一、川芎嗪和苦参碱对HSC-T6细胞增殖的抑制作用（论文文献综述）
程金秋[1]（2021）在《基于网络药理学探讨雄芍汤抗肝纤维化的免疫机制研究》文中研究指明目的运用网络药理学方法研究雄芍汤（Xiongshao Decoction,XSD）治疗肝纤维化（hepatic fibrosis,HF）的核心靶标以及作用机制,并通过动物实验、细胞实验对预测结果进行验证,为雄芍汤的临床应用提供理论和实验依据。方法复方网络药理学部分:1.以OB≥30%且DL≥0.18为条件,通过TCMSP数据库查询雄芍汤中各中药的有效成分靶点,之后将结果逐个输入到Uni Prot数据库中,得到各中药靶点蛋白的基因ID和基因名。有效成分和基因靶点经整理后导入到Cytoscape 3.7.2软件中构建“中药-成分-靶点”网络图。2.运用Gene Cards疾病数据库检索HF的基因靶点,将HF的靶点基因与雄芍汤各中药有效成分靶点取交集后,通过Visual Paradigm社区版16.2软件绘制得到雄芍汤治疗HF的潜在靶点韦恩图。3.运用String数据库将潜在靶点导入,限定物种为人,获取两者蛋白相互作用的关系图,去掉游离节点,根据degree值绘制柱状图,获得核心基因。4.运用Metascape数据库对潜在靶点进行GO富集和KEGG通路分析,得到核心通路。动物实验部分:1.以CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,分别以临床日等效剂量的7倍为应用量对大鼠进行灌胃,HE染色法检测正常组、模型组、扶正化瘀胶囊（Fuzheng Huayu Capsule,FHC）阳性对照组、雄芍汤组各组肝组织病理情况。2.ELISA法检测上述各组血清中IL-17、IL-6、TNF-α的含量。细胞实验部分:1.以大鼠肝星状细胞（HSC-T6）为研究对象,分别以临床日等效剂量的10倍为应用量,制备大鼠雄芍汤、扶正化瘀胶囊含药血清。2.以TGF-β1为诱导因子建立HSC肝纤维化模型,MTT法检测模型组（TGF-β1+空白血清）、雄芍组、扶正化瘀组含药血清分别在体积分数为15%、10%、5%条件下对HSC-T6细胞的增殖抑制率。3.ELISA法检测空白组、模型组、雄芍组、扶正组细胞上清液中IL-17、IL-6、TNF-α的含量。结果复方网络药理学部分:1.通过TCMSP和Uniprot数据库筛选的雄芍汤中各中药的有效成分靶点,共得到83个活性成分和124个有效成分相关靶点基因,利用Cytoscape 3.7.2软件中构建“中药-成分-靶点”网络图。2.通过查询Gene Cards数据库,得出5637个HF相关靶点,经过相关性评分中位数筛选最终得到1411个疾病相关靶点,将这些靶点与雄芍汤复方靶点进行重叠后得到55个相交靶点作为潜在靶点。3.对55个潜在核心基因构建PPI网络。最终,此网络中,度值最高的3个靶点是AKT1（度值43）、IL-6（度值42）、TNF（度值38）。4.得到GO条目总共4570条,其中GOMF条目447条,GOBP条目3855条,GOCC条目268条,分别以5、15、4个基因数为基础得到相应结果作为核心条目;KEGG通路373条,选前20条作为核心通路。动物实验部分:1.HE染色结果:正常组大鼠肝小叶结构清晰、完整,肝细胞分布规律,细胞核大而圆,核仁清晰,肝细胞索以中央静脉为中心向周围呈放射状排列,未见胶原纤维增生及炎性细胞浸润;模型组大鼠肝小叶结构被破坏,结缔组织增生明显,分隔、包绕正常肝小叶,形成大小不等的结节,即假小叶形成。假小叶中肝细胞索排列紊乱,小叶中央静脉缺如,纤维组织可见明显的炎性细胞浸润;扶正化瘀组大鼠肝组织中有少量纤维索条,假小叶消失,肝索排列接近正常,纤维组织炎性浸润程度较模型组明显减轻;雄芍汤组大鼠肝组织与模型组相比,纤维索条变小、变细,假小叶消失,肝索排列接近正常,纤维组织炎性浸润较扶正组化瘀组减少。2.ELISA检测结果:与正常组相比,模型组IL-6、IL-17、TNF-α水平明显升高,差别具有显着性（P<0.01）;与模型组相比,雄芍组、扶正组IL-6、IL-17、TNF-α水平明显降低,差别具有显着性（P<0.05或P<0.01）;与扶正组相比,雄芍组IL-17、TNF-α含量无明显变化,IL-6水平明显升高（P<0.05）。细胞实验部分:1.MTT实验结果:与空白对照组相比,各浓度模型组HSC-T6细胞均显着增殖（P<0.05）;与15%、10%同浓度模型组相比,雄芍组、扶正组均对HSC-T6细胞增殖有抑制作用,差异具有显着性（P<0.05）;与5%同浓度模型组相比,各治疗组对HSC-T6细胞增殖均无抑制作用;各浓度的扶正组与雄芍组的HSC-T6细胞增殖的抑制率均无显着性差异;与15%同浓度雄芍组相比,5%浓度雄芍组对HSC-T6细胞增殖的抑制率显着降低（P<0.05）,而10%雄芍组对HSC-T6细胞增殖抑制率与其差异不明显。2.ELISA检测结果:作用24h后,与空白组相比,模型组HSC细胞上清液中IL-6、IL-17、TNF-α含量均显着增加（P<0.01）;与模型组相比,雄芍组及扶正组IL-6、IL-17、TNF-α含量均显着减少（P<0.01）;与扶正组相比,雄芍组细胞上清液中IL-6、IL-17含量均无明显差异,TNF-α含量显着增加（P<0.05）。结论通过中药复方网络药理学及实验验证发现,雄芍汤抗肝纤维化的作用机制可能与抑制炎性因子的释放、减少HSC的增殖、阻断促炎信号的转导有关。
薛文静[2]（2021）在《基于RhoA/ROCK Ⅱ通路探讨原发性高血压痰湿壅盛证与炎性因子的相关性研究》文中进行了进一步梳理目的:研究Rho/ROCK信号通路及相关炎症因子在原发性高血压病及原发性高血压病痰湿壅盛证中的差异。本研究采用酶联免疫吸附法检测外周静脉血ROCKⅡ（Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2）、NF-κBp65（核转录因子κB）、TIMP-1（基质金属蛋白酶抑制因子-1）、ICAM-1（细胞间黏附分子-1）表达水平,采用RT-PCR技术检测外周静脉血单核细胞中的RhoAmRNA、ROCKⅡmRNA的表达水平。并通过分析比较上述指标在原发性高血压病患者与健康人群之间表达水平的差异性,进而探究原发性高血压病与上述指标的相关性。并同时分析比较上述指标在原发性高血压病痰湿壅盛证与非痰湿壅盛证患者之间表达水平的差异性,进而探究原发性高血压病痰湿壅盛证与上述指标的相关性。为原发性高血压病痰湿壅盛证的病理机制与临床诊断提供更多的生物学参考依据。方法:纳入2020年8月-2020年12月就诊于广安门医院心内科及综合科病房的原发性高血压病患者120例。并纳入2020年11月-2020年12月广安门医院预防保健科的健康体检者30例（年龄与高血压病患者相当）。参照卫生部制定《中药新药临床研究指导原则》中,高血压病痰湿壅盛证的中医证型诊断标准:120例高血压病患者包括痰湿壅盛证组（85例）与非痰湿壅盛证组（35例）。于入院第二天清晨抽取所有受试者的空腹静脉血,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测外周静脉血ROCKⅡ、NF-κBp65、TIMP-1、ICAM-1表达水平,并采用RT-PCR技术检测外周静脉血单核细胞中RhoAmRNA、ROCKⅡmRNA表达水平,并同时收集整理所有入组受试者的一般资料、全血细胞分析、生化全项等相关临床检验数据。所得数据采用SPSS 20.0统计软件进行统计学分析处理。结果:经统计学分析,结果显示,原发性高血压病患者组与健康组,两组在性别、年龄、ALT、AST、Scr、BUN等方面无统计学差异;原发性高血压病痰湿壅盛证与非痰湿壅盛证患者在性别、年龄、BMI、高血压分级、诊室收缩压/舒张压、ALT、AST、Scr、BUN、TC、LDL-C、GLU等方面无统计学差异。