一、碱性成纤维细胞生长因子促进血管内皮细胞增殖作用的实验研究(论文文献综述)
李志红[1](2021)在《消炎生肌膏对肛周脓肿术后bFGF、VEGF表达的相关性研究》文中进行了进一步梳理目的:通过对比消炎生肌膏与雷弗努尔外用治疗肛周脓肿术后创面,观察两组治疗前与治疗后第14天的血清血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)的浓度表达变化,观察并比较两组在创面疼痛、创面渗液、创缘水肿、创面愈合率、创面愈合时间的治疗效果及差异。研究并探讨消炎生肌膏促进肛周脓肿术后创面愈合的机制。方法:选取2020年5月至2021年1月在福建中医药大学附属人民医院肛肠一科住院并符合纳入标准的湿热下注型肛周脓肿术后患者60例。按照随机数字表的方法分为治疗组和对照组各30例。治疗组予消炎生肌膏纱条外用换药治疗,对照组予雷弗努尔纱条外用换药治疗,观察并记录两组患者治疗前与治疗后第14天的血清VEGF与bFGF的浓度表达变化,术后第7天、14天、21天两组患者创面疼痛,创面渗出量,创缘水肿的情况,测量并记录创面面积,计算创面愈合率,对比总体疗效,追访并记录创面愈合的时间。结果:1、术前两组病例在性别、年龄、原始创面面积、治疗前的血清VEGF、bFGF的浓度表达水平比较,均无统计学差异(P>0.05),两组均具有可比性。2、对比两组治疗前后的血清VEGF、bFGF的浓度表达水平,治疗组与对照组治疗后VEGF、bFGF的浓度表达水平均较治疗前明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗组与对照组比较,治疗组升高血清VEGF、bFGF的浓度表达水平较对照组显着,差异具有统计学意义(P<0.05)。3、对比两组术后创面疼痛情况,术后第7天,差异无明显统计学意义(P>0.05),在术后第14天、21天,差异均具有统计学意义(P<0.05)。4、对比两组术后创面渗液情况,术后第7天,差异无明显统计学意义(P>0.05),在术后第14天、21天,差异均具有统计学意义(P<0.05)。5、对比两组术后创缘水肿情况,在术后第7天、14天、21天,差异均具有统计学意义(P<0.05)。6、对比两组术后创面面积,在术后第7天、14天、21天,差异均具有统计学意义(P<0.05)。7、对比两组术后第21天的创面愈合率,差异具有统计学意义(P<0.05)。8、对比两组术后的总体疗效,治疗组总有效率100%,对照组总有效率92%,差异具有统计学意义(P<0.05)。9、对比两组术后创面愈合时间,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:应用消炎生肌膏治疗肛周脓肿,能够提高血清VEGF、bFGF的浓度表达水平,促进肛周脓肿术后创面修复,同时显着缓解肛周脓肿术后创面的疼痛,减少创面渗液量,减轻创缘水肿,加快创面修复速度,缩减愈合时间。
刘皎皎[2](2021)在《“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:采用随机对照临床试验(RCT)方法观察“补肾生髓成肝”法治疗晚期肝癌的临床疗效,并探究其改善肝癌肝再生微环境的疗效机制,为临床推广应用提供较高级别的循证医学证据。方法:1.采用随机分组法将2017年1月至2020年6月就诊于陕西省中医医院肝病科的入选晚期肝癌患者共126例,基于随机数字表法简单随机分成3组,即西医对照组42例(以下简称西医组),采用西医综合治疗方案;补肾生髓成肝单独治疗组42例(以下简称中医组),采用地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减治疗方案;补肾生髓成肝综合治疗组42例(以下简称中西医组),采用西医治疗组方案基础上加上地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减。入选后有10例患者脱落(中医组6例,3例因失访脱落,3例因不能坚持治疗脱落;西医组4例,2例因异地就医不便退出,2例因不能坚持治疗脱落),最终纳入统计分析病例资料的共116例,西医对照组(西医组)38例、补肾生髓成肝综合治疗组(中西医组)42组、补肾生髓成肝单独治疗组(中医组)36例。该研究通过湖北省中医院伦理审查,在中国临床试验注册中心(世界卫生组织国际临床试验平台一级注册机构)完成临床试验注册,注册号:Chi CTR-IOR-17011439。参与研究的患者均自愿签署了知情同意书。对比三组治疗3个月及治疗6个月的生存率及生存期,对比治疗前、治疗后3个月血常规、粪常规加潜血、肝功、血糖、血脂、肾功等指标,对比三组治疗前后的中医证候评分、生存质量评分,并对患者生存期的独立影响因素进行分析。2.依据治疗方案治疗3个月后分别收集中医组、西医组、中西组每组20名患者血清,共60份,正常人群血清18份。收集的血清-80℃冻存于陕西省中医医院肝病实验室。