一、田黄方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及细胞增殖与凋亡的影响（论文文献综述）
孙倩,李姗姗,杨少宁,于小勇[1]（2021）在《中医药调控Notch信号通路防治肾脏疾病研究进展》文中研究指明肾脏疾病是临床常见病、多发病,是指各种原因导致的肾脏结构和功能的破坏,可分为原发性、继发性及遗传性肾脏疾病。临床上,肾脏结构和功能的损害通常是一个慢性进展性过程,其导致的慢性肾脏病已成为全世界危害人类健康的重大公共卫生问题。Notch信号通路可影响细胞的增殖、分化、迁移、生长和凋亡等过程,决定细胞的命运,Notch的异常表达或基因突变会引起组织损伤导致各种肾脏疾病的发生和发展。中医药作为防治肾脏疾病的重要手段,具有多种成分作用于多个靶点和多条信号通路的特点,常被用作慢性肾脏病治疗的常规或潜在的补充疗法和丰富的新药发现来源。近年来,因西医治疗对肾脏疾病的局限性,越来越多的学者开始在中医药防治肾脏疾病领域中以Notch信号通路为切入点,进行对各种单味中药或其提取物、中成药及中药复方调控Notch信号通路的临床和实验性研究,并观测到中医药通过抑制Notch信号通路而发挥肾脏保护作用。文章通过收集中医药防治各种肾脏疾病的相关文献,重点对通过调控Notch信号通路发挥防治糖尿病肾病,免疫球蛋白A（IgA）肾病,肾纤维化,膜性肾病,局灶节段性肾小球硬化,肾细胞癌等慢性肾脏病作用的研究文献进行梳理,分析并总结目前研究现状,以期为临床防治各种肾脏疾病提供参考意见,同时为中医药的普遍运用增加事实依据。
杨旭,韩聪,李伟[2]（2021）在《补益活血清泄方药防治肾纤维化机制研究进展》文中研究表明肾纤维化中医认为多因肾脏疾病失治、误治迁延不愈导致五脏虚损,并以脾肾两脏亏虚为主,临床表现为倦怠乏力、食少纳呆、腰酸膝软等,这与CKD肾纤维化患者低白蛋白血症、消化道功能障碍、贫血等相符。脾肾亏虚致水毒浊邪壅遏三焦,气化失司,日久水湿内停、瘀血阻滞、浊毒内蕴,临床可见腰痛、
苑伯菲,宋立群,代丽娟,于珊珊,贠捷[3]（2021）在《虫草益肾方对肾纤维化大鼠Hippo信号通路表达的影响》文中指出目的研究虫草益肾方对单侧输尿管梗阻（UUO）模型大鼠的治疗效果,并探讨其分子机制。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、咪达普利组及虫草益肾方组,每组10只。其中,模型组、咪达普利组和虫草益肾方组采用UUO法制备肾间质纤维化（RIF）模型。每日分别灌服生理盐水、咪达普利水溶液及虫草益肾方水煎液,持续灌胃14 d后采集梗阻侧肾脏组织,检测血清中肌酐、尿素氮含量。取梗阻侧肾脏组织,Masson染色后观察肾脏组织纤维化程度,并用Western blotting法检测各组大鼠p-YAP、YAP、p-Mst1、Mst1、pLats1、Lats1及α-SMA、E-cadherin蛋白在梗阻侧肾脏组织中的表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠血清肌酐、尿素氮水平上升,肾组织的肾间质纤维化程度明显升高,p-MST1、p-LATS1、p-YAP蛋白表达下调,MST1、LATS1、YAP蛋白表达基本不变,α-SMA蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调。与模型组比较,咪达普利组与虫草益肾方组血肌酐、尿素氮水平降低,肾组织纤维化面积减少,p-MST1、p-LATS1、p-YAP蛋白表达上调,MST1、LATS1、YAP蛋白表达基本不变,α-SMA蛋白表达下调,E-cadherin蛋白表达上调。结论虫草益肾方能保护UUO大鼠肾功能,其机制可能与调控Hippo信号通路中核心蛋白YAP、Mst1、Lats1蛋白磷酸化表达程度,从而抑制UUO大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化,延缓RIF相关。
秦浩[4]（2021）在《基于NF-κB/HIF-1α通路探讨“黄芪-丹参”药对干预UUO肾间质纤维化模型的机制研究》文中指出目的:1.基于数据挖掘方法对王耀光教授治疗慢性肾脏病的临床资料进行回顾性研究,总结王教授治疗本病的处方用药特点、组方规律,以发展名中医的临床经验及学术思想,进一步丰富慢性肾脏病的中医治疗方法。2.观察“黄芪-丹参”药对对大鼠肾功能及病理的影响。3.观察“黄芪-丹参”药对干预单侧输尿管梗阻（Unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠模型肾间质纤维化的机制。方法:研究一:收集王耀光教授2018年1月-2019年6月治疗的符合2-4期慢性肾脏病研究标准的325例次医案资料,随后纳入中医传承辅助平台系统（V3.0）,使用统计报表系统和数据分析系统对病案的药物频次、四气五味、归经、功效信息进行统计分析,利用关联规则分析和聚类分析挖掘王教授治疗慢性肾脏病的常用药物、常用药物组合等。研究二:健康SD大鼠60只,随机将大鼠分为假手术组、实验模型组、中药低剂量组（2.7g/kg/d）、中药中剂量组（5.4g/kg/d）、中药高剂量组（10.8g/kg/d）、氯沙坦钾组（9mg/kg/d）。使用单侧输尿管梗阻技术建立肾间质纤维化模型,从术后第一天开始给药灌胃。各组大鼠于术后14天处死,收集大鼠24h尿液及血清,取梗阻侧肾脏,将部分肾脏于4%多聚甲醛及2.5%戊二醛液中固定,其余部分放入液氮保存。观察大鼠体重、肾重/体重系数;检测大鼠肾功能指标（Scr,BUN）;HE染色、Masson染色观察大鼠肾组织病理变化。研究三:取研究二中的六组大鼠肾脏标本,Western Blot检测肾组织上皮-间充质转分化指标（α-SMA、E-cad）,炎症指标（P65、p-P65）,缺氧诱导因子HIF-1α,细胞外基质（ColⅠ、FN）的蛋白表达情况;Real-time PCR检测大鼠肾组织（ColⅢ、P65、HIF-1α）的mRNA表达情况。结果:1.数据挖掘结果根据临床收集的325例处方数据分析结果可知,王耀光教授治疗慢性肾脏病常用药物功效以清热活血补益类为主;药物频次前十位分别是丹参、黄芪、泽兰、土茯苓、白术、牡蛎、槐花、枳壳、地肤子、白扁豆;药物以寒、温性为主;五味以甘苦辛为主;归经主要以肝脾经为主;在关联规则组方规律中,出现了10个药物组合,频次前三位主要是“丹参-黄芪”、“丹参-泽兰”、“丹参-茯苓”;根据最高频次组合“黄芪-丹参”所用药量分析可知,黄芪常用量为30g,丹参常用量为10g;在聚类分析组方规律中,得到4组新处方。2.大鼠一般情况大鼠在饲养及实验过程中生存状况良好,随着时间推移,各组大鼠体重出现增长,但各手术组与假手术组相比,体重均明显下降,经过药物治疗后,中药中剂量组和阳性药氯沙坦组体重显着增加（P<0.01）;14天大鼠在术后均出现了患侧肾重/体重系数的异常增加,模型组与假手术组相比明显增高。经过药物治疗后发现中药中剂量组、中药高剂量组、阳性药氯沙坦钾组的肾重/体重系数下降最显着（P<0.001）。3.大鼠肾功能及病理改变模型组与假手术组相比,血清肌酐明显增高（P<0.001）;使用药物治疗后,除中药低剂量组外,另外三个药物治疗组与模型组相比显着下降（P<0.001）;14天大鼠模型组与假手术组相比出现了血清尿素氮增高（P<0.01）,中药中、高浓度剂量和氯沙坦钾三个治疗组的尿素氮下降明显（P<0.01）。HE染色显示假手术组肾组织中肾小球肾小管等结构清晰,模型组出现肾小球数量减少、结构变形,球囊腔各处宽窄不一,肾小管的改变是管腔明显扩张、出现空泡变性,小管细胞水肿,间质内充斥大量炎症细胞,并且伴有纤维化改变;中药各剂量组和氯沙坦钾组与模型组相比,肾小球、肾小管、间质部分的病理情况都有所改善。Masson染色显示:模型组的胶原容积与假手术组相比明显升高（P<0.001）,14天大鼠各个药物治疗组与模型组相比明显减少（P<0.001）。4.“黄芪-丹参”调节NF-κB/HIF-1a信号通路及EMTWB结果表明,模型组大鼠的FN、ColⅠ蛋白水平表达明显升高（P<0.001）;对于FN蛋白,中药中剂量组、高剂量组与模型组比较表达明显降低（P<0.001）,阳性药组显着下降（P<0.01）;对于ColⅠ蛋白,三个不同中药剂量组和氯沙坦钾组与模型组相比表达显着降低（P<0.001）。