义（P<0.01）;与电针1组比较,电针2组具有统计学意义（P<0.01）。在大鼠侧脑室背外侧伸展,术后1天,与假手术组比较,模型组大鼠NGF面密度的表达明显增加。术后7天,与模型组比较,电针组NGF面密度表达升高,具有统计学意义（P<0.01）,电针1组NGF面密度表达高于电针2组,具有统计学意义（P<0.05）,并且持续升高至术后14天。在大鼠侧脑室外侧壁上段,术后1天,与假手术组比较,模型组大鼠NGF面密度的表达升高,差异有统计学意义（P<0.05）。术后7天,与模型组相比,电针组的NGF面密度明显升高。术后14天,与模型组比较,电针组NGF面密度持续升高,电针1组NGF面密度高于电针2组。在大鼠缺血半暗带区,术后1天,与假手术组比较,模型组升高具有统计学意义（P<0.05）。术后14天,与模型组比较,电针1组具有统计学意义（p<0.01）。实验二:（1）神经行为学:与模型组神经功能评分比较,电针组具有统计学意义（P<0.05）,提示缺血导致脑功能严重丧失,电针组大鼠患肢功能恢复,提示电针对脑缺血恢复有一定作用。（2）脑梗死体积:与模型组比较,电针组脑梗死体积减小,电针1组有统计学意义（P<0.05）,电针1组脑梗死体积小于电针2组。（3）免疫组化结果显示:在大鼠侧脑室背外侧伸展和侧脑室外侧壁上段,假手术组GFAP标记的面密度略有表达,模型组的表达明显高于假手术组（P<0.05）,电针组表达显着高于模型组,并持续至缺血后7天。假手术组NGF表达含量极少,缺血后第1天增加,术后7天最明显的改善在电针1组,假手术和电针2组也不同程度的增加,脑缺血组显示最少。结论:“化痰开窍”电针法采用在高脂血症阶段电针“丰隆”穴,脑缺血后电针“丰隆”、“百会”穴能够调节血脂代谢,促进脑缺血大鼠肢体功能康复、减少脑梗死体积,改善脑组织病理形态学变化,上调缺血侧大鼠SVZ区、缺血半暗带区GFAP和NGF蛋白,促进星形胶质细胞活化和神经生长因子的表达,恢复受损神经系统,为临床针灸治疗中风提供了理论依据。
吴秋丽[8]（2019）在《低强度脉冲超声介导iPS-NSCs修复脊髓损伤的研究》文中研究指明【目的】脊髓损伤（Spinal Cord Injury,SCI）是一种严重的创伤性疾病,修复手段主要有手术治疗、药物治疗、细胞移植等。神经干细胞移植能够有效促进SCI后神经功能的恢复,是当前研究的热点。iPSCs诱导的神经干细胞（induced Pluripotent Stem Cells-Neural Stem Cells,iPS-NSCs）是一种具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞,自体取材避免了伦理学争议和免疫排斥,应用于细胞移植治疗脊髓损伤具有显着的优势。然而干细胞在体内存活率低、向神经方向分化较难,因此如何更好的促进其增殖、定向分化是众多研究者关注的焦点。国内外研究表明低强度脉冲超声（Low Intensity Pulsed Ultrasound,LIPUS）是一种可以促进多种细胞增殖、分化的物理刺激手段,本研究旨在明确LIPUS对iPS-NSCs细胞特性的影响以及LIPUS介导的iPS-NSCs对脊髓损伤的修复作用,为干细胞的优化和SCI的治疗提供一种新的策略。本研究通过:1)体外培养iPS-NSCs,将自主研制的LIPUS激励系统作用于iPS-NSCs细胞,观察细胞的形态学、增殖、分化和神经营养因子（Neurotrophic Factors,NTFs）分泌含量的改变,明确LIPUS最佳的刺激参数,并初步探索LIPUS干预后细胞增殖的调控机制;2)建立脊髓损伤的动物模型,于脊髓损伤局部移植iPS-NSCs和LIPUS-iPS-NSCs细胞,评价细胞移植后SCI大鼠损伤局部组织学形态、神经营养因子含量以及运动功能的改变,初步探讨LIPUS介导iPS-NSCs细胞移植修复脊髓损伤的效果。【方法】本实验研究分为体外实验和体内实验两部分:体外实验:利用自主搭建LIPUS细胞激励系统,以不同的刺激参数干预iPS-NSCs细胞,观察细胞的形态,采用CCK-8检测其增殖活性的改变,明确LIPUS最佳的刺激参数;借助最佳的激励参数,通过TUNEL、ELISA、Western Blot以及免疫组化等方法,观察LIPUS对iPS-NSCs细胞凋亡、分化以及NTFs分泌的影响,并初步探讨细胞增殖与Notch信号通路的潜在关系。体内实验:采用Impactor model-Ⅲ打击器建立Wistar大鼠脊髓损伤动物模型,分为假手术组、单纯损伤组、iPS-NSCs移植组和LIPUS-iPS-NSCs移植组,在大鼠脊髓损伤后7天进行细胞移植。术前1天、术后1天至8周,采用BBB评分评估大鼠后肢运动功能恢复情况;术后8周大鼠进行灌注取材切片,采用HE染色观察损伤局部空洞的面积,免疫荧光染色观察神经再生和胶质瘢痕形成的情况,ELISA检测局部脊髓组织中营养因子的含量。数据由统计学软件SPSS20.0进行分析,结果以均数±标准差（Mean±SD）形式表示,p<0.05表示具有统计学意义。【结果】1.本实验成功搭建了LIPUS细胞激励系统,LIPUS体外刺激iPS-NSCs细胞可以提高其增殖活性,且最佳的刺激参数为1MHz、8V（69.3 mW/cm2）;2.在最佳刺激参数下,LIPUS可以提高iPS-NSCs细胞活性,而对细胞凋亡没有产生明显的影响,因此1MHz、8V（69.3 mW/cm2）的LIPUS是一种安全、无创的物理刺激因子,同时能够促进iPS-NSCs细胞向神经元方向分化,促进上清液中BDNF、NGF的表达;3.在最佳刺激参数下,LIPUS干预可以促进iPS-NSCs细胞中受体Notch1和靶基因HES1蛋白水平的表达;4.