通过悬液芯片系统检测患者血清肝再生相关细胞因子粒细胞集落刺激因子(Granulocyte Colony Factor,G-CSF)、肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、白介素-6/8/18(Interleukin-6,IL-6,Interleukin-8,IL-8,Interleukin-18,IL-18)、血小板源性生长因子(Platelet Derived Growth Factor,PDGF-BB)、干细胞因子(Stem Cell Factor,SCF)、肿瘤坏死因子-α(Tumor Nnecrosis Factor-α,TNF-α)的含量,观察体现“补肾生髓成肝”的中药对这些细胞因子的影响。结果:(1)三组患者治疗前后生存率及生存期比较:治疗3个月及6个月后,中西医组、中医组和西医组生存率比较,有统计学差异(88.10%VS72.22%VS52.63%)、(71.43%VS58.33%VS34.21%)(P<0.05)。治疗后中西医组、中西组和西医组患者生存期比较,具有统计学差异(23.86±17.55VS20.08±19.86VS15.95±16.44)(P<0.05)。(2)三组患者治疗前后肿瘤大小比较:中西医组、中医组和西医组组间比较及前后测量时间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。(3)三组患者治疗前后肝功指标比较:中西医组患者治疗后直接胆红素水平、间接胆红素水平、谷丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶水平较治疗前显着降低(P<0.05),组间比较无统计学差异(P>0.05)。中医组治疗后胆碱酯酶水平较治疗前显着升高,组间比较不具有统计学意义(P>0.05)。三组患者治疗前后白蛋白水平比较,具有统计学意义(P<0.05);两两比较,中西医组及中医组与西医组比较,具有统计学意义(P<0.05)。(4)三组患者治疗前后其他生化指标比较:三组患者治疗后血常规指标中白细胞水平、中性粒细胞/淋巴细胞比值、血小板水平,中西医组、中医组与西医组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。三组患者治疗后肌酐水平比较,中西医组、中医组与西医组比较,具有统计学意义(P<0.05)。(5)三组患者治疗前后中医证候评分比较:三组患者治疗前后中医证候评分以时间因素为源的主体内差异及以组别为源的主体间效应,具有统计学意义(P<0.05)。三组患者治疗后的中医证候评分均显着低于治疗前,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后中西医组、中医组显着低于西医组的中医证候评分,差异具有统计学意义(P<0.05)。(6)三组患者治疗前后生存量表积分比较:三组患者生理机能积分方面治疗后积分均显着高于治疗前,具有统计学意义(P<0.05)。治疗后中西医组、中医组与西医组的社会功能评分比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。三组患者在生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,有统计学意义(P<0.05),且两两组间比较后中西医组与中医组、西医组的生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。(7)HGF表达水平比较:西医组明显高于中西医组、中医组及正常人群组,差异具有统计学意(2255.17VS1097.76VS1072.39VS882.67)(P<0.05)。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制HGF的过度表达。(8)IL-6表达水平比较:中医组、中西医组及西医组均低于正常人群组,且组间差异具有统计学意义(5638.03VS5166.45VS12842.5VS24559.34)(P<0.05)。中西医组、中医组IL-6表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义(P<0.05)。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制IL-6的过度表达。(9)IL-18表达水平比较:西医组、中西医组及中医组,比较差异不具有统计学意义(120.345VS82.61VS78.58)(P>0.05),但均较正常人群组升高(75.165)。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗同样可以促进IL-18的表达。(10)PDGF-BB表达水平比较:中医组相对中西医组、西医组降低,差异不具有统计学意义(4677.18VS6140.6VS5534.885)(P>0.05)。