与假手术组相比,模型组α-SMA蛋白明显升高（P<0.001）、E-cad蛋白表达明显减少（P<0.001）;与模型组相比,各药物治疗组α-SMA蛋白表达水平显着降低（P<0.01）,其中黄芪丹参中剂量干预效果最明显（P<0.001）;中药中剂量和氯沙坦钾治疗组E-cad蛋白表达显着升高（P<0.001）。与假手术组相比,模型组的P65蛋白、p-P65蛋白和HIF-1α蛋白均明显升高（P<0.01）;与模型组相比,中药中剂量组、高剂量组、氯沙坦钾组P65蛋白显着降低（P<0.01）;各药物治疗组p-P65蛋白表达水平显着降低（P<0.01）;各药物治疗组的HIF-1α蛋白下降明显（P<0.001）。PCR结果显示模型组肾组织的ColⅢ、P65、HIF-1αmRNA水平明显升高（P<0.05）;各治疗组ColⅢmRNA表达均有所下降（P<0.05）;对于P65 mRNA表达改善情况来看,中药高剂量组和氯沙坦组减少最为明显（P<0.001）;在抑制HIF-1αmRNA表达方面各治疗组均有较好治疗效果（P<0.001）,其中中药中剂量组抑制效果最明显。结论:1.结合数据挖掘中药物频次、聚类分析、关联规则等分析结果可知,王耀光教授治疗慢性肾脏病常用药物功效为活血化瘀类、补虚类、清热类为主,多以补气活血治法作为慢性肾脏病的基本治法;“黄芪-丹参”、“丹参-泽兰”、“丹参-土茯苓”、“黄芪-泽兰”等药物组合是王教授的常用药对。2.“黄芪-丹参”药对可以改善UUO大鼠的一般情况,降低血清肌酐、尿素氮的水平,对大鼠的肾功能具有保护作用。3.“黄芪-丹参”药对可以通过调控NF-κB/HIF1α信号通路,降低P65、p-P65、HIF-1α的表达,抑制肾小管上皮细胞向间充质转分化、减少细胞外基质及胶原纤维的沉淀,从而延缓肾间质纤维化的进程。
王巧花[5]（2021）在《基于Wnt/β-catenin信号通路研究桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠的作用机制》文中认为目的:通过研究桃核承气汤对5/6肾切除所致慢性肾功能衰竭（Chronic renal failure,CRF）模型大鼠的贫血指标、肾功能、病理形态以及Wnt/β-catenin信号通路中的APC、β-catenin及TCF4的影响,探讨该方减轻肾纤维化,延缓CRF的作用机理,为临床上运用桃核承气汤治疗CRF提供客观实验依据,指导临床用药。方法:（1）分组与模型制备:将125只7周龄雄性Wistar大鼠予普通饲料、超纯水喂养一周,使其适应性实验环境,先以随机的方式抽取50只大鼠分为空白组和假手术组各25只,其中空白组不行手术干预,假手术组仅行手术剥离双肾被膜;余下的75只大鼠依据文献方法行5/6肾切除术制备慢性肾衰竭模型,即先切除左侧2/3肾脏,一周后再切除右侧肾脏;术后3天予注射青霉素预防感染,确认造模成功后再随机分成模型组、尿毒清组以及桃核承气汤组各25只大鼠。（2）药物灌胃干预:在大鼠造模成功后第四周始,每天上午8时定时给药灌胃:除尿毒清组与桃核承气汤组大鼠分别予尿毒清颗粒溶液和桃核承气汤药液灌胃外,余下3组大鼠则予生理盐水灌胃;大鼠给药剂量为临床成人每公斤体重用药量的6倍计算,灌胃用量根据大鼠每周体重变化进行调整,每天灌胃前先观察并记录大鼠的一般情况,灌胃时间为56天。（3）标本检测:在第57天麻醉大鼠,取血液及残余肾组织标本后处死,血液标本用于检测大鼠RBC、HB、Scr、BUN;肾组织标本分别用实时荧光定量PCR法和Western Blot法检测左肾组织APC、β-catenin及TCF4的m RNA及蛋白含量表达情况;各组随机留取3只大鼠,在未取血的情况下,于肾脏皮质部分取1mm×1mm×1mm的组织若干块,迅速投入预冷的固定液中进行固定,用于透射电子显微镜观察肾组织病理形态。结果:（1）空白组和假手术组大鼠的血常规、肾功能、m RNA和蛋白表达含量及病理形态正常且无明显差别（P>0.05）。（2）桃核承气汤组大鼠的RBC、Hb水平相对模型组显着升高（P<0.05）。（3）桃核承气汤组大鼠的Scr、BUN水平相对模型组显着降低（P<0.05）,且亦低于尿毒清组（P<0.05）。（4）桃核承气汤组大鼠相对于模型组和尿毒清组大鼠,APC的m RNA及蛋白表达含量显着升高（P<0.05）,而β-catenin、TCF4表达含量则显着降低（P<0.05）。（5）电镜观察显示:空白组及假手术组大鼠肾小球与肾小管细胞超微结构形态正常。模型组大鼠肾组织在电镜下无法清晰辨认肾小球及肾小管超微结构;毛细血管内可见大量炎细胞浸润,系膜细胞增生明显,足突融合,足细胞变性;肾小管坏死,上皮细胞水肿明显,核膜多处破损;线粒体模糊、空泡样改变;刷状缘脱失。尿毒清组和桃核承气汤组大鼠病变程度明显轻于模型组大鼠,且桃核承气汤组大鼠肾小球及肾小管组织完整性优于尿毒清组大鼠。结论:（1）桃核承气汤对CRF模型大鼠的贫血状态、肾功能及肾脏病理损伤有明显的改善作用。（2）桃核承气汤可减轻CRF模型大鼠的肾纤维化程度,延缓CRF进程,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路传导,上调APC的表达,下调β-catenin、TCF4的表达有关。
边红萍[6]（2021）在《基于“肾主水”理论探讨金匮肾气丸治疗慢性肾功能衰竭的实验研究》文中认为研究目的本研究工作以2.5%腺嘌呤混悬液灌胃与单侧输尿管结扎两种方法复制CRF大鼠模型,以金匮肾气丸“补益肾气”为治法,研究肺、肾、膀胱上APQ1-4的表达,探讨机体水液代谢的调控与机理,评价中医“肾主水”理论的科学性,为金匮肾气丸在中医慢性肾脏病的治疗与干预水液代谢调控提供实验依据。研究方法1金匮肾气丸治疗腺嘌呤慢性肾功能衰竭大鼠实验研究将60只健康雄性SD大鼠,随机分正常组（n=20只）和腺嘌呤造模组（n=40只）,适应性喂养1周后,用2.5%的腺嘌呤悬浊液剂量为250mg/（kg·d）灌胃复制CRF模型4周,两组中各取10只大鼠进行血、尿肾组织病理检测,评估腺嘌呤CRF大鼠模型。剩余40只大鼠分为正常组、CRF模型组、金匮肾气丸中剂量、金匮肾气丸高剂量4组,每组10只。金匮肾气丸中、高剂量组分别给予对应浓度剂量金匮肾气丸溶液灌胃,正常组、CRF模型组大鼠予以等量蒸馏水灌胃,治疗4周,比较各组大鼠24h-UTP,血常规、血生化与肾脏病理指标。2金匮肾气丸治疗UUO慢性肾功能衰竭大鼠实验研究50只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（n=10只）和UUO造模组（n=40只）。采用UUO手术法复制CRF模型,将大鼠10%水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉,在左肾下极临近肾门处及输尿管的上1/3处用0#丝线结扎并剪断,缝合肌肉皮肤组织。假手术组大鼠给予等量10%水合氯醛腹腔麻醉开腹,仅钝性分离左侧输尿管并不予以结扎;正常组不做任何手术处理。UUO术后2周随机抽取10只大鼠评估UUO法CRF大鼠模型。剩余40只大鼠再分为假手术组、UUO模型组、金匮肾气丸中剂量组、金匮肾气丸高剂量组,每组10只。假手术组、UUO模型组采用蒸馏水灌胃;金匮肾气丸中、高剂量治疗组分别给予对应浓度剂量的金匮肾气溶液灌胃,疗程4周,比较各组大鼠的24h-UTP,血常规与生化、肾脏病理指标。（正常组同实验第一部分）3.慢性肾功能衰竭大鼠水通道蛋白表达的实验研究金匮肾气丸治疗4周,腺嘌呤灌胃与UUO法CRF各组大鼠获取肾脏、肺脏、膀胱组织,用Western blotting检测对应的水通道蛋白AQP1、AQP2、AQP3、AQP4,将不同蛋白条带图像用Image J软件进行灰度值分析,对应DAPDH蛋白条带作进行数据矫正。4.采用SPSS18.0软件对实验结果进行分析,计量资料用均数±标准差（x±s）表示,多组间均数的比较采用两独立样本t检验和单因素方差分析,双侧检验,检验水准α=0.05,P<0.05定义为统计差异性显着。研究结果1.腺嘌呤造模组4周大鼠24h U-TP、BUN、Scr与正常组比较均增高,统计有显着性差异（P<0.05）,大鼠肾脏病理损伤与CRF病理表现一致。金匮肾气丸治疗各组与腺嘌呤模型组24h U-TP、BUN、Scr水平比较降低,有显着统计学差异（P<0.05）,金匮肾气治疗组各组大鼠肾脏病理损伤与腺嘌呤模型组相比,有不同程度减轻。2.UUO术后2周大鼠24h U-TP、BUN、Scr水平与正常组比较均升高,统计有显着性差异（P<0.05）,UUO大鼠肾脏病理损伤与CRF病理表现一致。