在脊髓损伤体内实验中,细胞移植后,尤其是LIPUS-iPS-NSCs移植组,脊髓组织的空洞减小,轴突增生活跃,反应性星形胶质细胞减少,脊髓组织局部BDNF、NGF表达水平提高;5.功能学评分结果显示LIPUS-iPS-NSCs移植组大鼠的后肢运动功能恢复明显优于其他损伤组,差异具有统计学意义。【结论】1.本研究中自主搭建的LIPUS激励系统可以明显提高体外培养的iPS-NSCs细胞的增殖活性,增加细胞中神经营养因子的表达,促进其向神经元方向分化,其中Notch信号通路可能是调控LIPUS促进iPS-NSCs细胞活性的潜在机制;2.移植LIPUS优化的iPS-NSCs种子细胞,可以明显的改善脊髓损伤大鼠的后肢运动功能,减少局部胶质瘢痕的形成,促进轴突的再生和NTFs表达。本研究证明LIPUS是一种安全、无创的体外激励方法,可以提高iPS-NSCs细胞在脊髓损伤修复中的作用,为优化细胞移植的种子细胞提供了新策略,为脊髓损伤修复提供新思路。
刘敬霞,任非非,刘会贤,刘洋,李娟,虎喜成,刘抒雯[9]（2016）在《回医扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤大鼠骨髓间充质干细胞移植向神经样细胞分化的影响》文中研究指明目的:观察扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤（CIRI）大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植向神经样细胞分化的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs并于移植前48h用Brdu标记;大鼠灌胃给药(1.46g·100g-1·d-1),BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑（2×106/200μL）;移植后1、3、7、14d取材,免疫荧光双标检测Brdu、Brdu/NSE、Brdu/GFAP表达,Western blot检测NGF、GDNF蛋白表达。结果:模型各组NSE、GFAP、GDNF表达较假手术组增高（P<0.01）,与本组1d比较,3、14d NGF表达升高（P<0.01）;与模型组同期比较,扎方组3、7d NSE表达减低（P<0.01）,14d增高（P<0.01）,扎方组1、7、14d GFAP和GDNF表达增高（P<0.01）,各组NGF表达增高（P<0.01）,移植各组NSE、NGF、GDNF表达增高（P<0.01,P<0.05）,3、7、14d组GFAP表达增高（P<0.01）,联合各组以上指标均增高（P<0.01）,移植及联合各组见Brdu、Brdu/NSE、Brdu/GFAP表达;与移植组比较,扎方组3、7、14d NSE和GFAP表达减低（P<0.01）,扎方组1、3d NGF减低（P<0.01）,各组GDNF减低（P<0.01）,联合各组NSE和GFAP表达增高（P<0.01）,Brdu、Brdu/NSE、Brdu/GFAP增多,各组NGF和GDNF表达增高,以1、14d组明显（P<0.01,P<0.05）;扎方与联合组比较,联合各组以上指标均增高（P<0.01）;同组间比较,各组NSE、GFAP和NGF均随时间增高,GFAP 7d达高峰,NGF 3d达高峰（P<0.01）,模型和联合各组GDNF呈先增后减趋势,3d达高峰（P<0.01）,扎方和移植各组呈递减趋势（P<0.01）。结论:扎里奴思方可显着促进CIRI后BMSCs脑内移植并向神经样细胞分化,促进损伤后神经再生修复,其机制可能与干预脑内NGF和GDNF的动态表达有关。
陈超[10]（2011）在《首乌益智胶囊对血管性认知障碍大鼠Notch信号通路相关基因及星形胶质细胞的作用研究》文中研究指明目的:血管性认知障碍（VCI）近年来发病率和死亡率逐渐攀升,已成为全社会重要的公共卫生问题。神经元与星形胶质细胞之间的相互作用,是缺血性脑损伤后神经元能否存活的关键因素。本研究以Notch信号通路和星形胶质细胞为切入点,通过首乌益智胶囊治疗前后细胞变化及基因表达水平的改变,探讨其作用机制。为首乌益智胶囊治疗VCI从细胞水平和基因调控方面提供实验数据和理论依据。方法:将SD大鼠通过线栓法制备大脑中动脉局灶脑缺血/再灌注VCI模型,经Morris水迷宫实验筛选出80只大鼠,随机分为假手术组、模型组、脑复康组、首乌益智胶囊组,每组20只。造模后药物干预4周。Morris水迷宫实验检测各组大鼠行为学改变;尼氏染色观察海马CA1区神经细胞形态学改变;透射电镜观察海马CA1区神经元超微结构病理学变化;免疫组织化学法检测海马CA1区GFAP、NGF的表达;实时荧光定量PCR检测Notch信号通路相关基因Notch1、PS1、Hes3、STAT3、GFAP、β-APP的表达。结果:水迷宫结果表明,首乌益智胶囊组大鼠的定位航行和空间探索实验测试成绩明显优于模型组和脑复康组（P<0.01）。与模型组和脑复康组比较,首乌益智胶囊组海马锥体细胞排列较整齐、密集,胞浆中Nissl体较丰富;电镜观察细胞器结构基本正常。首乌益智胶囊组海马CA1区GFAP、NGF的表达较模型组和脑复康组显着升高（P<0.01）。与模型组比较,首乌益智胶囊组大鼠脑组织Notch1、Hes3、Stat3基因的表达,显着升高（P<0.01）;与脑复康组比较,亦有明显升高（P<0.05）。首乌益智胶囊组GFAP基因的表达较模型组和脑复康组显着升高（P<0.01）。首乌益智胶囊组PS1基因的表达较模型组显着降低（P<0.01）,较脑复康组亦有明显降低（P<0.05）。首乌益智胶囊组β-APP基因的表达较模型组明显降低（P <0.05）;较脑复康组降低,无统计学意义（P >0.05）。结论:1.首乌益智胶囊能保护神经元,减轻脑缺血对神经元的损伤,维持神经细胞结构与功能的完整。2.首乌益智胶囊能提高Notch信号通路Notch1、Stat3、Hes3、GFAP基因的表达,促进神经干细胞向星形胶质细胞分化、增殖;促进神经生长因子（NGF）的合成与分泌,对受损神经元产生保护、营养、修复和再生作用。3.首乌益智胶囊能降低PS1、β-APP基因的表达,使Aβ生成减少,减轻Aβ神经毒性,改善学习记忆能力。4.首乌益智胶囊能显着提高VCI大鼠的学习和记忆能力,是治疗VCI的有效方药,整体疗效优于脑复康。