但中医组低于西医组及中西医组,且更接近正常人群组(4401.67)。提示单用“补肾生髓成肝”可以抑制PDGF-BB的过度表达。(11)TNF-α表达水平比较:西医组、中西医组、中医组及正常人群组比较差异具有统计学意义(735.955VS244.93VS573.46VS1037.25)(P>0.05)。中西医组TNF-α表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义(P<0.05)。提示单用“补肾生髓成肝”可以更好的抑制TNF-α的过度表达。结论:“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌能够显着提高晚期肝癌患者3个月及6个月的生存率及生存期,改善晚期肝癌患者临床症状同时,改善患者各种生化指标。明显降低晚期肝癌患者的中医证候评分,提高患者的生存质量,为临床推广应用提供了较高级别的循证医学证据。“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌患者的疗效机制之一可能是通过抑制晚期肝癌患者HGF、PDGF-BB、TNF-α、IL-6的过度表达,同时升高晚期肝癌患者IL-18的表达,改善肝癌的肝再生微环境及其相关的炎症微环境、免疫微环境、血管新生微环境等。
樊飞燕,张运克[3](2021)在《益气活血中药联合骨髓间充质干细胞促进缺血性脑卒中血管新生的作用与机制》文中提出背景:骨髓间充质干细胞具有促进血管新生的作用,治疗缺血性脑卒中效果良好,益气活血类中药在促进血管新生方面亦存在显着疗效。目的:综述益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞促进缺血性脑卒中血管新生的机制,以期为缺血性脑卒中的研究及治疗提供参考。方法:以"bone marrow mesenchymal stem cells,angiogenesis,ischemic stroke,traditional chinese medicine"为英文关键词,以"骨髓间充质干细胞,血管新生,缺血性脑卒中,中药"为中文关键词,检索2009至2020年期间收录在PubMed、中国知网、万方数据库中的文献,纳入血管新生相关机制及中药联合骨髓间充质干细胞促进血管新生相关的文献,排除重复与相关性弱的文献,对145篇文献进行总结分析。结果与结论:(1)梳理了骨髓间充质干细胞、血管新生的定义及血管新生的机制;(2)总结了益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞促进血管新生的相关因子及信号通路,如血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子、碱性成纤维细胞生长因子、缺氧诱导因子1α、血管生成素、整合素αvβ3、基质金属蛋白酶9及Wnt信号通路、Notch信号通路、PI3K/Akt信号通路和SDF-1/CXCR4信号轴;(3)总结发现益气活血类中药与骨髓间充质干细胞联合应用能增强血管新生作用,提升缺血性脑卒中的治疗效果。
敖丽梅[4](2020)在《蒙药三子汤为基础的系列方剂对CIA大鼠关节新生血管的影响》文中研究说明目的1.观察蒙药三子汤对胶原诱导性关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)模型大鼠关节炎症的影响,比较三子汤、森登4汤、忠伦5汤缓解炎症的作用差异。2.明确三子汤为基础的系列方剂对CIA模型大鼠关节新生血管形成的作用和潜在机制,分析森登4汤、忠伦5汤与三子汤相比是否具有增效作用或其他作用机制差异。3.观察三子汤为基础的系列方剂含药血清对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)和人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖的影响以及对HUVEC管腔形成的影响。方法实验一:以CIA大鼠为研究对象,通过对其体重、关节肿胀度、关节炎评分、关节病理改变和炎性因子白介素(Interleukin,IL)-1β、干扰素(Interferon,IFN)-γ水平的评估,观察三子汤、森登4汤、忠伦5汤的不同剂量改善CIA滑膜炎症的作用,筛选出最佳剂量,比较三种复方的药效差异。