1.原发性高血压病患者ROCKH、NF-κBp65、ICAM-1、TIMP-1表达水平结果原发性高血压病组与健康组相比ROCKⅡ、NF-κBp65、ICAM-1、TIMP-1表达水平均有不同程度升高,（ROCKⅡ:49.37± 14.15 pg/ml VS 28.89±8.84 pg/mlP<0.01;NF-κBp65:7.09 ±2.61 ng/ml VS 4.17±1.96 ng/ml P<0.01;ICAM-1:88532.95± 22776.57 pg/ml VS 66817.03±18024.96 pg/ml P<0.01;TIMP-1:43618.20± 17915.00 ng/ml VS 29830.20±12097.90 ng/ml P<0.01）,差异均具有统计学意义。2.原发性高血压病患者外周血单核细胞RhoAmRNA、ROCKⅡmRNA表达水平结果与健康对照组相比,原发性高血压病组RhoAmRNA、ROCKⅡmRNA上调,（RhoAmRNA:1.96± 1.06 VS 1.26±0.51 P<0.01;ROCKⅡmRNA:2.63± 1.44 VS 1.43 ±0.57P<0.01）差异具有统计学意义。3.原发性高血压病患者 ROCKⅡ、NF-κBp65、ICAM-1、TIMP-1 和 RhoAmRNA、ROCKⅡmRNA Spearman 相关性检验Spearman相关性分析结果显示:原发性高血压病与ROCKⅡ、NF-κBp65、ICAM-1、TIMP-1 和 RhoAmRNA、ROCKⅡmRNA 呈正相关。4.原发性高血压病患者 ROCKⅡ、NF-κBp65、ICAM-1、TIMP-1 和 RhoAmRNA、ROCKⅡmRNA的二元回归分析,ROC曲线预测效力分析。将原发性高血压病组和健康组与RhoAmRNA、ROCKⅡmRNA、ROCKⅡ、NF-κBp65、ICAM-I、TIMP-1 进行二元 Logistic 回归分析,结果显示:ROCKⅡ（P<0.01）、ICAM-1（P<0.01）与原发性高血压病密切相关。对上述2个指标绘制与疾病相关的ROC曲线,计算曲线下面积评估参数预测效力。结果显示,上述指标对原发性高血压病具有一定的预测价值。曲线下面积分别为 ROCKⅡ:0.887（95%CI 0.823-0.95 P<0.01）;ICAM-1:0.777（95%CI 0.684-0.87P<0.01）。根据最佳cutoff值,计算灵敏度和特异性,结果提示上述指标对原发性高血压病具有较好的预测价值。5.原发性高血压病痰湿壅盛证患者ROCKⅡ、NF-κBp65、ICAM-1、TIMP-1表达水平结果原发性高血压病痰湿壅盛证组与非痰湿壅盛证组相比ROCKⅡ、NF-κBp65、TIMP-1表达水平均有不同程度升高,（ROCKⅡ:51.76±13.19 pg/ml VS 43.55±14.89 pg/mlP<0.01;NF-κBp65:7.41± 2.70 ng/ml VS 6.33± 2.25 ng/ml P<0.05;TIMP-1:45752.95 ±18707.10 ng/ml VS 38433.80±14820.83 ng/ml P<0.05）,差异均具有统计学意义。ICAM-1表达水平未见明显差异。（ICAM-1:89052.23±21008.70 pg/ml VS 87271.82± 26887.91 pg/mlP>0.05）差异无统计学意义。6.原发性高血压病痰湿壅盛证患者外周血单核细胞RhoAmRNA、ROCKⅡmRNA表达水平结果原发性高血压病痰湿壅盛证组与非痰湿壅盛证组相比RhoAmRNA、ROCKⅡmRNA上调,（RhoAmRNA:2.08± 1.17 VS 1.67± 0.66 P<0.05;ROCKⅡmRNA:2.82±1.58 VS 2.16±0.88 P<0.01）差异具有统计学意义。7.原发性高血压病痰湿壅盛证患者ROCKⅡ、NF-κBp65、ICAM-1、TIMP-1 RhoAmRNA、ROCKⅡmRNA Spearman 相关性检验。Spearman相关性分析结果显示:原发性高血压病痰湿壅盛证与ROCKⅡ、NF-κBp65和 ROCKⅡmRNA 呈正相关（P<0.05）。8.原发性高血压病痰湿壅盛证患者ROCKⅡ、NF-κBp65和ROCKⅡmRNA的二元回归分析,ROC曲线预测效力分析。将原发性高血压病痰湿壅盛证组与非痰湿壅盛证组与ROCKⅡmRNA、ROCKⅡ、NF-κBp65进行二元Logistic回归分析,结果显示:ROCKI（P<0.05）与原发性高血压病痰湿壅盛证密切相关。对ROCKⅡ绘制与原发性高血压病痰湿壅盛证相关的ROC曲线,计算曲线下面积评估参数预测效力。结果显示,曲线下面积为ROCKⅡ:0.677（95%CI 0.563-0.791 P<0.01）。根据最佳cutoff值,计算灵敏度和特异性,结果提示ROCKⅡ对原发性高血压病痰湿壅盛证的具有一定的预测价值。结论:1、原发性高血压病病变程度与 RhoAmRNA、ROCKⅡmRNA、ROCKⅡ、NF-κBp65、TIMP-1、ICAM-1变化幅度均呈正相关。并与ROCKⅡ、ICAM-1密切相关。2、原发性高血压病痰湿壅盛证病变程度与ROCKⅡ、NF-κBp65和ROCKⅡmRNA呈正相关,并与ROCKⅡ密切相关。
马子华[3]（2020）在《氧化苦参碱干预砷致肝纤维化中细胞自噬的研究》文中认为目的:探讨氧化苦参碱（OM）干预砷（As）致肝纤维化过程中细胞自噬的作用。方法:1.体内实验:SD大鼠,随机分为对照组、染砷组、低剂量OM干预组、高剂量OM干预组,每组8只。染砷组、低剂量OM干预组、高剂量OM干预组大鼠给予5 mg/kg的亚砷酸钠水溶液对灌胃,一周连续染毒6天,间隙一天,染砷20周;然后低剂量OM干预组和高剂量OM干预组的动物分别给予8周氧化苦参碱（剂量分别为25mg/kg、50mg/kg）灌胃干预治疗;实验结束后杀鼠,取血及肝脏;全自动生化分析仪检测大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶（AST）,丙氨酸氨基转移酶（ALT）的含量;HE染色观察大鼠肝组织;Western Blot检测大鼠肝脏组织自噬相关蛋白自噬相关基因12（ATG12）、自噬相关基因5（ATG5）、促进微管相关蛋白质1轻链3（LC3Ⅱ）表达水平。2.体外实验:本实验使用100μmol/L亚砷酸钠染毒人胎肝细胞株LO2 24h,检测AST、ALT水平,待出现明显肝细胞损伤,收取培养上清。将染砷LO2培养上清与正常培养液按照1:4比例混合后培养人肝星状细胞株LX2 24 h后,采用低（0.25mg/ml）、高（1mg/ml）剂量氧化苦参碱加入培养体系,共干预24h;全自动生化分析仪检测染砷LO2培养上清中AST、ALT的含量;MTT检测LX2细胞增殖率;Western Blot检测LX2活化标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,自噬相关蛋白ATG12、ATG5、LC3Ⅱ,内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、磷酸化蛋白激酶样内质网激酶（p-PERK）、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）表达水平;流式细胞仪检测LX2细胞凋亡率、细胞周期;油红O染色观察LX2细胞内脂滴。结果:1.体内实验:（1）染砷组大鼠血清AST、ALT含量较对照组显着上调（P<0.05）,HE染色可见大鼠肝脏肝小叶结构异常,可见大量肝细胞空泡样变,散在炎性细胞浸润,肝小叶间可见纤维组织增生。经低、高剂量氧化苦参碱干预后,血清AST、ALT含量显着下调（P<0.05）,病理切片观察到炎性细胞浸润以及纤维增生减少。