二、脑损伤后GFAP和NGF的表达研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、脑损伤后GFAP和NGF的表达研究进展（论文提纲范文）
（1）通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 自制脊髓打击器与NYU打击器建立脊髓损伤模型研究 |
| 1.目的 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 6.不足和展望 |
| 第二部分 抵当汤加减调节AQP4 表达对SCI大鼠脊髓水肿的作用研究 |
| 1.目的 |
| 2.材料 |
| 3.方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.讨论 |
| 6.小结 |
| 7.不足与展望 |
| 第三部分 抵当汤加减含药血清对反应性星形胶质细胞的活化、迁移及神经生长相关细胞因子分泌的作用 |
| 1.目的 |
| 2.材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.讨论 |
| 6.小结 |
| 7.不足和展望 |
| 本研究的创新点 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 附件1 自制简易打击器与NYU打击器 |
| 附件2 脊髓打击损伤模型 |
| 附录3 BBB评分 |
| 附录4 Reuter评分 |
| 附录5 综述 水通道蛋白在急性脊髓损伤中的作用机制 |
| References |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（2）联用神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 神经因子对重型颅颅脑创伤后神经保护的研究进展 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（3）杜仲水提物对脂多糖诱导的小鼠神经炎症的保护作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 神经炎症 |
| 1.2 神经炎症与神经退行性疾病 |
| 1.2.1 神经炎症与阿尔茨海默症 |
| 1.2.2 神经炎症与帕金森氏症 |
| 1.2.3 神经炎症与多发性硬化症 |
| 1.2.4 神经炎症与肌萎缩侧索硬化症 |
| 1.3 脂多糖 |
| 1.4 脂多糖诱导的实验动物模型 |
| 1.5 炎症参与的信号通路 |
| 1.5.1 NFκB介导的炎症信号通路 |
| 1.5.2 MAPK介导的炎症信号通路 |
| 1.5.3 PI3K/AKT/m TOR介导的炎症信号通路 |
| 1.5.4 ROS介导的炎症信号通路 |
| 1.5.5 NO介导的炎症信号通路 |
| 1.5.6 COX介导的炎症信号通路 |
| 1.6 杜仲的研究进展 |
| 1.6.1 杜仲概述 |
| 1.6.2 杜仲的主要化学成分 |
| 1.6.3 杜仲的主要药理作用 |
| 1.7 研究意义与内容 |
| 1.7.1 研究意义 |
| 1.7.2 研究内容 |
| 1.7.3 技术路线 |
| 第二章 杜仲水提物对LPS诱导的小鼠认知功能障碍及抑郁样行为的抑制作用 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 杜仲水提物的制备 |
| 2.1.5 分析条件 |
| 2.1.6 模型建立及分组 |
| 2.1.7 行为学检测 |
| 2.1.8 组织取材与固定 |
| 2.1.9 石蜡切片制作 |
| 2.1.10 尼氏染色 |
| 2.1.11 高尔基染色 |
| 2.1.12 免疫荧光染色 |
| 2.1.13 蛋白提取 |
| 2.1.14 脑组织中氧化指标的检测 |
| 2.1.15 蛋白免疫印迹 |
| 2.1.16 数据统计与分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 杜仲水提物成分的测定 |
| 2.2.2 杜仲水提物对LPS诱导的小鼠生存率与体重的影响 |
| 2.2.3 杜仲水提物对LPS诱导的小鼠各组织重量的影响 |
| 2.2.4 杜仲水提物对LPS诱导的小鼠脑组织氧化损伤的保护作用 |
| 2.2.5 杜仲水提物对LPS所致神经元损伤的保护作用 |
| 2.2.6 杜仲水提物对LPS诱导小鼠的认知功能障碍的保护作用 |
| 2.2.7 杜仲水提物改善LPS诱导的小鼠抑郁样行为 |
| 2.2.8 杜仲水提物对LPS诱导的小鼠海马中不同形态小棘比例的影响 |