对120只雄性SD大鼠随机分组:正常对照组(n=10)、造模组(n=110),对造模组构建CIA模型;模型建立完成后,对大鼠随机分组如下:模型对照组,雷公藤多苷片组(0.02g/kg/d),三子汤低、中、高剂量组(1.35g/kg/d,2.7g/kg/d,5.4g/kg/d),森登 4 汤低、中、高剂量组(1.35g/kg/d,2.7g/kg/d,5.4g/kg/d)和忠伦 5汤低、中、高剂量组(1.35g/kg/d,2.7g/kg/d,5.4g/kg/d),各组6只,对正常对照组和模型对照组灌胃蒸馏水;在初次接受免疫后的第21天,对大鼠口服灌胃给药,持续4周,每日一次;分别在致炎前、给药前、给药1周、2周、3周和4周后,观察记录各组大鼠的一般状态、体重、足爪厚度,对关节炎指数进行评分;灌胃给药前实施大鼠目内眦取血,酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)法检测抗二型胶原(Collagen typeⅡ,CⅡ)抗体含量;给药4周结束后取材,采用苏木精-伊红(Hematoxylin and Eosin,HE)染色对CIA大鼠踝关节的病理改变进行观察,采用免疫组化法对大鼠踝关节中的炎性因子IL-1β、IFN-γ的表达情况进行检测。实验二:明确三种复方改善CIA大鼠滑膜新生血管的作用和潜在的机制,筛选最佳剂量,比较三种复方的作用差异。延续实验一,取材结束后Elisa法检测CIA大鼠外周血清中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(Endothelial nitric-oxide synthase,eNOS)、组织纤溶酶原激活物(Tissue plasminogen activator,tPA)含量;运用免疫组化法检测CIA大鼠踝关节中VEGFA、胎盘生长因子(Placental growth factor,PLGF)、缺氧诱导因子(Hypoxia inducible factor,HIF)-α的表达情况;蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测大鼠踝关节中血管生成素(Angiopoietin,Ang)-1、Ang-2、酪氨酸激酶受体(Tyrosine kinase receptor,Tie)-2蛋白的表达。实验三:通过运用血清药理学方法观察三种复方不同浓度的含药血清在体外实验中对RA-FLS和HUVEC增殖的作用以及对HUVEC管腔形成的影响,筛选出最佳浓度,比较三种复方之间差异,并结合检测血管生成相关的细胞因子,初步探讨三种复方对RA-FLS和HUVEC增殖的作用机制。制备三种复方的含药血清,分别建立以IL-1 β诱导的RA-FLS损伤模型和以VEGF165诱导的HUVEC损伤模型,MTT法检测三种复方不同浓度(5%、10%、20%)的含药血清对两种体外细胞损伤模型的细胞活力;观察三种复方含药血清对HUVEC管腔形成的影响;Elisa法检测RA-FLS细胞上清中VEGF、PLGF、Ang-1、Ang-2的含量及HUVEC细胞上清中血管内皮生长因子受体(Vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)-1、VEGFR-2、Tie-2 的含量。结果实验一:与正常对照组相比,模型对照组大鼠血清抗CⅡ抗体含量显着增高(P<0.01),提示CIA模型建立成功。与模型对照组相比,三子汤和忠伦5汤高剂量可明显增加大鼠体重(P<0.05);森登4汤和忠伦5汤的高剂量能明显缓解CIA大鼠关节肿胀的程度(P<0.05);三子汤中、高剂量,森登4汤低、中、高剂量和忠伦5汤高剂量都能明显降低CIA大鼠关节炎症评分(P<0.05);三种复方的高剂量都可以明显缓解CIA大鼠踝关节炎症及减轻新生血管的生成(P<0.05);森登4汤和忠伦5汤的高剂量对降低大鼠踝关节中IL-1β、IFN-γ表达具有明显作用(P<0.05),而三子汤没有明显作用(P>0.05)。实验二:Elisa结果显示,与模型对照组相比,三子汤、森登4汤的高剂量和忠伦5汤中、高剂量可以明显降低大鼠血清中VEGF含量(P<0.05);各给药组大鼠外周血清中eNOS含量均明显降低(P<0.05),以三子汤、森登4汤的高剂量和忠伦5汤中剂量效果最佳;忠伦5汤中、高剂量组大鼠外周血清中tPA含量均明显降低(P<0.05)。免疫组化方法结果显示,与模型对照组相比,森登4汤、忠伦5汤的高剂量组大鼠踝关节中VEGFA的表达明显降低(P<0.01);雷公藤多苷片组,三子汤、森登4汤和忠伦5汤的中、高剂量组大鼠踝关节中PLGF表达均呈降低趋势,但没有统计学意义(P<0.05);森登4汤和忠伦5汤高剂量组大鼠踝关节中的HIF-α表达明显降低(P<0.05)。WB检测结果显示,与模型对照组相比,三子汤、忠伦5汤的高剂量和森登4汤的中、高剂量有下调大鼠踝关节中的Ang-1蛋白表达的趋势,但无统计学意义(P<0.05);三种复方的各给药剂量都能降低大鼠踝关节中Ang-2蛋白的表达(P<0.05);三子汤、森登4汤的中剂量能降低大鼠踝关节中Tie-2蛋白的表达(P<0.05)。实验三:MTT结果显示,与IL-1 β诱导组相比,三种复方含药血清在抑制RA-FLS增殖方面均有显着作用(P<0.05),最佳浓度都是20%;与VEGF165诱导组相比,三种复方含药血清均能抑制HUVEC的增殖(P<0.05),以20%浓度的三子汤、10%和20%的忠伦5汤含药血清的效果最显着;两种细胞得出各组含药血清疗效的最佳作用时间均为24小时。