（2）染砷大鼠较对照组ATG12、ATG5、LC3Ⅱ表达水平显着上调（P<0.05）,低、高剂量OM干预染砷的肝纤维化大鼠后,ATG12、ATG5、LC3Ⅱ表达水平显着下调（P<0.05）。2.体外实验:（1）100μmol/L Na As O2毒染LO2细胞24h后,培养上清中ALT、AST水平显着高于对照组（P<0.05）,将其与正常培养液混合后培养LX2细胞,细胞增殖率和α-SMA表达均显着上调（P<0.05）,细胞内脂滴减少,G1期细胞比例显着降低（P<0.01）。（2）间接染砷LX2细胞较对照组GRP78、p-PERK、CHOP、ATG12、ATG5、LC3Ⅱ表达水平显着上调（P<0.05）。（3）氧化苦参碱可以抑制间接染砷LX2增殖（P<0.05）,低、高剂量氧化苦参碱干预间接染砷LX2细胞,α-SMA、GRP78、p-PERK、CHOP、ATG12、ATG5、LC3Ⅱ表达水平显着下调（P<0.05）,细胞内脂滴增加,发生G1期细胞阻滞。结论:1.氧化苦参碱干预可以改善染砷诱导的大鼠肝纤维化,其机制与细胞自噬有关。2.染砷致肝纤维化与染砷后肝细胞损伤致肝星状细胞活化有关,细胞自噬和内质网应激PERK-e IF2α信号通路活化参与了染砷间接活化肝星状细胞这一过程。3.氧化苦参碱干预此过程可能与细胞自噬调脂滴代谢和细胞周期有关。
姑丽巴哈尔·艾木都拉[4]（2020）在《睡莲花总黄酮及其成分对HSC细胞增殖活化的影响及其机制研究》文中研究表明目的:研究睡莲花总黄酮（NCE）及其成分烟花苷（NCE-1）和睡莲酚（NCE-2）对H2O2致正常肝细胞（LO2）损伤的保护作用及其对肝星状细胞（HSC）增殖、活化的影响,并进一步探讨其对TGF-β1诱导的HSC细胞增殖活化的影响及机制。方法:1)通过MTT法检测NCE及其成分NCE-1和NCE-2对LO2细胞分别作用24、48和72 h后的毒性。0.6 mmol·L-1H2O2处理LO2细胞4 h构建H2O2损伤LO2细胞模型。用含不同浓度样品的培养液干预损伤肝细胞并通过MTT法测定细胞活力,检测细胞上清液AST、ALT、MDA、SOD和NO水平,评价NCE、NCE-1和NCE-2对肝细胞损伤的保护作用。2)通过MTT法检测NCE（终浓度分别为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μg/m L）、NCE-1（终浓度分别为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μg/m L）和NCE-2（终浓度分别为2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0、128.0μg/m L）对HSC细胞增殖的影响,计算半数抑制率(IC50);生化法检测细胞上清液LDH、Hyp含量;ELISA法检测细胞上清液Ⅰ-Col、?-SMA水平;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期的变化。3)通过MTT法检测NCE、NCE-1和NCE-2对TGF-β1诱导HSC细胞增殖的影响;ELISA法检测Ⅰ-Col、?-SMA含量及Smad2、Smad3、Smad7蛋白的表达水平;流式细胞仪测定其对TGF-β1刺激HSC后细胞凋亡和周期的影响。结果:1)给药24、48和72 h后,NCE、NCE-1和NCE-2分别在6.25～12.50μg/m L、6.25～100.00μg/m L、6.25～25.00μg/m L的浓度范围内对正常人肝细胞（LO2）无毒性作用,细胞的存活率达到90%以上,且在该范围内可显着抑制H2O2对LO2细胞造成的损伤,细胞活力得到了明显提高（P<0.05）,并能显着降低H2O2致急性损伤肝细胞的ALT、AST、MDA和NO水平,提高SOD活力,差异有统计学意义（P<0.05）。2)MTT实验结果表明,NCE、NCE-1和NCE-2可显着抑制HSC细胞的增殖,且呈明显的量效关系;不同剂量的NCE（3.125、6.25、12.50μg/m L）、NCE-1（12.5.00、25.00、50.00、100.00μg/m L）和NCE-2（5.00、10.00、20.00μg/m L）对细胞分泌Hyp具有显着的抑制作用（P<0.05）;对HSC细胞内Col-1、α-SMA的表达具有显着的抑制作用（P<0.01）。高剂量的NCE-1（100.00μg/m L）还对HSC细胞的凋亡具有较为显着的诱导作用（P<0.05）。3)实验结果表明,NCE（3.125、6.25、12.50μg/m L）、NCE-1（12.5.00、25.00、50.00、100.00μg/m L）和NCE-2（5.00、10.00、20.00μg/m L）可显着抑制TGF-β1诱导HSC的增殖,且呈明显的量效关系（P<0.01）;NCE、NCE-1和NCE-2对TGF-β1诱导HSC细胞的Col-1、α-SMA、Smad2及Smad3的蛋白表达也具有显着的抑制作用,能上调smad7的蛋白表达（P<0.01）。结论:睡莲花总黄酮及其成分烟花苷和睡莲酚体外给药对氧化应激致肝细胞损伤有保护作用;并可抑制HSC的活化增殖及TGF-β1诱导HSC的增殖,对肝纤维化有潜在的防治作用,其机制可能与促进细胞凋亡、抑制细胞外基质合成及干预TGF-β1/Smad信号通路有关;同时也揭示了烟花苷和睡莲酚是睡莲花总黄酮发挥抗肝纤维化药效的物质基础。
杨华蕊[5]（2019）在《基于酶解技术制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分》文中进行了进一步梳理目的:课题组前期研究已获得美洲大蠊抗肝纤维化活性部位的提取纯化工艺,但提取率较低。本课题以美洲大蠊粗提物为原料,采用酶解技术拟制备高得率、高活性的美洲大蠊抗肝纤维化活性组分,为美洲大蠊抗肝纤维化的后续研究奠定基础。方法:1.蛋白酶的筛选采用福林酚法和BCA法测定美洲大蠊粗提物中的蛋白质含量。以美洲大蠊粗提物的水解度、各洗脱组分得率和对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）抑制率为评价指标,同时以原工艺作为对照,评价胰蛋白酶（Trypsin,TR）,胃蛋白酶（Pepsin,PE）,碱性蛋白酶（Alkaline,AL）,木瓜蛋白酶（Papain,PA）,中性蛋白酶（Neutral Protease,NE）对美洲大蠊粗提物的酶解效果。采用N-三（羟甲基）甲基甘氨酸-十二烷基硫酸铵-聚丙烯酰胺凝胶电泳（Tricine-SDS-PAGE）检测不同蛋白酶酶解前后美洲大蠊粗提物分子量变化。2.中性蛋白酶和木瓜蛋白酶制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分的工艺优化以水解度、活性组分得率和体外活性为评价指标,在单因素考察（酶用量、酶解时间、pH值、酶解温度、底物浓度）的基础上,采用L9（34）正交实验优化中性蛋白酶和木瓜蛋白酶制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分的工艺。结果:1.蛋白酶的筛选美洲大蠊粗提物中蛋白质含量在45%以上,适于用酶解方法制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分。不同蛋白酶对美洲大蠊粗提物的水解度为:NE>PA>AL>TR>PE。以D组分的得率为评价指标,结果显示:PA>NE>AL>原工艺>PE>TR,PA、NE、AL酶解所得D组分的得率,与原工艺相比分别提高了30.36%、16.07%、14.29%。与原工艺相比,不同蛋白酶酶解后所得A、B、C组分对HSC-T6抑制作用无明显提高,但经TR、AL、NE、PA酶解得到的D组分（活性组分）在24,48,72h对HSC-T6细胞抑制的IC50值相对较小。