金匮肾气丸各治疗组与UUO模型组24h U-TP、BUN、Scr水平比较降低,有显着统计学差异（P<0.05）。金匮肾气治疗组各组大鼠肾脏病理损伤与UUO模型组相比,有不同程度减轻。3.各组大鼠肾脏、肺脏、膀胱AQP蛋白检测中（1）腺嘌呤模型组大鼠肾脏AQP1-4与膀胱AQP3表达上调,与正常组比较有显着性差异（P<0.05）。肺脏AQP1与膀胱AQP1表达下调,与正常组比较有显着性差异（P<0.05）。（2）UUO模型组大鼠肾脏AQP1与AQP4、肺脏AQP1、膀胱AQP4表达下调,与正常组比较统计有显着性差异（P<0.05）;膀胱AQP3表达上调,与正常组比较统计有显着性差异（P<0.05）。（3）腺嘌呤CRF金匮肾气丸中高剂量治疗组肾脏AQP1-4均有下调,与腺嘌呤模型组比较统计有差异显着性（P<0.05）。膀胱AQP1水平上调,与腺嘌呤模型组比较统计有差异显着性（P<0.05）。（4）UUO金匮肾气丸高剂量治疗组膀胱AQP4蛋白明显上调,与UUO模型组比较有显着性差异（P<0.05）。研究结论1、金匮肾气丸可以改善腺嘌呤与UUO慢性肾功能衰竭大鼠的生存质量,改善肾功能,减少24h尿蛋白定量,减轻大鼠肾脏的病理损害,可不同程度改善肾脏纤维化损伤程度。2、金匮肾气丸治疗UUO与腺嘌呤CRF大鼠,通过调节不同种类与部位AQP表达发挥作用。两者侧重有不同,金匮肾气丸治疗腺嘌呤CRF主要下调肾脏AQP1-4和上调膀胱AQP1表达。金匮肾气丸治疗UUO大鼠,其肾脏与肺脏AQP2、AQP3、AQP4表达上调不显着,而以膀胱AQP4蛋白表达上调突出。
方桂玉[7]（2021）在《基于网络药理学探讨益肾活血方调节PI3K/AKT/HIF-1α信号通路抗肾纤维化的机制研究》文中研究表明目的1、利用网络药理学技术以及Cytoscape可视化软件,研究益肾活血方治疗肾纤维化的有效成分及可能的作用靶点,探讨益肾活血方治疗RIF的作用机制。2、探讨益气活血法对肾纤维化大鼠PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达及炎症因子IL-6、TNF-α浓度的影响。方法1、利用中药系统药理学（TCMSP）建立益肾活血方的七味中药黄芪、当归、丹参、大黄、红花、三七、牛膝的化合物库;Gene Cards数据库、OMIM数据库预测RIF的靶点;构建益肾活血方化合物靶点-RIF疾病靶点互作网络,并通过DAVID网站对靶点网络进行GO分析和KEGG富集分析,最后采用cytoscape软件对分析结果做可视化网络图。2、动物实验:将36只（体重260±20g）清洁级雄性SD大鼠随机分为六组:假手术组组、模型组、氯沙坦组、益肾活血方低剂量组、益肾活血方中剂量组、益肾活血方高剂量组,每组6只。适应性饲养3天后,假手术组予游离单侧输尿管处理,余五组均用单侧输尿管结扎大鼠模型,益肾活血方不同剂量组和氯沙坦组予以对应的药物灌胃,假手术组和模型组按生理盐水灌胃,疗程14天。各组于药物干预的第14天取材,行HE、Masson染色,并用Western blot法检测各组肾组织VEGF、PI3K、AKT、HIF-1α的蛋白表达,用ELISA检测血清炎性因子IL-6、TNF-α的浓度。结果1网络药理学本研究通过TCMSP化合物分析平台筛选,得到105个化合物;Gene Card、OMIM等靶点预测平台找到了188个益肾活血方化合物-RIF疾病映射靶点进行蛋白互作分析,可见蛋白互作频次较高的有蛋白激酶相关受体（AKT1、MAPK1、MAPK8、JUN等）,炎症相关受体（IL-6、IL-1B、TNF等）,生长因子相关受体（VEGFA、EGFR ESR1等）,根据GO分析显示这些核心靶点主要涉及类固醇激素受体活性、转录因子结合催化功能、蛋白激酶的活性、细胞因子活性等分子功能,涉及炎症趋化因子的调控、白细胞介素-6产生的调控、表皮生长因子激活的调控、肾上腺素能受体信号通路激活MAPK活性等生物过程,可能是通过抑制成纤维细胞因子生长分化、抑制炎症趋化反应、抑制炎症反应、抑制细胞凋亡、抗氧化应激等多靶点发挥对RIF的治疗作用。P13K-Akt、TNF、MAPK、HIF-1、VEGF、TLR、NF-κB信号转导通路等细胞信号通路提示为益肾活血方参与肾纤维的重要通路。以核心靶点IL-6、VEGF、MAPK、AKT1、EGFR、PTGS2为研究载体,对益肾活血方化学成分进行分子对接研究,结果显示益肾活血方化学成分与关键靶点具有较好的结合活性。2.1 HE染色与假手术组相比,模型组大鼠肾脏组织的肾实质重度萎缩变薄,肾小球数量减少、萎缩,部分肾小管呈囊性扩张,间质纤维组织增生。与模型组相比,氯沙坦组与益肾活血方各剂量组的肾实质呈轻到中度萎缩,肾小球萎缩、数量减少,部分肾小管呈囊性扩张。纤维化程度减轻。2.2 Masson染色与假手术组相比,模型组大鼠梗阻侧肾脏组织的胶原纤维蓝染增多,间质胶原纤维形成明显,肾脏组织的小管基底膜及管周围纤维组织显着增生。与模型组相比,氯沙坦组与益肾活血方各剂量组大鼠梗阻侧肾脏组织中胶原纤维蓝染减少,小管基底膜及管周围纤维组织呈中度增生。2.3 PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达第14天,模型组的PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF的蛋白表达均高于假手术组,组间比较均有统计学意义（P<0.05）。益肾活血方各剂量组和氯沙坦组的PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达均低于模型组,组间比较均有统计学意义（P<0.05）。益肾活血方高剂量组和氯沙坦组的PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达相近,组间比较无统计学意义（P>0.05）。2.4炎性因子IL-6、TNF-α浓度第14日,模型组大鼠血清中IL-6、TNF-α的浓度均高于假手术组（P<0.05）。与模型组相比,各治疗组大鼠血清中IL-6、TNF-α浓度均出现不同程度的下降（P<0.05）,益肾活血方高剂量组与氯沙坦组显着低于低、中剂量组（P<0.05）,益肾活血方高剂量组与氯沙坦组大鼠血清IL-6、TNF-α浓度未见统计学差异（P>0.05）。结论1.网络药理学结论表明益肾活血方可能是通过参与炎症反应、血管内皮因子生长分化、氧化应激、表皮生长因子增殖、免疫应答等生物过程,调控P13K/Akt、HIF-1α、VEGF、MAPK、NF-ΚB、TLR等信号通路发挥延缓RIF发生发展作用。2.实验研究证明益肾活血方能够抑制肾纤维化大鼠的PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达,降低血清炎性因子IL-6、TNF-α浓度,其作用机制可能在于益肾活血方抑制P13K/Akt/HIF-1α信号转导通路发挥抑制炎症反应、抑制缺血缺氧状态下的肾脏血管无序增生从而发挥抗RIF作用。
韩妙茹[8]（2021）在《基于“补气活血”法探讨补阳还五汤干预肾间质纤维化的机制》文中认为目的:基于单侧输尿管梗阻（Unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠模型,探讨补阳还五汤对肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis;RIF）的作用机制。方法:1.补阳还五汤对UUO大鼠的药效研究SPF健康雄性SD大鼠50只,随机分为假手术组（Sham）、模型组（UUO）、补阳还五汤低剂量组（BYHW低剂量）、补阳还五汤中剂量组（BYHW中剂量）、补阳还五汤高剂量组（BYHW高剂量）。术后第1天起各剂量治疗组通过灌胃给药。Sham组与UUO组大鼠给予生理盐水灌胃。各组于术后两周处死,处死前一天,经下腔腹主动脉收集血标本,检测血清生化指标,同时切除大鼠梗阻侧肾组织。采用生化检测法测定大鼠Scr、AST水平;HE、Masson染色观察各组大鼠肾脏组织病理变化;免疫组化法检测大鼠肾组织FN、α-SMA蛋白的表达。2.