一、用扣除杂交法分离藏红花苷合成相关基因的克隆（论文文献综述）
苏在兴,高闰飞,李强[1]（2017）在《基因差异表达分析方法及其在作物遗传育种中的应用》文中指出植物基因的差异表达是细胞形态和功能多样性的根本原因,也是各种生理及病变过程的物质基础.分析基因差异表达是近30年来分子生物学研究的重点,研究方法也从最早的差减杂交、差异显示PCR和cDNA代表性差异分析等,不断地发展到基于测序的表达系列标签和转录组测序技术,其中高通量测序技术的应用,使得分子生物学进入后基因组时代,特别是转录组测序可高效率、大批量地获取差异表达基因.通过基因差异表达分析,可挖掘农作物的优异农艺性状、高品质、抗性以及杂种优势等相关基因,辅助常规育种,提高农作物的品质、产量、抗性等综合性状,并为探究其机理、机制奠定基础.
王海玲[2]（2011）在《西红花花柱离体培养技术及培养物特征特性的研究》文中指出西红花（Crocus sativus Linn.）为鸢尾科番红花属球根类多年生草本植物,属珍稀药用植物,也是日用化工染料与食品香料制品的天然原料。在传统栽培与生产方式下,球茎繁殖系数和柱头产量极低,造成资源短缺,价格昂贵。因此,应用植物组织培养技术以高效生产西红花药用组织及活性成分的研究业已受到人们的关注。鉴于西红花药用部位仅限柱头的特殊性,本研究以西红花的花柱、柱头和雄蕊为初代培养试验材料,花柱培养物为继代培养试验材料,对初代培养和继代培养过程中培养物的增殖生长、器官分化、特征特性的变化及其影响因素进行了分析,探讨了离体成花、花柱培养物干燥处理及活性成分检测的优化条件,初步建立了以西红花活性成分生产为目标的花柱离体培养技术体系,主要取得以下实验结果。1.在西红花初代培养试验中,探讨了外植体种类及处理方式、接种方法对培养效果的影响。结果表明,采用改良的一步灭菌法、适宜的切割方式与接种方式能够获得污染少、出愈率高的培养效果;不同发育阶段的花柱都能诱导形成愈伤组织,与柱头和雄蕊相比,花柱是更为适合的外植体材料。2.在西红花花柱初代培养过程中,生长素是诱导花柱愈伤组织形成的重要影响因子,在2.0-8.0 mg/L浓度范围内,较低浓度的NAA有利于愈伤组织的形成,细胞分裂素6-BA的作用相对较弱,但与生长素之间具有显着的互作效应,在配合使用NAA 2.0mg/L与6-BA 1.0mg/L的激素条件下出愈率最高,对花柱脱分化形成愈伤组织最为有利;其次,花柱主要形成三种不同类型的愈伤组织,其生长量、色泽、质地、均匀性等外观特性受激素条件的影响比较显着,在MS+6-BA 5.0 mg/L+ NAA 2.0 mg/L + 2,4-D 2.0 mg/L培养基中,可获得生长快、外观特性良好的愈伤组织,由此初步建立了西红花花柱诱导愈伤组织的初代培养技术体系。3.在西红花花柱初代培养过程中,也发生了愈伤组织的花器官分化或离体成花。在供试培养基及培养条件下,雄蕊和花柱表现不同的分化方式,前者直接分化形成花或花器官,后者则首先脱分化形成愈伤组织,再由愈伤组织分化形成花或花器官,而柱头未见花器官的形成;发育较为成熟的花柱（A2）作为外植体时,多形成具有柱头（或柱头状结构）+花瓣状结构的“完全花”,易于培养离体成花,而幼嫩花柱（A1）则多形成花瓣或花瓣状结构,无柱头或柱头状结构的形成,但两种外植体均无雄蕊或类似结构的形成;细胞分裂素（6-BA）与生长素（NAA）的激素配比对花器官分化类型起着主要作用,6-BA/NAA较高时有利于柱头状结构的形成;在花柱离体成花过程中,NAA的使用效果最好,IBA次之,2,4-D最差。4.在长期继代（第6-18代）培养过程中,西红花花柱培养物出现了多种类型的形态分化,研究结果表明其形态特征与化学成分的积累具有一定相关性,并且受激素条件的影响比较显着,基本确立了花柱培养物中6种主成分产生所需的激素条件;其次,花柱培养物的增殖能力、生长量、外观特性等,也随培养次数的增加呈现不稳定性,其中增殖能力大多呈现先下降、后增强的变化趋势,而外观特性（颜色、质地、均匀性）的变化趋势呈现不确定性,但在MS+6-BA 5.0mg/L+ NAA 5.0mg/L培养基中,能够保持其质地和器官分化能力的相对稳定。5.本研究确定的样品前处理方法有利于提高西红花培养物的外观品质,烘干前的预处理温度对化合物种类和含量具有显着影响,而在适宜温度预处理下烘干温度的影响相对较小,研究表明80℃预处理和烘干温度40℃的干燥条件有利于优良感官品质的形成。试验结果表明,不同类型的培养物及不同提取方法可分别检测到各具特征峰的不同化学成分;在西红花花柱的高代培养物中含有水溶性多糖、黄酮类、生物碱与酚类、皂苷、鞣质、有机酸、蒽醌类、香豆素与萜类内酯、甾体或二萜类等多类化合物,其中总黄酮和多糖含量与天然柱头之间未检测到显着差异;在花柱高代培养物所含的17种以上化学成分中,至少包含了天然柱头中的cis-5-tG crocetin ester （350 nm）、cis-3-Gg crocetin ester （290 nm/200 nm）、Tribulusterine（268 nm）、Tamarixetin o-kaempferol biflavonoid hexoside或Kaempferol esterofoed derivative（270 nm）等。