| 2.2.9 杜仲水提物对LPS诱导小鼠海马中学习记忆相关蛋白的影响 |
| 2.2.10 杜仲水提物增加LPS诱导的小鼠海马TH、TPH2 蛋白水平 |
| 2.2.11 杜仲水提物对LPS诱导小鼠的海马中间神经元数量的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 杜仲水提物对LPS诱导的小鼠海马成体神经发生的保护作用 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 试验动物及分组 |
| 3.1.4 Brd U标记 |
| 3.1.5 取材与切片 |
| 3.1.6 免疫荧光染色 |
| 3.1.7 RNA提取 |
| 3.1.8 反转录 |
| 3.1.9 q PCR |
| 3.1.10 蛋白免疫印迹 |
| 3.1.11 小胶质细胞形态分析 |
| 3.1.12 数据统计与分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 杜仲水提物抑制LPS诱导的小鼠海马新生神经元数量减少 |
| 3.2.2 杜仲水提物抑制LPS诱导的海马中神经营养因子的水平下降 |
| 3.2.3 杜仲水提物抑制LPS诱导的海马齿状回新生GCs的数量的减少 |
| 3.2.4 杜仲水提物对LPS诱导的神经祖细胞向星形胶质细胞分化及分裂方式的影响 |
| 3.2.5 杜仲水提物抑制LPS诱导的神经祖细胞向小胶质细胞分化 |
| 3.2.6 杜仲水提物对LPS诱导的小胶质细胞形态的影响 |
| 3.2.7 杜仲水提物对LPS诱导的小胶质细胞形态分型的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 杜仲水提物对LPS诱导的小鼠神经炎症的保护作用与分子机制研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 主要试剂及仪器 |
| 4.1.2 动物分组与给药 |
| 4.1.3 取材与切片 |
| 4.1.4 免疫荧光染色 |
| 4.1.5 蛋白免疫印迹 |
| 4.1.6 q PCR |
| 4.1.7 数据统计与分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 杜仲水提物抑制LPS诱导小鼠的海马中c-Fos~+细胞的表达 |
| 4.2.2 杜仲水提物对LPS诱导小鼠海马星形胶质细胞的数量的影响 |
| 4.2.3 杜仲水提物对LPS诱导小鼠海马小胶质细胞数量的影响 |
| 4.2.4 杜仲水提物抑制LPS诱导小鼠海马炎症因子的表达 |
| 4.2.5 杜仲水提物对LPS诱导的TLR4 信号通路的影响 |
| 4.2.6 杜仲水提物对小鼠皮层NFκB和 MAPK介导的信号通路的影响 |
| 4.2.7 杜仲水提物对小鼠海马NFκB与 MAPK介导的信号通路的影响 |
| 4.2.8 杜仲水提物抑制LPS诱导小鼠海马内质网应激 |
| 4.2.9 杜仲水提物抑制LPS诱导的小鼠海马的细胞凋亡 |
| 4.2.10 杜仲水提物抑制LPS诱导小鼠大脑皮层中胶质细胞的增殖 |
| 4.2.11 杜仲水提物抑制LPS诱导小鼠大脑皮层炎症因子的表达水平 |
| 4.2.12 杜仲水提物抑制LPS诱导的小鼠大脑皮层的细胞凋亡 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 杜仲水提物对LPS诱导神经炎症模型小鼠的肠道菌群结构的调节作用 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 主要试剂 |
| 5.1.2 主要仪器 |
| 5.1.3 动物分组与给药 |
| 5.1.4 粪便样品采集 |
| 5.1.5 免疫荧光染色 |
| 5.1.6 蛋白免疫印迹 |
| 5.1.7 q PCR |
| 5.1.8 CTAB法提取肠道微生物DNA |
| 5.1.9 细菌16S r RNA基因片段扩增 |
| 5.1.10 PCR产物的定量与纯化 |
| 5.1.11 文库构建与测序 |
| 5.1.12 生物信息学分析 |
| 5.1.13 数据统计与分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 杜仲水提物对小鼠结肠细胞增殖的影响 |
| 5.2.2 杜仲水提物增加小鼠结肠中紧密连接蛋白的表达 |
| 5.2.3 杜仲水提物抑制LPS诱导的小鼠结肠中细胞因子的表达水平 |
| 5.2.4 杜仲水提物对肠道菌群结构的α多样性的影响 |
| 5.2.5 杜仲水提物对小鼠肠道菌群的组间物种组成的影响 |
| 5.2.6 杜仲水提物对小鼠肠道菌群菌门组成的影响 |
| 5.2.7 杜仲水提物对小鼠肠道菌群组间的多样性的影响 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 杜仲水提物对LPS诱导炎症的体外作用研究 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 主要试剂 |
| 6.1.2 主要仪器 |
| 6.1.3 BV2 细胞的培养 |
| 6.1.4 细胞分组与给药 |
| 6.1.5 MTT法测定细胞增殖抑制率 |
| 6.1.6 流式细胞术检测BV2 细胞凋亡率 |
| 6.1.7 ROS含量测定 |
| 6.1.8 细胞蛋白样品的制备 |
| 6.1.9 数据统计与分析 |
| 6.2 结果与分析 |