补阳还五汤干预UUO大鼠的转录组学研究取出取材时留用的各组UUO大鼠肾脏组织,Sham组、UUO模型组、（BYHW）高剂量组分别随机选择3个肾组织样本以提取总RNA,并通过质控和过滤,构建测序文库,进行参考基因组比对,转录本组装和合并等过程完成样本表达量分析,筛选出差异基因,最后对得到的目标靶基因进行基因本体（Gene Onotology;GO）和京都基因与基因百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes;KEGG）富集分析。3.补阳还五汤对NF-κB信号通路介导的炎症反应的影响首先采用WB和PCR检测FN、COLⅠ、COLⅢ蛋白和m RNA水平的表达,然后根据GO和KEGG富集分析筛选出主要生物学功能和信号通路,用WB和PCR对筛选出的信号通路进行实验验证并加以讨论分析。结果:1.补阳还五汤对UUO大鼠的药效研究（1）各组大鼠一般状态及肾脏形态观察与假手术组大鼠相比,模型组大鼠精神状态较萎靡,进食量偏少,活动较少,体毛疏松。各药物干预组大鼠精神状态均有不同程度好转,进食量、毛色等较模型组有一定程度改善。与假手术组大鼠肾脏形态相比,模型组大鼠,梗阻侧肾脏的体积远远大于假手术组,质地粗糙,表面凹凸不平,肾组织表面有瘀斑,肾脏内有大量浑浊积液,未梗阻侧肾脏无异常。各干预组肾脏形态改变与模型组相似,但均有不同程度减轻。（2）生化检测及病理改变生化检测结果显示,与Sham组大鼠相比,UUO组大鼠术后Scr水平显着升高（P<0.01）。与UUO组相比,补阳还五汤低剂量与中剂量组Scr水平均有下降趋势,但没有统计学意义（P>0.05）。与模型组相比,补阳还五汤高剂量组大鼠Scr水平显着降低（P<0.01）。与Sham组大鼠相比,UUO组大鼠术后AST水平稍有升高,但组间差异无统计学意义（P>0.05）。与UUO组相比,各药物干预组大鼠血清AST水平虽然轻微升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。HE结果显示,模型组中,肾小管的结构严重受损,管腔增大,间质出现萎缩、塌陷,并伴有纤维组织增生。间质间有大量炎症细胞浸润。各药物干预组相比于模型组,肾组织病理改变均有不同程度减轻。Masson染色显示,模型组中大量的蓝色胶原纤维沉积在肾间质。各药物干预组大鼠肾间质胶原纤维积聚程度均有不同程度减少。与模型组相比,中药低剂量、高剂量组蓝色胶原纤维阳性面积积分明显降低（P<0.05）,中药高剂量组蓝色胶原纤维阳性面积显着降低（P<0.01）。（3）补阳还五汤对UUO诱导的肾间质ECM积聚和肾小管上皮细胞EMT进程的影响免疫组化结果显示,Sham组中FN、α-SMA蛋白在肾间质中分布较少,模型组大鼠FN、α-SMA蛋白在肾小管间质中分布广泛,与模型组相比,各药物干预组FN、α-SMA蛋白的表达情况均有不同程度好转,且以BYHW高剂量组效果最明显（P<0.01）。2.补阳还五汤对UUO大鼠的转录组学研究（1）转录组测序质控、过滤与序列比对三组大鼠肾组织测序文库原始reads数均在97%左右,Q20的碱基比例均在98%左右,通过与SD大鼠参考基因组序列进行比对,总体比对率≥70%,且多重比对率≤10%。（2）两两比较差异基因统计结果Sham＿VS＿UUO差异分析发现共有4268个差异表达基因,其中上调基因有2018个,下调基因有2251个,（BYHW）high-dose group＿VS＿UUO差异分析发现共有626个差异表达基因,其中上调基因有273个,下调基因有353个。将两组差异表达基因中上调基因与下调基因各取交集,即补阳还五汤治疗UUO大鼠的潜在靶基因。共计169个靶基因。（3）靶基因的GO和KEGG富集分析结果显着富集的生物学过程主要包括免疫应答、炎症反应等;显着富集的细胞组分有细胞外空隙、胞外区、核体等,显着富集的分子功能有蛋白质结构域特异性结合、趋化因子活动等。靶基因显着富集的通路主要有细胞因子-细胞因子受体相互作用、胰岛素信号通路、NF-κB信号通路、TNF信号通路、炎症介质对色氨酸通道的调节等多条通路。3.补阳还五汤对NF-κB信号通路介导的炎症反应的影响WB结果显示。与Sham组相比,模型组大鼠FN、COLⅠ、COLⅢ蛋白表达均显着升高（P<0.01）,给予中药治疗后。BYHW低剂量与中剂量治疗组FN蛋白表达虽与模型组比较有一定降低,但差异不具有统计学意义（P>0.05）;BYHW高剂量治疗组FN蛋白含量与UUO组相比明显降低（P<0.05）。BYHW低剂量治疗组COLⅠ表达明显降低（P<0.05）,BYHW中剂量及高剂量组COLⅠ表达显着降低（P<0.01）。各中药干预组大鼠肾间质中COLⅢ蛋白含量均显着降低（P<0.01）。PCR结果显示,UUO组大鼠FN、COLⅠ、COLⅢm RNA表达水平与Sham组相比均显着升高,差异具有统计学意义（P<0.01）,与UUO组相比,各药物干预组情况有所改善,FN、COLⅠ、COLⅢm RNA表达水平均显着降低,差异具有统计学意义（P<0.01）,其中BYHW高剂量组效果最明显。WB检测结果显示,UUO大鼠肾组织P65、p-P65、p-iκBα、IL-6、TNF-α蛋白表达与Sham组相比均显着升高（P<0.01）,iκBα蛋白表达虽然有所降低,但差异没有统计学意义（P>0.05）,与模型组相比,BYHW低剂量治疗组中P65蛋白含量明显降低（P<0.05）,BYHW中、高剂量治疗组P65蛋白含量均显着降低（P<0.01）;BYHW低剂量组中p-P65蛋白含量降低,但差异没有统计学意义（P>0.05）,中剂量治疗组中p-P65蛋白含量明显降低（P<0.05）,高剂量治疗组中p-P65蛋白含量显着降低（P<0.01）;BYHW低、高剂量治疗组p-iκBα蛋白含量明显降低（P<0.05）,中剂量治疗组显着降低（P<0.01）;BYHW低、中剂量治疗组iκBα蛋白水平明显升高（P<0.05）,BYHW高剂量治疗组iκBα蛋白水平升高,但差异没有统计学意义（P>0.05）;各药物治疗组TNF-α均显着降低（P<0.01）;BYHW低、中剂量治疗组IL-6蛋白含量降低,但差异没有统计学意义,高剂量治疗组IL-6蛋白含量明显降低（P<0.05）。PCR检测结果显示,与Sham组相比,iκBαmRNA表达水平明显降低（P<0.05）,P65m RNA表达水平升高,但差异没有统计学意义（P>0.05）,IL-6、TNF-αm RNA表达水平明显升高（P<0.05）。与模型组相比,BYHW低剂量治疗组iκBαm RNA表达水平明显升高（P<0.05）,低、中剂量治疗组iκBαm RNA表达水平均有不同程度升高,但差异没有统计学意义（P>0.05）,各药物干预组P65m RNA均有不同程度降低,但差异没有统计学意义（P>0.05）。各药物干预组IL-6、TNF-αm RNA表达水平明显降低（P<0.05）。结论1.补阳还五汤延缓UUO大鼠肾间质纤维化进程涉及多靶点、多过程、多通路。2.补阳还五汤可以改善UUO大鼠一般状况,改善血清生化指标,减少UUO大鼠的肾脏病理损伤。3.补阳还五汤通过抑制NF-κB诱导的炎症反应。减少细胞外基质沉积,从而抑抑肾间质纤维化的发生发展过程。
周学锋[9]（2021）在《糖肾方改善糖尿病肾脏纤维化和氧化应激损伤的机制研究》文中指出背景糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease,DKD）是糖尿病（diabetes mellitus,DM）的一种严重的微血管并发症,是导致终末期肾脏疾病（end stage renal disease,ESRD）的主要原因之一。2019年,全球糖尿病患病率约为9.3%（4.63亿人）,这一数字预计将在2045年上升到10.9%（7亿人）,大约40%左右的糖尿病患者会变成DKD患者。DKD已经成为危害人类健康的严重疾病。肾脏纤维化是DKD发展过程中的一个重要的病理进程,目前针对DKD肾脏纤维化缺乏行之有效的治疗方案。转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGFβ1）在肾脏纤维化的发生发展中具有重要的作用。相关研究证明,TGFβ1/Smad3通路能够通过调节长链非编码RNA（long non-coding RNAs,LncRNA）调节肾脏纤维化。相关研究发现,LncRNA MEG3（GENEID:55384）的过表达加重了细胞增殖,并诱导了细胞凋亡。LncRNA MEG3可以通过调节miR-181a/Egr-1/TLR4轴调节DKD大鼠的肾脏纤维化和炎症反应。氧化应激在DKD的发生和发展中也起着至关重要的作用。活性氧的过量产生可引起DKD患者早期系膜细胞肥大、系膜扩张、细胞外基质蛋白积聚、肾小球硬化、内皮细胞损伤、足细胞凋亡、蛋白尿、肾脏功能障碍。