佘卫炜,郭志刚,刘瑞芝[3]（2004）在《用扣除杂交法分离藏红花苷合成相关基因的克隆》文中研究说明对藏红花苷合成的相关基因进行了初步分离与克隆实验研究,旨在分离与藏红花苷合成相关的特异性表达的cDNA克隆,为进一步从分子水平上研究藏红花素的合成机理奠定基础。实验采用经添加诱导子和合成前体、处于藏红花苷合成状态下的藏红花细胞和未添加诱导子和合成前体、处于生长状态的对照藏红花细胞为材料,采用扣除杂交法成功地分离到6条与藏红花苷合成相关的特异性表达的cDNA克隆。结果表明:其中一条与胡杨中由高盐环境引起的差异表达的一条mRNA的序列有较高的同源性。
二、用扣除杂交法分离藏红花苷合成相关基因的克隆（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、用扣除杂交法分离藏红花苷合成相关基因的克隆（论文提纲范文）
（1）基因差异表达分析方法及其在作物遗传育种中的应用（论文提纲范文）
| 1 基因差异表达的研究方法 |
| 1.1 基因差异表达分析方法 |
| 1.1.1 差减杂交 (subtractive hybridization, SH) |
| 1.1.2 mRNA差异显示逆转录PCR (differential display of reverse transcriptional PCR, DDRT-PCR) |
| 1.1.3 cDNA代表性差异分析 (cDNA-RDA) |
| 1.1.4 表达系列标签 (serial analysis of gene expression, SAGE) |
| 1.1.5 抑制差减杂交 (suppression subtractive hybridization, SSH) |
| 1.1.6 cDNA限制性片段长度多态性分析 (cDNA-AFLP) |
| 1.1.7 基因芯片 (DNA Chips) 技术 |
| 1.1.8 半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR |
| 1.1.9 转录组测序 (RNA-Seq) 技术 |
| 1.1.1 0 基因编辑技术 |
| 1.2 基因差异表达方法的特点比较 |
| 2 基因差异表达分析在作物遗传育种上的应用 |
| 2.1 挖掘重要农艺性状相关基因 |
| 2.2 挖掘重要品质性状相关基因 |
| 2.3 挖掘耐逆相关基因 |
| 2.4 挖掘与作物杂种优势相关的基因 |
| 3 结语与展望 |
（2）西红花花柱离体培养技术及培养物特征特性的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 西红花生物学特性 |
| 1.1.1 特征形态 |
| 1.1.2 生长发育习性 |
| 1.2 我国西红花资源现状与开发利用 |
| 1.2.1 资源现状及市场动态 |
| 1.2.2 西红花资源开发利用 |
| 1.2.3 西红花的质量评价 |
| 1.3 西红花的活性成分及其体内外合成 |
| 1.3.1 西红花不同组织器官中的活性成分 |
| 1.3.2 西红花糖苷的生物合成 |
| 1.3.3 活性成分的化学合成 |
| 1.4 西红花栽培与生产技术 |
| 1.5 西红花的组织细胞培养 |
| 1.5.1 西红花组织培养外植体的选择 |
| 1.5.2 西红花组织培养的分化途径 |
| 1.5.3 西红花组织培养的培养基组成 |
| 1.5.4 西红花组织培养的培养基成分 |
| 1.5.5 西红花的细胞悬浮培养 |
| 1.6 本研究的目的和意义 |
| 第二章 西红花花柱初代培养技术及器官分化的研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 培养基 |
| 2.1.3 外植体处理及接种方法 |
| 2.1.4 供试外植体种类 |