| 6.2.1 杜仲水提物对LPS诱导BV2 细胞存活率的影响 |
| 6.2.2 杜仲水提物抑制LPS诱导的BV2 细胞形态的变化 |
| 6.2.3 杜仲水提物抑制LPS诱导的BV2 细胞内ROS的生成 |
| 6.2.4 杜仲水提物抑制LPS诱导的BV2 细胞的凋亡 |
| 6.2.5 杜仲水提物对BV2 细胞中炎症因子的表达作用的影响 |
| 6.2.6 杜仲水提物抑制LPS激活的NFκB/MAPK炎症通路 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 结论、创新点与展望 |
| 7.1 主要结论 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 研究展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（4）电针对脑缺血大鼠海马GFAP和NGF表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 综述一 星形胶质细胞与神经生长因子的研究进展 |
| 1 脑缺血中的胶质环境和神经生长因子 |
| 2 高血脂中的胶质细胞与神经生长因子 |
| 3 针刺对星形胶质细胞和神经生长因子的调节 |
| 参考文献 |
| 综述二 缺血性中风的研究进展 |
| 1 缺血性中风的现代研究进展 |
| 2 高血脂合并脑缺血的针灸治疗研究 |
| 3 传统医学关于中风病的认识 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验一 电针对脑缺血大鼠海马GFAP和NGF表达的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 造模方法 |
| 2.3 电针操作方法 |
| 2.4 取材方法 |
| 2.5 指标检测 |
| 2.6 统计方法 |
| 2.7 技术路线图 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 行为学结果 |
| 3.2 免疫组化结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 电针对高血脂合并脑缺血大鼠海马GFAP与NGF表达的探讨 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 造模方法 |
| 2.3 针刺方法 |
| 2.4 取材方法 |
| 2.5 指标检测 |
| 2.6 统计方法 |
| 2.7 技术路线图 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 血脂结果 |
| 3.2 行为学结果 |
| 3.3 HE结果 |
| 3.4 免疫组化结果 |
| 4 讨论 |
| 综合讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要科研成果 |
（5）川芎嗪联合神经干细胞移植干预局灶性脑缺血大鼠的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词 |
| 第一部分 文献综述 川芎嗪对缺血性脑卒中神经保护作用的研究进展 |
| 1 抑制炎性反应 |
| 2 抑制细胞凋亡 |
| 2.1 Caspase-3途径 |
| 2.2 Bcl-2家族 |
| 3 维持血脑屏障完整性 |
| 4 抑制神经细胞兴奋性中毒 |
| 5 清除自由基降低氧化应激反应 |
| 6 促进神经结构恢复 |
| 6.1 增加VEGF表达 |
| 6.2 增加NGF表达 |
| 6.3 增加bFGF表达 |
| 6.4 增加BDNF表达 |
| 7 促进神经干细胞发挥作用 |
| 7.1 内源性神经干细胞 |
| 7.2 外源性神经干细胞 |
| 8 总结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 一 材料和方法 |
| 1 实验材料与试剂 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 MCAO大鼠模型制备 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 神经干细胞移植 |
| 2.4 分组及给药 |
| 3 体重及行为学检测 |
| 3.1 体重检测 |
| 3.2 行为学检测 |
| 4 实验动物取材及处理 |
| 4.1 新鲜组织取材 |
| 4.2 心脏灌流固定取材 |
| 4.3 动物组织切片及染色 |
| 4.4 Western blot法检测 |
| 4.5 实时荧光定量PCR法检测 |
| 5 图像分析 |
| 6 统计方法 |
| 二 结果与分析 |
| 1 对体重和神经功能影响 |
| 1.1 对体重的影响 |
| 1.2 对神经行为学的影响 |
| 2 对神经干细胞的影响 |
| 2.1 移植的NSCs在MCAO模型大鼠脑组织中的变化 |
| 2.2 对MCAO模型大鼠NSCs增殖的影响 |
| 2.3 对MCAO模型大鼠NSCs迁移的影响 |
| 2.4 对MCAO模型大鼠NSCs分化的影响 |
| 3 促进NSCs迁移的机制研究 |
| 3.1 Western Blot法检测Nrf2/HO-1/CXCR4通路的调控因子 |
| 3.2 实时荧光定量PCR法检测迁移调控因子及神经营养因子 |
| 三 讨论 |