Keap1/Nrf2是非常重要的内源性抗氧化途径。DKD属于中医学“水肿”、“肾消”、“消渴”、“关格”等病证范畴。DKD肾脏纤维化属于典型的“久病入络”、“肾络瘀阻”。DKD之气阴两虚、肾络亏虚,产生痰浊、瘀血等产物阻滞肾络,痰瘀互结日久则络脉淤塞成积,治疗应该益气养阴,通络祛邪。糖肾方是本课题组负责人李平教授研制的治疗DKD的中药复方,由黄芪、生地黄、山茱萸、卫矛、三七、熟大黄、枳壳共七味药组成,具有益气养阴、活血通络的功效。前期多中心、随机、双盲和安慰剂对照试验证实糖肾方能够显着降低DKD患者的蛋白尿水平,并且改善肾小球滤过率（estimated Glomerularfiltrationrate,eGFR）。但是糖肾方治疗DKD肾脏纤维化以及氧化应激损伤的潜在机制仍未被深入探索。因此本课题利用网络药理学方法结合体内外实验验证糖肾方治疗DKD肾脏纤维化、氧化应激损伤的分子机制。目的1.基于网络药理学方法探索糖肾方治疗DKD肾脏纤维化的潜在机制;2.基于单侧肾切除合并STZ注射诱导的DKD大鼠模型,明确不同剂量糖肾方的治疗作用。3.基于单侧肾切除合并STZ注射诱导的DKD大鼠模型以及高糖诱导的HK2细胞损伤模型,探索糖肾方对DKD肾脏纤维化和氧化应激损伤的作用机制。方法1.利用网络药理学生物信息学方法探索糖肾方治疗DKD肾脏纤维化的主要活性化合物、作用靶点、参与活动以及作用通路。利用Cytoscape软件绘制可视化网络结构图、PPI图,并进行数据分析。2.利用单侧肾切除合并STZ注射诱导的DKD大鼠模型,观察糖肾方低剂量、糖肾方中剂量、糖肾方高剂量的疗效。8周龄Wistar大鼠,适应性喂养3天,测量基础数据:体重、血糖、尿量、尿蛋白定量。然后根据血糖和体重随机分组,Sham组和DKD组,DKD组进行单侧肾切除以及STZ注射造模手术;造模成功后,随机分为以下5组:DKD组、DKD+糖肾方低剂量组（1.2 g/kg/d）、DKD+糖肾方中剂量组（2.4g/kg/d）、DKD+糖肾方高剂量组（4.8g/kg/d）、福辛普利钠组（1.33mg/kg/d）。实验动物10周龄开始灌胃给药,实验期间每周测体重,每4周测血糖,连续灌胃给药20周后结束实验。取材,收集大鼠血清、肾脏、肝脏等标本,并进行血、尿生化检测,Elisa测定尿蛋白等。病理组织切片PAS、MASSON染色等评估肾脏损伤情况。3.利用单侧肾切除合并STZ注射诱导的DKD大鼠模型以及高糖诱导的HK2细胞损伤纤维化模型研究糖肾方治疗DKD肾脏纤维化机制。基于药效学实验结果,选择糖肾方低剂量组完成本章节机制研究。利用免疫组化、Western Blotting、免疫荧光、Real-time PCR 等实验技术评估糖肾方对 DKD 大鼠的肾脏皮质中 Collagen Ⅰ,Collagen Ⅳ,Fibronectin,TGFβ1,Smad 3,p-Smad 3,p-Smad 2/3,LncRNA MEG3 表达水平的影响。糖肾方给药干预高糖诱导的HK2细胞之后,观察HK2细胞中Collagen Ⅰ,Fibronectin,p-Smad 2/3,LncRNA MEG3mRNA 的变化情况。4.利用单侧肾切除合并STZ注射诱导的DKD大鼠模型以及高糖诱导的HK2细胞氧化应激损伤模型研究糖肾方治疗DKD氧化应激损伤的机制。实验分组与方法3相同,利用免疫组化、Western Blotting、免疫荧光、Real-time PCR等实验技术评估糖肾方对DKD大鼠的肾脏皮质中Keap1,Nrf2,HO1,3-NT的影响。利用DHE染色法检测DKD大鼠的肾脏皮质中ROS的含量。糖肾方给药干预高糖诱导的HK2细胞之后,观察HK2细胞中Keap1,Nrf2,HO1的变化情况。结果1.网络药理学研究发现糖肾方的主要活性成分是:槲皮素,beta-谷甾醇,山奈酚,DiincarviloneA,阿魏酸甲酯,地黄苦苷元,羟基-3-甲氧基肉桂醛,豆甾醇,4-羟基肉桂酸甲酯,7-O-methylisomucronulatol;糖肾方治疗DKD肾脏纤维化的核心靶点有:血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGFA）,表皮生长因子受体（epidermal growth factorreceptor,EGFR）,纤连蛋白 1（fibronectin 1,FN1）,TGFβ1,SMAD3,SMAD2等。GO富集分析发现糖肾方参与了抗氧化的生物过程,据此,我们挖掘了与糖肾方有关的氧化应激相关靶点,超氧化物歧物酶1（Superoxidedismutase,SOD1）,HO1,Keap1,Nrf2。糖肾方治疗DKD肾脏纤维化可能是通过调整TGFβ/Smad通路以及Keap1/Nrf2抗氧化应激来实现的。2.药效学结果证明糖肾方能够改善DKD大鼠的肾脏损伤。DKD组大鼠从实验开始时,体重和状态较Sham组较差,随着实验的进行,体重差异持续增加。药物干预第20周时,与DKD组相比较,各给药组的大鼠状态均有改善。糖肾方低剂量、中剂量组大鼠体重从药物干预第14周时体重高于DKD组,并持续到实验结束。DKD组大鼠血糖水平从实验开始时即明显高于Sham组,直到实验结束。糖肾方低剂量、中剂量、高剂量以及福辛普利钠组的血糖水平从实验药物干预第16周开始下降,持续到实验第20周时,显着低于DKD组血糖水平。DKD大鼠的脏器指数、24h尿量、尿蛋白/肌酐比值、血清肌酐、血清尿素氮、丙氨酸氨基转移酶、谷氨酸氨基转移酶、血脂水平等均显着高于Sham组,糖肾方低剂量、中剂量、高剂量以及福辛普利钠治疗DKD大鼠20周之后,均能够显着降低24h尿量,减少尿蛋白排泄量,改善肾脏功能、肝脏功能,纠正血脂紊乱;PAS和Masson’s Trichrome染色显示,DKD组大鼠肾脏出现了显着的肾小球系膜基质增生和肾小管损伤,肾间质纤维化,糖肾方低剂量、中剂量、高剂量以及福辛普利钠干预治疗后,能够改善DKD大鼠肾脏的病理损伤.3.糖肾方能够通过调节TGFβ1/Smad 3通路以及LncRNA MEG3改善DKD肾脏纤维化。与Sham组相比较,DKD大鼠肾脏皮质中Collagen Ⅰ,Collagen Ⅳ,Fibronectin的蛋白和基因表达水平均显着升高。DKD大鼠肾脏皮质中的TGFβ1,p-Smad 2/3,Smad3,p-Smad3蛋白表达水平明显高于Sham组。DKD大鼠肾脏皮质中LncRNA MEG3的基因表达水平明显高于Sham组。给予糖肾方干预治疗20周后,可以显着降低DKD大鼠的Collagen Ⅰ,Collagen Ⅳ,Fibronectin,TGFβ1,p-Smad2/3,Smad3,p-Smad3,LncRNA MEG3的表达。糖肾方可以改善高糖诱导的HK2细胞中Collagen Ⅰ,Fibronectin蛋白的沉积以及Smad 2/3蛋白的磷酸化。下调TGFβ1 mRNA以及Lnc RNA MEG3 mRNA的表达水平。4.糖肾方能够通过调控Keap1/Nrf2信号通路改善DKD氧化应激损伤。DKD大鼠中MDA含量明显高于Sham组,SOD含量明显低于Sham组。DKD大鼠肾脏皮质中的3-NT、Keap1蛋白和基因表达水平显着升高,Nrf2、HO1蛋白表达水平显着降低;免疫荧光结果显示,DKD大鼠肾脏皮质中的ROS含量增加;给予糖肾方干预治疗20周后,能够显着降低DKD大鼠3-NT、Keap1蛋白和基因的表达水平,上调DKD大鼠肾脏皮质中Nrf2、HO1的蛋白表达水平。此外,糖肾方可以降低NOX4基因表达水平,提高TXNRD1和GCLC基因表达水平。糖肾方可以减少高糖诱导的HK2细胞中ROS的含量,提高Nrf2蛋白以及基因表达水平,降低Keap1蛋白以及基因表达水平。结论本研究利用网络药理学预测糖肾方治疗DKD肾脏纤维化的潜在靶点,并在DKD动物模型以及HG诱导的HK2细胞中进行验证,明确了糖肾方通过调节TGFβ1/Smad3通路以及LncRNA MEG3改善DKD肾脏纤维化;通过调控Keap1/Nrf 2信号通路改善DKD氧化应激损伤。