不同蛋白酶酶解美洲大蠊粗提物前后分子量变化结果显示:美洲大蠊粗提物的分子量主要分布在16-45KDa之间,经不同蛋白酶酶解后,分子量降低。2.中性蛋白酶制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分的工艺优化结果表明:水解度与活性组分得率相关性较差,因此主要根据活性组分得率和体外活性确定最佳酶解条件。单因素实验和正交实验结果表明,各因素对活性组分得率影响为:酶用量>酶解pH值>酶解温度>酶解时间,对其体外活性影响为:酶用量>酶解pH值>酶解时间>酶解温度。确定中性蛋白酶最佳酶解工艺为:酶用量0.3%,酶解时间2h,pH值8.5,酶解温度45℃,底物密度1.07。对此工艺进行验证,得美洲大蠊粗提物水解度为15.8%;活性组分得率均值为0.72%,RSD为2.8%;相比原工艺（0.54%）,活性组分提高率为33.33%。原工艺所得活性组分24,48,72 h的IC50值为122.10μg·mL-1,122.1μg·mL-1,109.81μg·mL-1;验证所得活性组分24,48,72 h的IC50值在116.02-122.77μg·mL-1,111.75-117.57μg·mL-1,99.62-113.91μg·mL-1之间;相比原工艺,IC50有所降低,且具有显着性差异（P<0.05）。3.木瓜蛋白酶制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分工艺优化单因素实验和正交实验优化木瓜蛋白酶制备活性组分的酶解工艺为:酶用量0.6%,酶解pH值7.0,酶解时间1 h,酶解温度55℃。对此工艺进行验证,美洲大蠊粗提物水解度为11.49%;活性组分得率均值为0.70%,RSD为2.2%;相比原工艺（0.53%）,活性组分提高率为32.16%。原工艺所得活性组分24,48,72 h的IC50值为123.66μg·mL-1,113.46μg·mL-1,108.11μg·mL-1;验证所得活性组分24,48,72 h的IC50值在114.41-118.54μg·mL-1,104.46-114.29μg·mL-1,105.85-107.05μg·mL-1之间;相比原工艺,体外活性无显着性差异（P>0.05）。结论:以水解度、活性组分得率及体外活性为评价指标,筛选出制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分的最佳蛋白酶,并得到中性蛋白酶和木瓜蛋白酶制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分的最佳工艺。综合考虑成本问题,中性蛋白酶较木瓜蛋白酶制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分更佳。
刘鸣昊[6]（2013）在《芪珠方对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号传导通路的影响》文中进行了进一步梳理背景肝纤维化是多种慢性肝病发展至肝硬化的必经阶段。研究证实肝纤维化是可逆的,但如果不加以治疗,肝纤维化可能会转变为肝硬化。晚期肝硬化病人3年的存活率仅仅为16%,全世界直接死于肝硬化的人数位居人类总死亡数的第6位。肝纤维化的形成原因是由于肝脏受到损害与炎症反应后,肝组织内细胞外基质（ECM）过度增生与异常沉积,导致肝脏内胶原组织的增多,使肝脏结构和肝功能产生异常病变。转化生长因子-β1是肝纤维化的重要靶点,它可以激活肝星状细胞、调节细胞外基质合成和降解导致肝纤维化发生,TGF-β1促纤维化作用主要是通过TGF-β1/Smad信号转导通路来实现的。西医对肝纤维化的治疗多为阻断肝纤维化诱因的针对治疗,临床上尚无理想的、公认的抗纤维化特效药物。中医药在治疗肝纤维化方面具有多成分、多环节、多靶点的优势,并已经取得了较好的疗效,拥有广阔的开发和应用前景。芪珠方有清热解毒、益气活血等功效,前期研究表明芪珠方在慢性乙型肝炎的治疗和临床研究中有一定的保肝降酶、抗纤维化作用；对急慢性肝损伤和肝纤维化模型大鼠有一定的保护作用。本研究拟运用分子生物学和细胞学技术,观察芪珠方对CC14肝纤维化模型大鼠肝组织TGF-β1/Smad信号通路相关因子及TIMPs/MMPs, ILs等细胞因子的影响,部分阐明抗肝纤维化机制；利用HPLC法检测芪珠方中的有效成分；检测芪珠方有效成分对外源性TGF-β1刺激后的HSC-T6细胞增殖抑制、细胞凋亡、细胞周期以及TGF-β1/Smad信号传导通路的影响,进一步探明芪珠方抗肝纤维化的作用机制。方法1.体内实验SD大鼠70只,随机分为空白组、模型组、芪珠方水提大、中剂量组、芪珠方醇提大、中剂量组,秋水仙碱组,组间大鼠体重差异无显着性。除正常组外,其余各组大鼠皮下注射40%四氯化碳（cC14）橄榄油造模,首次5mL每100g体重,以后每次3mL每100g体重,每周3次,共8周。于造模开始次日给药,芪珠方高、低剂量组16.2,9.72g每100g体重,秋水仙碱组0.5mg每100g体重灌胃,每日1次,连续8周。空白组不做任何处理,模型组大鼠给予同大剂量组灌胃剂量生理盐水灌胃。造模结束后所有大鼠处死,肝脏组织学观察,测定肝脾指数,酶联免疫吸附试验（ELISA）技术检测TNF-a、IL-4、IL-8、IL-10、TIMP-1、MMP-1、MMP-2、MMP-13在各组大鼠肝组织内的表达,TIMP-1、MMP-1、 MMP-2、MMP-13在各组大鼠血清内表达。蛋白免疫印迹法（Western blott）检测Smad2、 Smad3、Smad4、Smad7、TGF-β1蛋白表达：实时荧光定量Real-time PCR)检测Smad2、 Smad3、Smad4、Smad7、TGF-β1基因表达。2.芪珠方HPLC实验采用高效液相色谱法,色谱条件为Agilent C18柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相：A为乙腈,B为水溶液,梯度洗脱,流速0.8mL/min,柱温30℃,检测波长230nm,检测芪珠方与含药血清中有效成分,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（A版）进行相似度评价。3.体外实验HSC-T6细胞,DMEM培养基+10%FBS培养（37℃,5%C02）,青链霉素作为双抗,0.25%胰蛋白酶消化,细胞生长至75%传代。分组：空白组、叶下珠次素组、虎杖苷组、芍药苷组、黄芪甲苷组,取对数生长期的HSC-T6细胞,每组设6个复孔,加入浓度为5ng/mL外源性TGF-β1作为模型组,空白组与模型组分别加入叶下珠次素、虎杖苷、芍药苷、黄芪甲苷,观察12h、24h、48h。检测各组HSC-T6细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组24h细胞周期变化：蛋白免疫印迹法（western blot）检测Bcl-2、Bax、CyclinD1、Smad2、Smad3、 Smad4、Smad7、TGF-pβ,24h蛋白表达；实时荧光定量（real-time PCR）检测Bcl-2、Bax、 CyclinD1、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7、TGF-β1,24h基因表达。所有结果以均数±标准误差形式,利用SPSS18.0软件进行统计学分析,组间比较使用t检验或方差分析（ANOVA）,当p<0.05时,认为处理组和对照组间有统计学差异。结果第一部分体内实验1.