| 1 TMP联合NSCs移植对MCAO模型大鼠的药效作用 |
| 2 外源性NSCs在MCAO模型大鼠中的作用 |
| 3 内源性NSCs在MCAO模型大鼠神经发生作用 |
| 4 NSCs迁移的机制探索 |
| 结语 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）丝素蛋白水凝胶结合NSC对缺血缺氧脑损伤的修复及姜黄素的干预作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 人神经干细胞原代提取及丝素蛋白作为神经组织工程材料安全性分析 |
| (一)前言 |
| (二)材料和方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 培养基配置 |
| 2.方法 |
| 2.1 人神经干细胞(hNSC)的原代培养、传代、冷冻、复苏 |
| 2.2 NSC分化实验 |
| 2.3 细胞增殖实验 |
| 2.4 神经干细胞免疫荧光鉴定 |
| 2.5 流式细胞仪检测NSC死亡率 |
| 2.6 统计学分析 |
| (三)结果 |
| 1.不同脑区神经干细胞原代提取形态学 |
| 2.海马区神经干细胞形态学 |
| 3.神经干细胞增殖能力 |
| 4.神经干细胞特异性标记物表达 |
| 5.分化后神经细胞形态及标记物表达 |
| 6.丝素蛋白水溶液对神经干细胞形态及生长活力的影响 |
| 7.丝素蛋白水溶液对NSC死亡率的影响 |
| 8.丝素蛋白水溶液对NSC干性的影响 |
| (四)讨论 |
| (五)结论 |
| (六)参考文献 |
| 第二部分 丝素蛋白水凝胶通过影响NSC的轴突发育治疗大鼠缺血缺氧性脑损伤 |
| (一)前言 |
| (二)材料和方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 实验动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 丝素蛋白水凝胶制备及细胞结合培养 |
| 2.2 分化后神经细胞轴突长度及相关基因检测 |
| 2.3 NSC结合水凝胶对缺血缺氧模型的治疗 |
| (三)结果 |
| 1.不同浓度丝蛋白凝胶材料对神经干细胞悬浮生长状态的影响 |
| 2.分化NSC在丝素蛋白水凝胶上的形态学 |
| 3.分化NSC在丝素蛋白水凝胶上的神经元与神经胶质比例 |
| 4.丝素蛋白水凝胶培养后神经元轴突长度 |
| 5.丝素蛋白水凝胶培养后Bassoon蛋白表达 |
| 6.有序丝素蛋白水凝胶对NSC突触可塑性的影响 |
| 7.SD大鼠缺血缺氧模型构建及NSC治疗 |
| 8.NSC+Silk治疗对Tub-3及GFAP表达的影响 |
| 9.NSC+Silk治疗对Neu N蛋白表达的影响 |
| 10.鼠缺血缺氧模型经治疗后运动受损情况 |
| 11.鼠缺血缺氧模型治疗后学习记忆功能改善 |
| 12.海马组织内神经相关因子表达 |
| (四)讨论 |
| (五)结论 |
| (六)参考文献 |
| 第三部分 姜黄素对神经组织工程组织的作用及机制研究 |
| (一)前言 |
| (二)材料和方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 姜黄素的配制 |
| 2.2 EdU标记率测定 |
| 2.3 细胞凋亡实验 |
| 2.4 轴突数据处理 |
| 2.5 统计学分析 |
| (三)结果 |
| 1.不同浓度Cur对 NSC细胞毒性检测 |
| 2.不同浓度Cur对 NSC增殖能力的影响 |
| 3.不同浓度Cur对 NSC凋亡的影响 |
| 4.不同浓度Cur对 NSC分化形态的影响 |
| 5.姜黄素影响分化神经元轴突长度 |
| 6.姜黄素对分化后神经元轴突相关基因表达 |
| (四)讨论 |
| (五)结论 |
| (六)参考文献 |
| 综述 神经组织工程(NTE)研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（7）化痰开窍电针对高血脂合并脑缺血大鼠SVZ区GFAP和NGF表达影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 综述一 星形胶质细胞与缺血性脑损伤的研究进展 |
| 1 星形胶质细胞在局灶性脑缺血过程中的作用 |
| 2 星形胶质细胞和神经再生的关系 |
| 3 目前针刺对中风后星形胶质细胞的影响 |
| 参考文献 |
| 综述二 神经生长因子与缺血性脑损伤的研究进展 |
| 1 NGF分布及生理功能 |
| 2 NGF在局灶性脑缺血过程中的作用 |
| 3 针灸康复对缺血性脑损伤NGF相关研究 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验一 电针对高血脂合并脑缺血大鼠GFAP和NGF影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 电针对脑缺血大鼠GFAP和NGF的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 综合讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在校期间主要研究成果 |