刘博[10]（2021）在《脐带间充质干细胞外泌体通过miR-146a-5p/TRAF6调控自噬减轻慢性肾病的作用及机制研究》文中提出目的:研究人脐带间充质干细胞外泌体（human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosome,huc MSC-Ex）对慢性肾病大鼠肾脏结构和功能的影响,并探讨可能的分子机制。方法:1.分离培养huc MSCs,流式细胞术检测huc MSCs表面标志CD73、CD90和CD105,并对huc MSCs进行成脂和成骨诱导分化。利用差速离心法提取huc MSC-Ex,透射电镜观察huc MSC-Ex形态,western blot检测外泌体蛋白标志物CD9、CD63和CD81。2.体内研究采用单侧输尿管梗阻构建大鼠慢性肾病模型。SD大鼠随机分为4组:假手术组（Control组）,假手术组+外泌体组（Control+Ex组）、单侧输尿管梗阻模型组（UUO组）和单侧输尿管梗阻模型+外泌体组（UUO+Ex组）。造模成功后收集血清和肾脏标本,检测各组大鼠肾功能指标血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）,光镜下观察各组大鼠肾脏病理形态学改变,免疫组化检测上皮间质转化（EMT）标志物CK18、TGF-β1、α-SMA和Collagen-I,电镜下观察自噬小体,免疫荧光观察肾小管上皮自噬相关蛋白LC3的表达,q PCR检测肾脏中mi R-146a-5p的表达,同时在调控mi R-146a-5p的表达后,western blot检测下游TRAF6以及自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。3.体外研究采用TGF-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）上皮间质转化,与huc MSC-Ex共培养。NRK-52E细胞随机分为4组:（1）Control组:正常NRK-52E细胞;（2）Control+Ex组:正常NRK-52E细胞中加入100μg huc MSC-Ex进行共培养;（3）TGF-β1组:NRK-52E细胞中加入5ng/ml TGF-β1诱导上皮间质转化;（4）TGF-β1+Ex组:NRK-52E细胞中加入5ng/ml TGF-β1,同时加入100μg huc MSC-Ex进行共培养。光镜下观察NRK-52E细胞形态,免疫荧光观察EMT标志蛋白α-SMA的表达,电镜下观察自噬小体,q PCR检测细胞中mi R-146a-5p的表达,NRK-52E细胞分别转染mi R-146a-5p mimic、inhibitor及阴性对照,生物信息学预测mi R-146a-5p和TRAF6的结合位点,荧光素酶报告基因进行结构验证,western blot检测下游TRAF6以及自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。结果:1.光镜下huc MSCs呈长梭形,流式细胞术显示huc MSCs高表达CD73、CD90、CD105,不表达CD34、CD45和HLA-DR,同时可诱导分化成脂或成骨。huc MSCs上清液中可提取出外泌体,透射电镜下观察huc MSC-Ex呈双层膜圆形或椭圆形。2.体内研究显示,huc MSC-Ex进入慢性肾病大鼠肾脏组织后,mi R-146a-5p的水平上调,TRAF6的表达下降,肾脏组织中自噬小体的形成增加,自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的表达增加,自噬底物蛋白p62的表达减少,上皮间质转化相关蛋白CK18表达增加,而TGF-β1、α-SMA和Collagen-I表达降低,肾功能和肾脏病理改变得到改善,Scr和BUN水平下降,肾小管损伤程度和肾间质纤维化面积减少。3.体外研究显示,huc MSC-Ex与TGF-β1诱导NRK-52E细胞共培养后,细胞形态部分恢复,EMT标志蛋白α-SMA表达下降,细胞内自噬小体数量增加,mi R-146a-5p的水平上调。NRK-52E细胞转染mi R-146a-5p mimic后,细胞内mi R-146a-5p水平升高,TRAF6水平降低,自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的表达增加,自噬底物蛋白p62的表达减少;而转染mi R-146a-5p inhibitor后,细胞内mi R-146a-5p水平降低,TRAF6水平升高,自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的表达减少,自噬底物蛋白p62的表达增加。数据库预测mi R-146a-5p和Beclin-1存在结合位点,荧光素酶报告基因结果显示mi R-146a-5p可直接通过结合TRAF6发挥抑制作用。结论:1.超速离心法可以高效地提取出huc MSC-Ex,从而为慢性肾病治疗及肾脏损伤修复提供可能;2.体内研究表明,huc MSC-Ex通过mi R-146a-5p/TRAF6调控单侧输尿管梗阻大鼠肾脏自噬,减轻肾脏组织纤维化,有效改善肾脏功能;3.体外研究表明,NRK-52E细胞损伤时,huc MSC-Ex携带并释放mi R-146a-5p,负向调节TRAF6的表达,提高细胞自噬水平,改善NRK-52E上皮细胞间质转化。
二、田黄方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及细胞增殖与凋亡的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、田黄方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及细胞增殖与凋亡的影响（论文提纲范文）
（1）中医药调控Notch信号通路防治肾脏疾病研究进展（论文提纲范文）
| 1 Notch信号通路 |
| 2 Notch信号通路在肾脏疾病中的作用 |
| 3 中医药调控Notch信号通路治疗肾脏疾病 |
| 3.1 糖尿病肾病 |
| 3.2 Ig A肾病 |
| 3.3 肾纤维化 |
| 3.4 膜性肾病 |
| 3.5局灶节段性肾小球硬化 |
| 3.6肾细胞癌 |
| 3.7 其他肾脏疾病 |
| 4 小结 |
（2）补益活血清泄方药防治肾纤维化机制研究进展（论文提纲范文）
| 1 单味中药及其提取物研究 |
| 1.1 补益中药 |
| 1.2 活血化瘀中药 |
| 1.3 清泄解毒中药 |
| 2 中药复方的研究 |
| 2.1 补益活血法 |
| 2.2 活血清泄法 |
| 2.3 补益清泄法 |
| 2.4 补益活血清泄法 |
| 3 小结 |
（3）虫草益肾方对肾纤维化大鼠Hippo信号通路表达的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2实验药物 |
| 1.3 试剂与仪器 |
| 1.4 模型制备[3-5] |
| 1.5 给药方法 |
| 1.6 标本采集与检测 |
| 1.7 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠一般情况 |
| 2.2 各组大鼠血清肌酐及尿素氮水平比较 |
| 2.3 各组大鼠肾组织病理及纤维化面积的比较 |
| 2.4 各组大鼠肾脏组织MST1、p-MST1、LATS1、p-LATS1、YAP、p-YAP及α-SMA、E-cadherin蛋白表达比较 |
| 3 讨论 |
（4）基于NF-κB/HIF-1α通路探讨“黄芪-丹参”药对干预UUO肾间质纤维化模型的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 研究一基于中医传承辅助平台探讨王耀光教授治疗慢性肾脏病的用药规律分析 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 研究二“黄芪-丹参”对UUO实验大鼠肾脏的病理影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 研究三:“黄芪-丹参”通过NF-κB/HIF-α信号通路对UUO大鼠肾纤维化的干预机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 肾间质纤维化的相关机制以及中西医结合治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）基于Wnt/β-catenin信号通路研究桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠的作用机制（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 实验部分 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 主要实验设备 |