与正常组相比,模型组大鼠体质量下降（P<0.01）,肝、脾指数上升（P<0.01）；模型组与治疗组相比,各治疗组大鼠体重有增加,大剂量组有显着改变（P<0.01）：脾脏指数降低（P<0.05）；大鼠肝脏大体标本肉眼观察,各治疗组外观接近正常对照组；模型组HE切片可见肝细胞肿胀,广泛气球样变与大量纤维增生,芪珠方组HE切片大鼠肝组织炎性病变程度减轻,肝细胞变性或坏死减少,纤维组织增生减少或逆转。提示肝纤维化模型复制建立成功,芪珠方对肝纤维化有一定的预防作用。2.相比空白组,模型组大鼠肝组织内IL4、IL8、TNF-a、TIMP-1、MMP-2表达上调,IL10、MMP-1、MMP-13表达下调（P<0.01）；芪珠方能降低肝纤维化大鼠肝组织BL4, IL-8, TNF-a的表达,提高IL-10的表达（P<0.01）；同时能降低肝组织TIMP-1、MMP-2的表达,提高MMP-1、MMP-13的表达（P<0.01）,血清内的TIMPs/MMPs的表达与肝组织表达一致（P<0.01）。3.相比空白组,模型组大鼠肝组织内TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4蛋白和mRNA表达上调,Smad7蛋白和mRNA表达下调（P<0.05）；芪珠方干预后,芪珠方治疗组大鼠肝组织内TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4蛋白和mRNA表达不同程度下调（P<0.05）,Smad7蛋白和mRNA表达不同程度上调（P<0.05）。第二部分芪珠方的HPLC检测HPLC结果显示芍药苷、虎杖苷、叶下珠次素是芪珠方中的主要成分；芪珠方醇提法比水提法能更有效的提取方中药材的有效成分。第三部分体外实验1.叶下珠次素、虎杖苷各剂量组以及芍药苷、黄芪甲苷中剂量组在12h、24h、48h3个时间段对HSC-T6细胞分别有一定的增殖抑制作用,在24h时间段抑制作用最为明显和稳定。2.叶下珠次素、虎杖苷、黄芪甲苷组能上调空白组HSC-T6细胞与模型组HSC-T6细胞BaxmRNA和蛋白表达（P<0.05）,下调Bcl-2mRNA和蛋白表达（P<0.05）,芍药苷能上调空白组HSC-T6细胞与模型组HSC-T6细胞BaxmRNA和蛋白表达（P<0.05）,下调Bcl-2蛋白表达（P<0.05）。3.叶下珠次素有通过下调模型组HSC-T6细胞周期相关因子CyclinD1蛋白和mRNA表达,该组HSC-T6细胞与模型组相比停留在G1期的数量更多（P<0.05）。4.相比空白组,模型组HSC-T6细胞内源性TGF-β1、Smad2,Smad3的蛋白和mRNA表达高于空白组（P<0.05）, Smad7的表达低于空白组（P<0.05）；叶下珠次素可以下调模型组HSC-T6细胞Smad2蛋白表达、Smad3mRNA表达,上调Smad7蛋白与mRNA表达,下调内源性TGF-β1mRNA与蛋白的表达（P<0.05）；虎杖苷可以下调Smad2mRNA与蛋白的表达,下调TGF-β1mRNA与蛋白的表达（P<0.05）；芍药苷可以下调Smad2,Smad3蛋白表达,下调Smad3mRNA表达,上调Smad7蛋白与mRNA表达,下调TGF-β1mRNA与蛋白的表达（P<0.05）；黄芪甲苷可以上调Smad7蛋白与mRNA表达,下调TGF-β1蛋白的表达（P<0.05）。结论1.芪珠方能提高肝纤维化模型大鼠体重,减轻肝脏肿大及肝脾湿重,改善肝组织内的纤维化程度,提示芪珠方有保护肝纤维化大鼠和抗肝纤维化作用。2.芪珠方能降低肝纤维化大鼠肝组织IL4、IL-8、TNF-a、TIMP-1、MMP-2的表达,提高IL-10、MMP-1、MMP-13的表达,提示芪珠方抗肝纤维化的作用与调节TIMPs/MMPs,ILs和TNF-a,从而减少细胞外基质的分泌,平衡肝内胶原的分泌与降解有关。3.芪珠方能通过下调肝纤维化大鼠肝组织内Smad2、Smad3、Smad4mRNA和蛋白的表达,上调Smad7mRNA和蛋白的表达,芪珠方能调节TGF-β1/Smad信号传导通路,从而抑制TGF-β1mRNA和蛋白的表达、抑制肝星状细胞的激活,减少细胞外基质的分泌,降低肝纤维化程度。4.叶下珠次素、虎杖苷、芍药苷是芪珠方的有效成分,醇提法在提取上述单体的效果好于水提法,提示芪珠方醇提物调节TIMPs/MMPs、TGF-β1/Smad信号传导通路的作用优于水提物与可以更有效的提取中药中的有效成分有关。5.叶下珠次素、虎杖苷各剂量组以及芍药苷、黄芪甲苷中剂量组在12h、24h、48h三个时间段对HSC-T6细胞和外源性TGF-β1刺激模型组HSC-T6细胞有一定的增殖抑制作用,提示芪珠方的抗肝纤维化作用与其有效成分可以抑制肝星状细胞增殖有关。6.叶下珠次素、芍药苷、黄芪甲苷、虎杖苷均能调节Bcl-2和Bax的表达从而促进HSC-T6细胞,其抑制HSC-T6细胞增殖作用可能是通过上调Bax和下调Bc1-2表达,促进HSC-T6细胞凋亡而形成的,芪珠方抗肝纤维化的作用可能与其有效成分能促进肝星状细胞凋亡有关。7.叶下珠次素有通过下调CyclinD1mRNA与蛋白表达,从而调控细胞周期,使HSC-T6细胞停留在G1期,叶下珠次素抑制HSC-T6细胞增殖作用可能与能调控HSC-T6细胞周期有关。8.芪珠方抗肝纤维化的作用与芪珠方中的有效成分叶下珠次素、虎杖苷、芍药苷、黄芪甲苷可以分别调控、共同作用于TGF-β1/Smad信号传导通路,抑制TGF-β1表达,从而抑制肝星状细胞的激活,减少肝组织内ECM沉积有关。
林淑仪[7]（2011）在《苦参碱、川芎嗪抑制低氧培养后白血病细胞侵袭转移作用的实验研究》文中进行了进一步梳理背景:白血病（Leukemia）是造血系统最常见的恶性肿瘤,也是儿童最常见的恶性肿瘤之一。近年来随着化疗方案的不断改善,儿童白血病的治疗效果有了令人鼓舞的提高,但临床上仍有相当一部分患儿由于白血病的髓外侵润而导致其复发和治疗失败[1]。因此,研究髓外白血病的发生机制,寻找有效预防和治疗白血病髓外侵润的化疗辅助药物有着重要的意义。目前,多项研究表明我国的传统中药苦参碱（Matrine）和川芎嗪（Ligustrazine）在抗肿瘤方面有其独特的作用[2-5]。我们的前期研究结果也表明了苦参碱和川芎嗪能够有效抑制白血病细胞的增殖、侵袭转移能力以及下调MMPs（Matrix metalloproteinase）的表达[6-8],但其机制尚不清楚。另外,研究表明缺氧是恶性肿瘤微环境的基本特征之一,而缺氧诱导因子-1α（Hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α）是受低氧直接调控的主要核转录因子之一。在实体肿瘤中HIF-1α可通过调控VEGF（Vascular endothelial growth factor）、MMPs等靶基因的转录,促进新生血管的形成及胞外基质的降解来实现肿瘤发生侵袭转移[9,10]。白血病为造血系统恶性肿瘤,白血病细胞内也可能存在缺氧而促使白血病细胞向周围及远处侵袭转移。本课题组的前期研究证实适度低氧（3%、5%O2）可增强白血病细胞侵袭转移的能力,同时上调HIF1-α、VEGF、MMPs的表达[11,12]。有关苦参碱和川芎嗪抑制白血病细胞侵袭转移作用是否通过下调HIF1-α表达,从而下调VEGF、MMPs的表达有关,目前国内外尚未见报道。目的:研究不同浓度苦参碱或川芎嗪对低氧（3%O2）培养后白血病细胞株人B淋巴细胞白血病细胞株Raji细胞和人慢性髓系白血病细胞株K562细胞侵袭转移的抑制作用及机制。方法:体外常规培养白血病细胞株Raji细胞和K562细胞,在细胞生长状态良好情况下用低氧（3%O2）继续培养细胞24小时后,分别经0g/L、0.15g/L、0.20g/L、0.25g/L苦参碱或0g/L、0.10g/L、0.15g/L、0.20g/L川芎嗪处理细胞,通过细胞粘附实验、细胞迁移实验和肿瘤细胞体外侵袭实验,检测细胞粘附、运动和侵袭能力,并采用RT-PCR检测HIF-1α、VEGF mRNA的表达。计量资料的多组比较采用方差分析。