HUVEC管腔形成实验结果显示三种复方20%浓度组的含药血清都有减少VEGF165诱导的HUVEC的管腔形成的趋势,但无统计学意义(P>0.05)。Elisa检测结果显示,与IL-1β诱导组相比,10%、20%的三子汤、森登4汤和忠伦5汤含药血清组作用下的VEGF含量均明显降低(P<0.01);各浓度组的三子汤、森登4汤和忠伦5汤含药血清均能有效降低PLGF、Ang-1的含量(P<0.01);20%的三子汤、10%、20%的森登4汤和忠伦5汤含药血清均能明显降低Ang-2的含量(P<0.05)。与VEGF165诱导组相比,三种复方含药血清的各个浓度都能降低VEGFR-1的含量(P<0.01);10%、20%三子汤以及5%、10%、20%的森登4汤和忠伦5汤含药血清能降低VEGFR-2的含量(P<0.01);10%、20%的三种复方含药血清能降低Tie-2的含量(P<0.05);各细胞因子有效药物的最佳浓度均为20%。结论森登4汤和忠伦5汤与基础方三子汤相比,在缓解CIA大鼠关节炎症方面具有一定的增效作用,但两者之间没有显着差异。三种复方都能通过调控参与HIF-VEGF-Ang轴中的关键细胞因子来发挥缓解CIA关节新生血管的作用,但发挥药效作用机制各有偏重,三子汤主要通过降低血管生成刺激因子VEGF、eNOS的表达、抑制Ang-2/Tie-2途径发挥作用;森登4汤通过VEGF、HIF-α、eNOS的表达、抑制Ang-2/Tie-2途径发挥作用;忠伦5汤通过下调VEGF、HIF-α、eNOS和Ang-2的表达发挥作用;森登4汤的作用靶点更多,在抗血管新生方面可能更具优势。为三子汤为基础的系列方剂治疗类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)和进一步研究蒙药优化组方、新药研发提供了科学依据。
陈水龄[5](2020)在《姜黄素抑制实验性脉络膜新生血管的机制研究》文中研究指明第一章目的采用 532nm倍频激光建立实验性脉络膜新生血管(Choroidal Neovascularization,CNV)动物模型,为CNV的相关基础研究提供模型参考。方法1.应用532nm倍频激光光凝棕色挪威(Brown Norway,BN)大鼠建立实验性CNV模型,分别在光凝后1d、3d、5d、7d、14d、21d采用眼底照、眼底荧光血管造影(Fundus Fluorescein Angiograph,FFA)和吲哚菁绿血管造影(Indocyanine green Angiography,ICGA)观察光凝后不同时间点 CNV 的变化情况。2.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用HE染色法观察光凝后不同时间点CNV中央厚度。3.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用免疫组织化学染色法观察光凝后不同时间点CNV眼组织中CD105因子表达的情况。结果1.光凝后1d光斑处无荧光素渗漏;光凝后3d、5d仅有少量光斑处有荧光素渗漏。光凝后7d CNV生成率为70.18%,荧光素渗漏平均光密度值为128.30±11.21。光凝后14d CNV生成率为78.18%,平均光密度值为182.12±6.59,与光凝后7d组比较差异有统计学意义(P<0.05)。光凝后21d,CNV生成率和荧光素渗漏平均光密度值与光凝后14d组比较差异无统计学意义。2.HE染色结果显示:随着光凝后时间的增加,CNV中央厚度逐渐增加,光凝后7d CNV厚度为48.92±2.81μm,较光凝后1d显着增加(P<0.05);光凝后14d CNV厚度为61.98±5.06μm,较光凝后7d显着增加(P<0.05);光凝后21d CNV厚度为61.78±4.03μm,与14d组比较差异无统计学意义。3.CD105免疫组化结果显示:正常组视网膜组织CD105表达呈阴性,光凝后1d、3d、5d组光斑处可见少量棕黄色反应物表达,光凝后7d组光斑处棕黄色反应物逐渐增多(P<0.05),光凝后14d组较光凝后7d组比较显着增加(P<0.05),光凝后21d组与光凝后14d组比较差异无统计学意义。结论1.应用532nm激光光凝可以成功建立BN大鼠实验性CNV动物模型。2.CNV在光凝后7d至14d生长迅速,至21d逐渐稳定,此模型具有成模速度快,成模率高、重复性好、成本低的优点,可作为CNV基础研究的动物模型。3.眼底照、FFA、ICGA、HE染色和免疫组化检查可以动态观察CNV的变化。第二章目的观察中药单体姜黄素对BN大鼠实验性CNV的抑制作用,以及对AKT/p-AKT/HIF-1 α/VEGF信号通路活性的影响,为姜黄素治疗CNV提供实验依据。方法1.应用532nm倍频激光光凝诱导BN大鼠建立CNV模型,造模后的大鼠被随机分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低剂量组、姜黄素中剂量组和姜黄素高剂量组,在光凝后14d进行眼底照、FFA与ICGA检查。