| 1.4 主要实验试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与造模 |
| 2.2 药物配制 |
| 2.3 灌胃给药 |
| 2.4 标本采集 |
| 2.5 观测指标 |
| 2.6 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 一般情况观察 |
| 3.2 肾脏的肉眼观察 |
| 3.3 贫血指标、肾功能检测结果 |
| 3.4 实时荧光定量PCR检测结果 |
| 3.5 Western Blot检测结果 |
| 3.6 左肾组织透射电镜观察（×10000） |
| 第二部分 理论研究 |
| 1 现代医学对CRF的认识 |
| 1.1 CRF发病原因及机制 |
| 1.2 肾纤维化的形成与慢性肾衰竭 |
| 1.3 慢性肾衰竭的西医防治措施 |
| 2 从中医角度探讨CRF |
| 2.1 关于CRF的中医病名探究 |
| 2.2 CRF病因病机 |
| 2.3 当代中医名家对CRF的辨治 |
| 2.4 逐瘀泄浊法论治CRF |
| 2.5 桃核承气汤治疗CRF分析 |
| 2.6 桃核承气汤临证加减 |
| 2.7 桃核承气汤前期研究成果总结 |
| 第三部分 分析与讨论 |
| 1 5/6 肾切除法建立CRF造模方法选择依据 |
| 2 假手术组和实验药物对照组设立的意义 |
| 3 Wnt信号通路与肾纤维化 |
| 4 桃核承气汤对CRF大鼠的干预作用 |
| 4.1 改善大鼠一般情况 |
| 4.2 改善大鼠贫血和肾功能 |
| 4.3 改善大鼠肾组织病理形态 |
| 4.4 影响大鼠肾组织APC、β-catenin、TCF4 的表达 |
| 5 本实验的不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 活血化瘀法治疗慢性肾衰竭研究近况 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（6）基于“肾主水”理论探讨金匮肾气丸治疗慢性肾功能衰竭的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Absract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 金匮肾气丸治疗腺嘌呤慢性肾功能衰竭大鼠实验研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器与设备 |
| 1.4 实验动物分组 |
| 1.5 给药方法 |
| 1.6 观察指标 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠一般情况 |
| 2.2 各组大鼠体重变化 |
| 2.3 各组大鼠血常规与生化指标 |
| 2.4 各组大鼠24hU-TP |
| 2.5 腺嘌呤复制CRF大鼠模型 |
| 2.6 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏形态 |
| 2.7 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏病理 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 金匮肾气丸治疗UUO慢性肾功能衰竭大鼠实验研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器与设备 |
| 1.4 实验动物分组 |
| 1.5 UUO法复制CRF大鼠模型 |
| 1.6 给药方法 |
| 1.7 观察指标 |
| 1.8 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠一般情况 |
| 2.2 各组大鼠体重变化 |
| 2.3 各组大鼠血常规与生化指标 |
| 2.4 各组大鼠24hU-TP |
| 2.5 UUO法复制CRF大鼠模型 |
| 2.6 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏外形 |
| 2.7 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏病理 |
| 3、讨论 |
| 4、小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 慢性肾功能衰竭大鼠水通道蛋白表达的实验研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备 |
| 1.4 实验AQP检测 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠肾脏AQP蛋白检测结果 |
| 2.2 各组大鼠肺脏AQP蛋白检测结果 |
| 2.3 各组大鼠膀胱AQP蛋白检测结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结语 |
| 附录 文献综述 |
| 文献综述一 慢性肾功能衰竭研究进展 |
| 文献综述二 慢性肾功能衰竭中医药研究进展 |
| 文献综述三 水通道蛋白(AQPs)的相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 读博期间发表的文章及参与的科研 |
| 致谢 |
（7）基于网络药理学探讨益肾活血方调节PI3K/AKT/HIF-1α信号通路抗肾纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRIFCT |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1 益肾活血立法的益肾活血方抗肾纤维化依据 |
| 1.1 肾纤维化的形成机制 |
| 1.1.1 细胞外基质沉积 |
| 1.1.2 炎症因子 |
| 1.1.3 血小板源性生长因子 |
| 1.1.4 转化生长因子 |
| 1.1.5 肾小管细胞上皮间充质转化 |
| 1.1.6 氧化应激反应 |
| 2 祖国医学对肾纤维化的认识 |
| 2.1 脾肾亏虚 |
| 2.2 水湿毒瘀蓄积 |
| 2.3 久病入络 |
| 3 益肾活血方与肾纤维化 |
| 3.1 益肾活血方组方 |
| 3.2 益肾活血方组方的现代药理学研究 |
| 4 基于网络药理学的中药复方研究 |
| 5 本课题研究目的及意义 |
| 第二章 基于网络药理学探讨益肾活血方治疗肾纤维化的作用机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 活性化合物的筛选 |
| 1.2 活性化合物的靶点预测 |
| 1.3 RIF相关基因的筛选 |
| 1.4 可视化网络构建 |
| 1.5 蛋白互作(PPI)网络的构建 |
| 1.6 Gene Ontology(GO)分析和KEGG通路分析 |
| 1.7 分子对接 |
| 2 结果 |
| 2.1 活性化合物筛选 |
| 2.2 活性化合物的靶点预测 |
| 2.3 网络关系构建 |
| 2.3.1 药物-化合物-疾病-靶点网络图 |
| 2.3.2 核心靶点PPI蛋白互作分析 |
| 2.4 GO及 KEGG分析 |
| 2.5 潜在活性成分-靶蛋白分子对接 |
| 3 讨论 |
| 3.1 益肾活血方治疗RIF的核心化合物及靶点 |
| 3.2 益肾活血方对细胞信号通路的调控 |
| 3.2.1 MAPK信号通路 |
| 3.2.2 NF-ΚB信号通路 |
| 3.2.3 PI3K/Akt/HIF-1α信号通路 |
| 第三章 基于网络药理学成果论证益肾活血方调节PI3K/AKT/HIF-1α信号通路的抗肾纤维化机制 |
| 第一部分 动物实验 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 造模和分组 |