（8）低强度脉冲超声介导iPS-NSCs修复脊髓损伤的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、LIPUS激励iPS-NSCs最佳物理参数的研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验器械 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 低强度脉冲超声系统的搭建 |
| 1.1.4 iPS-NSCs传代培养及细胞鉴定 |
| 1.1.5 低强度脉冲超声激励细胞模型的建立 |
| 1.1.6 CCK-8 检测iPS-NSCs增殖活性 |
| 1.1.7 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 成功搭建低强度脉冲超声激励系统 |
| 1.2.2 iPS-NSCs细胞的形态学观察及细胞鉴定 |
| 1.2.3 LIPUS对 iPS-NSCs增殖活性的影响以及最佳激励条件的确定 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 LIPUS在生物组织中的理学效应及其在骨科学中的应用 |
| 1.3.2 神经干细胞在神经系统中的起源、特点和作用 |
| 1.3.3 诱导神经干细胞的来源及诱导体系 |
| 1.3.4 LIPUS对细胞增殖的作用 |
| 1.4 小结 |
| 二、在最佳生物学参数下,LIPUS优化iPS-NSCs细胞特性的研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验器械 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 低强度脉冲超声系统的搭建 |
| 2.1.4 iPS-NSCs传代培养及细胞鉴定 |
| 2.1.5 低强度脉冲超声激励细胞模型的建立 |
| 2.1.6 TUNEL检测iPS-NSCs细胞凋亡的情况 |
| 2.1.7 ELISA检测iPS-NSCs细胞上清液中神经营养因子的含量 |
| 2.1.8 Western Blot检测Notch信号通路及细胞分化情况 |
| 2.1.9 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 LIPUS激励iPS-NSCs后细胞凋亡率的变化 |
| 2.2.2 LIPUS激励iPS-NSCs后细胞中NTFs含量的变化 |
| 2.2.3 LIPUS激励iPS-NSCs后细胞分化的情况 |
| 2.2.4 LIPUS激励iPS-NSCs后 Notch信号通路相关蛋白含量的变化 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 LIPUS对 iPS-NSCs细胞生物特性的影响 |
| 2.3.2 LIPUS激励iPS-NSCs可能的作用机制 |
| 2.3.3 LIPUS修复神经损伤的潜力 |
| 2.4 小结 |
| 三、LIPUS介导iPS-NSCs细胞移植修复脊髓损伤的研究 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验器械 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 脊髓损伤动物模型建立 |
| 3.1.4 细胞移植 |
| 3.1.5 BBB运动功能评分 |
| 3.1.6 脊髓标本取出及制作切片 |
| 3.1.7 石蜡切片的制备 |
| 3.1.8 HE染色 |
| 3.1.9 免疫荧光观察移植细胞在体内分化情况 |
| 3.1.10 ELISA检测测定脊髓组织内的营养因子的表达情况 |
| 3.1.11 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 HE染色结果 |
| 3.2.2 GFAP、NF200 免疫荧光染色结果 |
| 3.2.3 脊髓组织内的营养因子的表达情况 |
| 3.2.4 BBB评分结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 脊髓损伤动物模型的制备及运动功能评价指标的选择 |
| 3.3.2 NSCs在脊髓损伤修复中的作用及应用 |
| 3.3.3 多潜能干细胞在神经损伤等再生医学方面的应用 |
| 3.3.4 LIPUS介导的iPSc-NSCs修复脊髓损伤可能的作用机制 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 低强度脉冲超声在神经修复中的应用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）回医扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤大鼠骨髓间充质干细胞移植向神经样细胞分化的影响（论文提纲范文）
| 材料 |
| 1. 动物 |
| 2.试剂和药物 |
| 3.仪器 |
| 方法 |
| 1. 局造性脑缺血再灌注大鼠模型制备 |
| 2. BMSCs的培养、扩增和移植 |
| 2.1 悬液收集 |
| 2.2 培养、扩增 |
| 2.3 Brdu标记及重悬、计数 |
| 2.4 移植 |
| 3. 分组与用药 |
| 3.1 分组 |
| 3.2 用药 |
| 4. 取材 |
| 5. 指标检测 |
| 5.1 免疫荧光双标检测GFAP和NSE表达 |
| 5.2 Western blot检测NGF和GDNF蛋白表达 |
| 6. 统计学方法 |
| 结果 |
| 1.各组大鼠脑组织NSE表达 |
| 2.各组大鼠脑组织GFAP表达 |