结果:1.常氧对照组Raji细胞和K562细胞的粘附率、迁移率、侵袭率均为100%;2.低氧（3%O2）培养但不加药物的处理组1,Raji细胞粘附率、迁移率和侵袭率分别为（172.216±13.44）%、（164.47±4.73）%、（142.817±2.665）%,K562细胞粘附率、迁移率和侵袭率分别为（182.49±8.33）%、（192.31±2.77）%、（139.607±7.039）%;3. 0.15g/L、0.20g/L、0.25g/L苦参碱作用于低氧（3%O2）培养后Raji细胞的粘附率分别为（160.774±11.03）%、（143.877±7.813）%、（127.419±2.581）%;迁移率分别为（146.68±5.30）%、（132.11±1.50）%、（ 117.21±5.49 ） % ;侵袭率分别为（ 122.533±2.520 ） %、（109.203±6.576）%、（94.636±2.000）%;4. 0.15g/L、0.20g/L、0.25g/L苦参碱作用于低氧（3%O2）培养后K562细胞的粘附率分别为（172.3±3.60）%、（139.8±10.4）%、（133.9±4.8）%;迁移率分别为（189.14±3.39）%、（171.64±3.63）%、（145.59±4.46）%;侵袭率分别为（121.164±7.876）%、（83.539±15.741）%、（63.630±7.331）%;5. 0.10g/L、0.15g/L、0.20g/L川芎嗪作用于低氧（3%O2）培养后Raji细胞的粘附率分别为（154.56±9.75）%、（138.50±9.76）%、（128.63±10.88）%;迁移率分别为（150.80±1.90）%、（137.15±3.54）%、（ 124.66±4.57 ） % ;侵袭率分别为（ 116.549±10.071 ） %、（106.06±5.017）%、（95.964±6.398）%;6. 0.10g/L、0.15g/L、0.20g/L川芎嗪作用于低氧（3%O2）培养后K562细胞的粘附率分别为（175.13±7.85）%、（139.74±14.76）%、（117.63±6.87）%;迁移率分别为（150.80±1.90）%、（137.15±3.54）%、（ 124.66±4.57 ） % ;侵袭率分别为（ 127.180±13.846 ） %、（104.650±6.999）%、（79.813±11.337）%;7.常氧培养对照组,低氧培养不加药物的处理组1,低氧培养后分别加入0.15g/L、0.20g/L、0.25g/L苦参碱处理的处理组2、3、4,Raji细胞HIF-1αmRNA经RT-PCR检测吸光度值分别为0.70±0.06、2.41±0.01、1.99±0.07、1.61±0.09、1.27±0.08,VEGF mRNA吸光度值分别为0.02±0.00、0.47±0.00、0.24±0.08、0.16±0.03、0.09±0.07;K562细胞HIF-1αmRNA经RT-PCR检测吸光度值分别为0.36±0.09、3.32±0.02、3.27±0.05、2.51±0.04、1.23±0.01,VEGF mRNA吸光度值分别为0.05±0.02、0.34±0.00、0.32±0.08、0.22±0.08、0.15±0.06;8.常氧培养对照组,低氧培养不加药物的处理组1,低氧培养后分别加入0.10g/L、0.15g/L、0.20g/L川芎嗪处理的处理组2、3、4,Raji细胞HIF-1αmRNA经RT-PCR检测吸光度值分别为0.01±0.00、1.52±0.00、1.28±0.01、0.90±0.09、0.57±0.01,VEGF mRNA吸光度值分别为0.02±0.00、0.51±0.00、0.24±0.04、0.14±0.02、0.09±0.02;K562细胞HIF-1αmRNA经RT-PCR检测吸光度值分别为0.32±0.03、2.51±0.09、1.57±0.08、1.17±0.00、0.79±0.02,VEGF mRNA吸光度值分别为0.01±0.00、0.98±0.09、0.57±0.07、0.23±0.02、0.08±0.00。结论:1.低氧（3%O2）可显着增强白血病细胞株Raji细胞和K562细胞的粘附、运动和侵袭能力（P<0.01）;2. 0.15g/L、0.20g/L、0.25g/L苦参碱可有效抑制低氧（3%O2）培养后Raji细胞的粘附、运动及侵袭能力（P<0.05或P<0.01）,其抑制作用呈剂量依赖性;3. 0.20g/L、0.25g/L苦参碱可有效抑制低氧（3%O2）培养后K562细胞的粘附、运动及侵袭能力（P<0.05或P<0.01）,其抑制作用呈剂量依赖性;4. 0.10g/L、0.15g/L、0.20g/L川芎嗪可有效抑制低氧（3%O2）条件后Raji细胞的粘附、运动及侵袭能力（P<0.01）,其抑制作用呈剂量依赖性;5. 0.10g/L、0.15g/L、0.20g/L川芎嗪可有效抑制低氧（3%O2）条件培养后K562细胞的粘附、运动及侵袭能力（P<0.05或P<0.01）,其抑制作用呈剂量依赖性;6. 0.20g/L、0.25g/L苦参碱可有效抑制低氧（3%O2）培养后Raji细胞HIF-1α、VEGF mRNA的表达（P<0.01）,0.15g/L、0.20g/L、0.25g/L苦参碱可有效抑制K562细胞的HIF-1α、VEGF mRNA的表达（P<0.01）;7. 0.10g/L、0.15g/L、0.20g/L川芎嗪可有效抑制低氧（3%O2）培养后Raji细胞和K562细胞的HIF-1α、VEGF mRNA的表达（P<0.05或P<0.01）。
陈兆霓[8]（2010）在《六月青皂苷抗肝纤维化作用及其分子机制的实验研究》文中提出目的:建立六月青中六月青皂苷含量的测定方法,并提取六月青皂苷。方法:采用60%乙醇提取、石油醚去除脂溶性成分、水饱和正丁醇萃取法提取六月青皂苷。以人参皂苷Re为标准品,香草醛-冰醋酸-高氯酸法测定六月青皂苷的含量。结果:精密度和稳定性RSD值分别为1.35%和1.25%,;平均加样回收率为100.42%;六月青皂苷的平均得率为4.57%,纯度为46.06%。结论:此法简便、准确,精密度、稳定性好,可用于六月青皂苷的测定。六月青皂苷的得率和纯度良好。目的:研究六月青皂苷（LYQS）对四氯化碳（Carbon tetra-Chloride,CCl4）所致大鼠肝纤维化的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:Wistar大鼠随机分成两组,模型组大鼠采用50%CCl4花生油溶液灌胃造模,共七周,正常组用生理盐水代替。将病理检查确认肝纤维化形成的Wistar大鼠50只,随机分成5组,分别给予相应药物进行干预,每日1次,连续4周。末次给药24小时后处死大鼠。（1）采集血清及肝组织,检测大鼠血清中ALT、AST,肝组织中Hyp、SOD、MDA和GSH-PX的含量。（2）于肝左叶同一部位取肝组织约1×1×l cm3大小,固定于10%中性福尔马林溶液,做光镜观察。（3）以RT-PCR法检测肝组织中Col-I、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2、TGF-β1 mRNA的表达。结果:（1）与模型组比较,各剂量的六月青皂苷及阳性药能显着降低大鼠血清中CCl4所致异常升高的ALT（P<0.01）;高、中剂量六月青皂苷及阳性药可降低大鼠血清中CCl4所致异常升高的AST（P<0.01）;同时,各剂量的六月青皂苷能显着提高肝组织中异常降低的SOD、GSH-PX含量（P<0.05或P<0.01）,并显着降低异常升高的Hyp、MDA含量（P<0.05或P<0.01）。