| 2.2 给药 |
| 2.3 肾脏组织样本取材及固定 |
| 2.4 肾脏组织石蜡包埋切片 |
| 2.5 肾脏组织HE染色步骤 |
| 2.6 肾脏组织Masson染色步骤 |
| 2.7 模型评判标准 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 单侧输尿管梗阻大鼠模型的复制 |
| 4.2 益肾活血方改善单侧输尿管梗阻大鼠模型肾脏病理变化 |
| 4.3 益肾活血方减少单侧输尿管梗阻模型大鼠肾脏胶原纤维沉积 |
| 第二部分 WB检测肾组织VEGF、HIF-1α、PI3K、AKT蛋白表达 |
| 1 实验 |
| 1.1 动物及分组、给药方法 |
| 1.2 试剂和耗材 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 试剂及配制 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 结果处理 |
| 1.7 实验结果 |
| 2 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 WB检测肾组织PI3K、AKT、HIF-1α、VEGF蛋白表达 |
| 3.1.1 益肾活血方抑制PI3K的蛋白表达 |
| 3.1.2 益肾活血方抑制AKT的蛋白表达 |
| 3.1.3 益肾活血方抑制HIF-1α的蛋白表达 |
| 3.1.4 益肾活血方抑制VEGF的蛋白表达 |
| 第三部分 ELISA检测血清IL-6、TNF-α表达水平 |
| 1 ELISA实验方法及步骤 |
| 1.1 试剂和耗材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 复温 |
| 1.4 加样 |
| 1.5 配液 |
| 1.6 洗涤 |
| 1.7 显色 |
| 1.8 终止 |
| 1.9 测定 |
| 1.10 读取实验结果 |
| 2 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 血清中IL-6、TNF-α的浓度比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 基于PI3K/AKT/HIF-1α信号通路探讨益肾活血方抗肾纤维化的机制 |
| 4.1.1 PI3K/AKT/HIF-1α信号通路与炎症 |
| 4.1.2 VEGF、HIF-α与血管新生 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 综述 基于网络药理学对复方中药作用机制的研究和思考 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（8）基于“补气活血”法探讨补阳还五汤干预肾间质纤维化的机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 补阳还五汤对UUO大鼠肾间质纤维化的药效研究 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 补阳还五汤对UUO大鼠的转录组学研究 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 实验三 补阳还五汤对UUO大鼠的作用机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 1 实验设计 |
| 2 补阳还五汤抑制肾间质纤维化的中医机理 |
| 3 补阳还五汤的系列研究现状 |
| 4 补阳还五汤对 UUO 大鼠模型作用机制的探讨 |
| 5 不足与展望 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 肾间质纤维化中西医结合研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）糖肾方改善糖尿病肾脏纤维化和氧化应激损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述一 LncRNA在DKD肾脏纤维化中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 中药改善DKD氧化应激损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 基于网络药理学探讨糖肾方治疗DKD肾脏纤维化的机制 |
| 一、实验材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第二章 糖肾方治疗单侧肾切除合并STZ注射诱导的DKD大鼠的疗效观察 |
| 一、实验材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第三章 糖肾方通过调控TGFβ1/Smad3和LncRNA MEG3改善DKD肾脏纤维化的机制研究 |
| 一、实验材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第四章 糖肾方通过调控Keap1/Nrf2减轻DKD氧化应激损伤的机制研究 |
| 一、实验材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 在学期间主要研究成果 |
（10）脐带间充质干细胞外泌体通过miR-146a-5p/TRAF6调控自噬减轻慢性肾病的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 脐带间充质干细胞及其外泌体的提取及鉴定 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 脐带间充质干细胞外泌体减轻慢性肾病大鼠肾脏损伤及机制探讨 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 脐带间充质干细胞外泌体调控肾小管上皮细胞自噬减轻肾小管上皮损伤及机制 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述:间充质干细胞外泌体在慢性肾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表论文及科研成果 |
四、田黄方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及细胞增殖与凋亡的影响（论文参考文献）
- [1]中医药调控Notch信号通路防治肾脏疾病研究进展[J]. 孙倩,李姗姗,杨少宁,于小勇. 中国实验方剂学杂志, 2021(24)
- [2]补益活血清泄方药防治肾纤维化机制研究进展[J]. 杨旭,韩聪,李伟. 实用中医药杂志, 2021(07)
- [3]虫草益肾方对肾纤维化大鼠Hippo信号通路表达的影响[J]. 苑伯菲,宋立群,代丽娟,于珊珊,贠捷. 中国中医急症, 2021
- [4]基于NF-κB/HIF-1α通路探讨“黄芪-丹参”药对干预UUO肾间质纤维化模型的机制研究[D]. 秦浩. 天津中医药大学, 2021(01)
- [5]基于Wnt/β-catenin信号通路研究桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠的作用机制[D]. 王巧花. 福建中医药大学, 2021(01)
- [6]基于“肾主水”理论探讨金匮肾气丸治疗慢性肾功能衰竭的实验研究[D]. 边红萍. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [7]基于网络药理学探讨益肾活血方调节PI3K/AKT/HIF-1α信号通路抗肾纤维化的机制研究[D]. 方桂玉. 广西中医药大学, 2021
- [8]基于“补气活血”法探讨补阳还五汤干预肾间质纤维化的机制[D]. 韩妙茹. 天津中医药大学, 2021(01)
- [9]糖肾方改善糖尿病肾脏纤维化和氧化应激损伤的机制研究[D]. 周学锋. 北京中医药大学, 2021(01)
- [10]脐带间充质干细胞外泌体通过miR-146a-5p/TRAF6调控自噬减轻慢性肾病的作用及机制研究[D]. 刘博. 重庆医科大学, 2021(01)