| 3.脑组织NGF Western blot检测 |
| 4.脑组织GDNF Western blot检测 |
| 讨论 |
（10）首乌益智胶囊对血管性认知障碍大鼠Notch信号通路相关基因及星形胶质细胞的作用研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 实验研究 |
| 一、实验材料 |
| （一） 实验动物 |
| （二） 实验药物 |
| （三） 实验试剂 |
| （四） 实验仪器与器械材料 |
| 二、实验方法 |
| （一） 血管性认知障碍动物模型造模方法 |
| （二） 动物分组与给药方法 |
| （三） Morris 水迷宫测试 |
| （四） 脑组织取材 |
| （五） 形态学、免疫组织化学及实时荧光定量PCR 检测方法 |
| （六） 统计学处理 |
| 三、实验结果 |
| （一） 大鼠行为学测定结果 |
| （二） 大鼠海马CA1 区组织形态学观察结果 |
| （三） 免疫组织化学结果 |
| （四） 脑组织海马区基因检测结果 |
| 讨论 |
| 一、中医学对血管性认知障碍的认识 |
| （一） 中医学对本病的病名认识 |
| （二） 中医学对本病的病位、病因病机认识 |
| 二、血管性认知障碍肾虚血瘀证的病机与治法探析 |
| （一） 病位在脑，与五脏相关 |
| （二） 肾精亏虚、瘀阻脑窍是血管性认知障碍的基本病机 |
| （三） 补肾填精，化瘀通窍是血管性认知障碍的基本治法 |
| 三、Notch 信号通路与血管性认知障碍相关基因 |
| （一） Notch 信号通路的结构 |
| （二） Notch 信号通路的激活途径 |
| （三） Notch 信号通路的功能 |
| （四） Notch 信号通路与血管性认知障碍的关系 |
| （五） 本研究中Notch 信号通路与血管性认知障碍相关基因理论探讨 |
| 四、Notch 信号通路与星形胶质细胞的关系 |
| （一） Notch1 介导的神经干细胞向星形胶质细胞分化的调控 |
| （二） Notch 信号通路激活Stat3 促进神经干细胞向星形胶质细胞分化的调控 |
| 五、血管性认知障碍模型的选择 |
| （一） 实验动物 |
| （二） 几种VCI 模型造模方法比较 |
| （三） 大脑中动脉栓塞(MCAO)再灌注模型的优缺点 |
| 六、首乌益智胶囊组方配伍与现代药理研究 |
| （一） 药物组成及功效 |
| （二） 方义分析 |
| （三） 现代药理研究 |
| 七、首乌益智胶囊作用机理探讨 |
| （一） 首乌益智胶囊对VCI 模型大鼠学习记忆能力有明显的改善作用 |
| （二） 首乌益智胶囊对VCI 大鼠海马CA1 区神经元有明显的保护、修复和再生作用 |
| （三） 首乌益智胶囊可明显促进VCI 大鼠海马CA1 区星形胶质细胞的分化和增殖 |
| （四） 首乌益智胶囊可明显促进VCI 大鼠海马CA1 区神经生长因子的生成 |
| （五） 首乌益智胶囊能调控VCI 大鼠Notch 信号通路相关基因的表达 |
| 八、结论 |
| 九、本研究的创新点 |
| 十、本研究的不足及研究展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述 1 血管性认知障碍的关联基因研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述 2 星形胶质细胞对神经元作用探讨 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 详细摘要 |
四、脑损伤后GFAP和NGF的表达研究进展（论文参考文献）
- [1]通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究[D]. 吴子健. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [2]联用神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响研究[D]. 朱业淘. 西南医科大学, 2021(01)
- [3]杜仲水提物对脂多糖诱导的小鼠神经炎症的保护作用及其机制研究[D]. 吴永继. 西北农林科技大学, 2021(01)
- [4]电针对脑缺血大鼠海马GFAP和NGF表达的影响[D]. 薛娜英. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]川芎嗪联合神经干细胞移植干预局灶性脑缺血大鼠的作用机制研究[D]. 王艳秋. 北京中医药大学, 2020(04)
- [6]丝素蛋白水凝胶结合NSC对缺血缺氧脑损伤的修复及姜黄素的干预作用研究[D]. 韩朝. 大连医科大学, 2020(03)
- [7]化痰开窍电针对高血脂合并脑缺血大鼠SVZ区GFAP和NGF表达影响[D]. 毛君如. 北京中医药大学, 2019(07)
- [8]低强度脉冲超声介导iPS-NSCs修复脊髓损伤的研究[D]. 吴秋丽. 天津医科大学, 2019(02)
- [9]回医扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤大鼠骨髓间充质干细胞移植向神经样细胞分化的影响[J]. 刘敬霞,任非非,刘会贤,刘洋,李娟,虎喜成,刘抒雯. 中华中医药杂志, 2016(07)
- [10]首乌益智胶囊对血管性认知障碍大鼠Notch信号通路相关基因及星形胶质细胞的作用研究[D]. 陈超. 山东中医药大学, 2011(12)