（2）HE染色病理结果显示,与模型组比较,六月青皂苷高、中剂量及阳性组大鼠肝脏纤维化程度明显减轻（P<0.05或P<0.01）。（3）阳性药及LYQS各剂量组均可不同程度地下调Col-I、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达,阳性药及六月青高、中剂量组可显着下调TGF-β1 mRNA的表达,并可上调MMP-2 mRNA的表达（P<0.05或P<0.01）。结论:六月青皂苷对大鼠化学性肝损伤具有一定程度的治疗作用,其机制可能与其清除自由基,抑制脂质过氧化,同时抑制胶原合成与沉积,减少细胞外基质（ECM）的沉积和促进ECM的降解,有一定的关系。目的研究六月青皂苷对HSC-T6增殖、毒性和抑制纤维合成的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞（HSC-T6）,MTT法检测六月青皂苷对HSC-T6的抑制作用。以大于90%存活率的3种浓度的六月青皂苷对HSC-T6进行干预,乳酸脱氢酶法检测六月青对HSC-T6的毒性,羟脯氨酸（Hyp）测试盒测定细胞上清液中Hyp含量,RT-PCR法测定其对Col-I、TGF-β1、MMP-2、TIMP-1及TIMP-2 mRNA表达的影响。结果LYQS可显着抑制HSC-T6的增殖,且毒性较低;LYQS各浓度可显着降低细胞上清液中Hyp含量（P<0.05或P<0.01）;LYQS各浓度组可显着下调细胞TGF-β1、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达;LYQS高、中浓度组可显着下调细胞Col-I mRNA的表达,并上调MMP-2 mRNA的表达。结论LYQS可抑制肝星状细胞增殖,并抑制胶原蛋白的生成、促进ECM的降解,这可能是其抗肝纤维化的作用机制之一。
李中华,赵晓芳[9]（2009）在《单味中药抗肝纤维化的实验研究进展》文中研究说明肝纤维化是各种致病因素导致肝内结缔组织异常增生的肝内弥散性细胞外基质过度沉积的病理过程。近年来对单味中药抗肝纤维化作用研究已取得了一定的进展,笔者收集了2003—2008年间单味中药抗肝纤维化实验研究的相关文献,其下列举研究较为深入、具有代表性的中药,并简述其主要研究结果、进展。
李雪梅,李红山,胡义扬[10]（2008）在《中药有效组分抗肝纤维化研究进展》文中提出
二、川芎嗪和苦参碱对HSC-T6细胞增殖的抑制作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、川芎嗪和苦参碱对HSC-T6细胞增殖的抑制作用（论文提纲范文）
（1）基于网络药理学探讨雄芍汤抗肝纤维化的免疫机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 1.立题背景和意义 |
| 1.1 肝纤维化的研究背景 |
| 1.2 防治肝纤维化的温阳健脾类方剂——雄芍汤 |
| 1.3 应用中药复方网络药理学研究的优势 |
| 2.研究内容、目的和创新点 |
| 2.1 研究内容 |
| 2.2 研究目的 |
| 2.3 创新点 |
| 3.流程图 |
| 4.目前国内外研究现状及分析 |
| 4.1 肝纤维化的发病机制 |
| 4.2 肝纤维化的中医治疗现状 |
| 第一部分 基于网络药理学探讨雄芍汤抗肝纤维化的作用机制 |
| 1 前言 |
| 2 材料 |
| 3 方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 第二部分 雄芍汤抗肝纤维化的动物实验研究 |
| 1 研究内容 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 统计学分析 |
| 5 结果分析 |
| 6 小结 |
| 第三部分 雄芍汤抗肝纤维化的细胞实验研究 |
| 1 研究内容 |
| 2 实验材料与器材 |
| 3 实验方法 |
| 4 统计学分析 |
| 5 结果分析 |
| 6 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 中医药治疗肝纤维化的作用机制研究进展 |
| 1 肝纤维化的发病机制 |
| 2 中医药治疗肝纤维化的研究进展 |
| 2.1 单味中药及其作用机制 |
| 2.2 中药复方及其作用机制 |
| 3 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）基于RhoA/ROCK Ⅱ通路探讨原发性高血压痰湿壅盛证与炎性因子的相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 Rho/ROCK信号通路与炎症细胞因子的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药对Rho/ROCK信号通路调控作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 原发性高血压病RhoA/ROCKⅡ通路与炎症因子相关性研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 实验二 原发性高血压病痰湿壅盛证RhoA/ROCKⅡ通路与炎症因子相关性研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）氧化苦参碱干预砷致肝纤维化中细胞自噬的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述:细胞自噬与肝纤维化 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
| 学位论文数据集 |
（4）睡莲花总黄酮及其成分对HSC细胞增殖活化的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1 睡莲花总黄酮及其成分对H_2O_2致LO2 细胞损伤的保护作用 |
| 1.1 仪器与试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 2 睡莲花总黄酮及其成分对HSC细胞增殖、活化的影响 |
| 2.1 仪器与试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 3 睡莲花总黄酮及其成分对TGF-β1诱导的 HSC 细胞增殖的影响 |
| 3.1 仪器与试剂 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 天然活性成分抗肝纤维化作用及其机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 导师评阅表 |
（5）基于酶解技术制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 美洲大蠊抗肝纤维化的研究进展 |
| 2 酶解技术在中药有效成分提取中的应用 |
| 3 本课题研究的意义 |
| 参考文献 |
| 第一章 美洲大蠊粗提物酶解工艺中蛋白酶的筛选 |
| 第一节 美洲大蠊粗提物中蛋白质含量的测定 |
| 1 实验材料和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 第二节 制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分蛋白酶的筛选 |
| 1 实验材料和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 第三节 美洲大蠊粗提物酶解前后的电泳分析 |