| 2.1.5 调查内容与统计分析方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 西红花离体培养外植体处理及接种方法的研究 |
| 2.2.2 西红花离体培养的外植体选择 |
| 2.2.3 激素条件对西红花花柱愈伤组织诱导与生长的影响 |
| 2.2.4 外植体种类对培养物花器官分化的影响 |
| 2.2.5 激素条件对西红花花柱离体培养中花器官分化的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 西红花愈伤组织初代培养技术要点 |
| 2.3.2 西红花花柱培养诱导愈伤组织形成的激素条件 |
| 2.3.3 外植体种类与花器官分化的关系 |
| 2.3.4 西红花花柱培养中花器官分化的培养条件 |
| 第三章 西红花花柱培养物继代培养条件及其特征特性的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 继代培养方法 |
| 3.1.3 调查内容 |
| 3.1.4 活性物质种类和含量的测定 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 西红花花柱继代培养中培养物形态的分化 |
| 3.2.2 西红花花柱培养物形态特征与化学成分积累的相关性研究 |
| 3.2.3 西红花花柱高代培养物的稳定性分析 |
| 3.2.4 西红花花柱高代培养物外观特性稳定性分析 |
| 3.2.5 继代次数对西红花花柱培养物活性物质种类和含量的影响 |
| 3.2.6 继代周期对西红花花柱培养物外观特性的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 西红花花柱高代培养物形态变化与次生代谢产物积累的关系 |
| 3.3.2 西红花花柱高代培养物外观特性变化 |
| 3.3.3 西红花花柱继代培养中的褐化问题及解决方法 |
| 3.3.4 愈伤组织继代培养中分化潜能丧失的问题 |
| 第四章 西红花花柱培养物干燥技术及化学成分分析 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 西红花培养物材料 |
| 4.1.2 培养物干燥流程 |
| 4.1.3 试验设计 |
| 4.1.4 外观品质评价 |
| 4.1.5 褐变指数的测定 |
| 4.1.6 活性物质种类和含量的测定 |
| 4.1.7 样品提取及定性分析方法 |
| 4.1.8 化学物质含量分析 |
| 4.1.9 紫外-可见光谱扫描和高效液相色谱检测 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 样品前处理方法的确定 |
| 4.2.2 干燥条件对西红花花柱培养物品质的影响 |
| 4.2.3 干燥条件对西红花花柱培养物活性物质的影响 |
| 4.2.4 西红花花柱培养物的提取液颜色 |
| 4.2.5 西红花花柱培养物化学成分初步分析 |
| 4.2.6 西红花花柱培养物水溶性总糖和总黄酮含量分析 |
| 4.2.7 不同提取液的化学成分分析 |
| 4.2.8 西红花天然器官与花柱培养物化学成分的比较分析 |
| 4.3 讨论 |
| 结论 |
| 主要参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（3）用扣除杂交法分离藏红花苷合成相关基因的克隆（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞培养 |
| 1.2 总RNA的提取和残存DNA的去除 |
| 1.3 扣除杂交 |
| 1.4 目的序列的PCR扩增 |
| 1.5 序列测定及同源性分析 |
| 2 结果与讨论 |
| 2.1 总RNA质量的分析 |
| 2.2 扣除cDNA的PCR扩增 |
| 2.3 扣除cDNA的序列分析 |
| 3 结 论 |
四、用扣除杂交法分离藏红花苷合成相关基因的克隆（论文参考文献）
- [1]基因差异表达分析方法及其在作物遗传育种中的应用[J]. 苏在兴,高闰飞,李强. 江苏师范大学学报(自然科学版), 2017(01)
- [2]西红花花柱离体培养技术及培养物特征特性的研究[D]. 王海玲. 苏州大学, 2011(06)
- [3]用扣除杂交法分离藏红花苷合成相关基因的克隆[J]. 佘卫炜,郭志刚,刘瑞芝. 清华大学学报(自然科学版), 2004(12)