| 1 实验材料和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二章 中性蛋白酶制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分工艺优化 |
| 1 实验材料和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三章 木瓜蛋白酶制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分工艺优化 |
| 1 实验材料和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 硕士期间发表论文 |
| 文献综述 天然产物抗肝纤维化作用及其机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）芪珠方对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号传导通路的影响（论文提纲范文）
| 目录 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 芪珠方对肝纤维化大鼠的保护作用及其机制的体内实验研究 |
| 第一章 芪珠方对CC14所致肝纤维化大鼠的病理形态,体重、肝脾指数影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 芪珠方对肝纤维化大鼠TNF-a,IL-4,IL-8,IL-10,TIMP-1,MMP-1,MMP-2,MMP-13表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 芪珠方对肝纤维化模型大鼠TGF-β1/Smad信号传导通路的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 芪珠方不同提取法提取物及其含药血清的HPLC研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 芪珠方有效成分对HSC-T6细胞影响的体外实验研究 |
| 第一章 芪珠方有效成分对HSC-T6细胞增殖影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 芪珠方有效成分对HSC-T6细胞Bax、Bcl-2mRNA及蛋白表达影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 芪珠方有效成分对HSC-T6细胞周期和对CyclinD1mRNA、蛋白表达影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 芪珠方有效成分对HSC-T6细胞TGF-β1/Smad信号传导通路的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 创新与展望 |
| 附录1 中英文缩略词列表 |
| 附录2 近5年来肝纤维化中医证治用药规律的文献研究 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（7）苦参碱、川芎嗪抑制低氧培养后白血病细胞侵袭转移作用的实验研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 苦参碱、川芎嗪对低氧培养后白血病细胞粘附、运动和侵袭能力的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 苦参碱、川芎嗪对低氧培养后白血病细胞HIF1-α、VEGF的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 HIF-1α、VEGF、MMPs 与非霍奇金淋巴瘤侵袭转移关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录 |
（8）六月青皂苷抗肝纤维化作用及其分子机制的实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 六月青皂苷的提取及质量标准研究 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 体内实验六月青皂苷抗大鼠肝纤维化作用及其机制的研究 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 实验一 六月青皂苷对肝纤维化大鼠生化指标及形态学的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 六月青皂苷对肝纤维化大鼠肝组织相关基因表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 体外实验六月青皂苷对肝星状细胞的影响 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 实验一 六月青皂苷对肝星状细胞增殖及毒性的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 六月青皂苷对肝星状细胞细胞外基质的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述：肝纤维化治疗药物的研究进展 |
| 致谢 |
（9）单味中药抗肝纤维化的实验研究进展（论文提纲范文）
| 1 银杏叶 |
| 2 苦参碱 |
| 3 川芎嗪 |
| 4 甘草酸 |
| 5 三七皂苷 |
| 6 姜黄素 |
| 7其它单味中药有效成分 |
（10）中药有效组分抗肝纤维化研究进展（论文提纲范文）
| 1 丹酚酸B盐和丹酚酸A |
| 1.1 丹酚酸B盐 |
| 1.2 丹酚酸A |
| 2 苦参碱及氧化苦参碱 |
| 3 虫草多糖 |
| 4 汉防己甲素 |
| 5 绞股蓝总皂苷 |
| 6 甘草甜素 |
| 7 桃仁提取物 |
| 8 川芎嗪 |
| 9 三七总皂苷 |
| 10 水飞蓟素 |
| 11 排钱草总生物碱 |
| 12 牛磺酸 |
| 13 其他中药有效成分 |
| 14 结语 |
四、川芎嗪和苦参碱对HSC-T6细胞增殖的抑制作用（论文参考文献）
- [1]基于网络药理学探讨雄芍汤抗肝纤维化的免疫机制研究[D]. 程金秋. 山西中医药大学, 2021(09)
- [2]基于RhoA/ROCK Ⅱ通路探讨原发性高血压痰湿壅盛证与炎性因子的相关性研究[D]. 薛文静. 北京中医药大学, 2021(08)
- [3]氧化苦参碱干预砷致肝纤维化中细胞自噬的研究[D]. 马子华. 贵州医科大学, 2020(04)
- [4]睡莲花总黄酮及其成分对HSC细胞增殖活化的影响及其机制研究[D]. 姑丽巴哈尔·艾木都拉. 新疆医科大学, 2020(08)
- [5]基于酶解技术制备美洲大蠊抗肝纤维化活性组分[D]. 杨华蕊. 大理大学, 2019(05)
- [6]芪珠方对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号传导通路的影响[D]. 刘鸣昊. 南京中医药大学, 2013(05)
- [7]苦参碱、川芎嗪抑制低氧培养后白血病细胞侵袭转移作用的实验研究[D]. 林淑仪. 重庆医科大学, 2011(11)
- [8]六月青皂苷抗肝纤维化作用及其分子机制的实验研究[D]. 陈兆霓. 广西医科大学, 2010(08)
- [9]单味中药抗肝纤维化的实验研究进展[J]. 李中华,赵晓芳. 辽宁中医药大学学报, 2009(09)
- [10]中药有效组分抗肝纤维化研究进展[J]. 李雪梅,李红山,胡义扬. 中西医结合肝病杂志, 2008(03)