2.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用HE染色法观察不同组CNV中央厚度。3.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用免疫组织化学法观察不同组CNV眼组织中AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子蛋白的表达情况。4.采用RT-qPCR法检测CNV眼组织中AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子mRNA的相对表达量。5.采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测CNV眼组织中AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子蛋白的相对表达量。结果1.正常组未打激光,模型组,雷珠单抗组,姜黄素低、中、高剂量组CNV生成率分别为78.18%、73.21%、77.19%、75.86%、74.55%,组间比较差异无统计学意义;荧光素渗漏平均光密度值分别为182.12±6.59、119.22±8.03、166.45±8.33、164.34±5.69、149.22±6.45;雷珠单抗组较模型组显着降低(P<0.05);姜黄素低、中、高剂量组较雷珠单抗组显着升高(P<0.05),其中姜黄素高剂量组较模型组显着降低(P<0.05)。2.HE染色结果显示:正常组BN大鼠视网膜组织各层结构清晰、排列整齐。光凝后14d,雷珠单抗组CNV中央厚度较模型组显着减少(P<0.05);姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组较模型组显着减少(P<0.05),较雷珠单抗组显着增加(P<0.05)。3.免疫组化结果显示:正常组BN大鼠视网膜组织结构中AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子表达呈阴性,未见棕黄色反应物。光凝后14d,模型组光斑处AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子的表达高于正常组(P<0.05);雷珠单抗组低于模型组(P<0.05);姜黄素低剂量组、中剂量组AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子的表达与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组的表达较模型组显着降低(P<0.05);较雷珠单抗组显着增加(P<0.05)。4.mRNA结果显示:光凝后14d,模型组AKT、HIF-1α和VEGF mRNA相对表达量均高于正常组(P<0.05);雷珠单抗组均低于模型组(P<0.05);姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组较模型组显着降低(P<0.05),较雷珠单抗组显着增加(P<0.05)。5.Westernblot结果显示:光凝后14d,AKT蛋白各组间比较差异无统计学意义。p-AKT蛋白相对表达量模型组较正常组显着增加(P<0.05);雷珠单抗组较模型组显着降低(P<0.05);姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组较模型组显着降低(P<0.05)。HIF-1α蛋白相对表达量模型组较正常组显着增加(P<0.05),雷珠单抗组较模型组显着降低(P<0.05),姜黄素低、中剂量与模型组比较差异无统计学意义,姜黄素高剂量组较模型组显着降低(P<0.05),较雷珠单抗组显着增加(P<0.05)。VEGF蛋白相对表达量模型组较正常组显着增加(P<0.05),雷珠单抗组较模型组显着降低(P<0.05),姜黄素低剂量组与模型组比较差异无统计学意义,姜黄素中、高剂量组较模型组显着降低(P<0.05)。结论1.高剂量姜黄素(400mg/Kg/d)对激光诱导的BN大鼠实验性CNV的形成具有抑制作用。2.姜黄素抑制BN大鼠实验性CNV的机制可能与抑制AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路的激活,降低相关因子的表达有关。第三章目的观察姜黄素对氯化钴(CoCl2)诱导的人视网膜色素上皮细胞株-19(adult retinal pigment epithelial cell line-19,ARPE-19)细胞缺氧模型中 AKT、HIF-1 α 和VEGF因子mRNA及蛋白表达的影响。方法1.采用CoCl2诱导ARPE-19细胞建立化学性缺氧模型,应用CCK-8法筛选造模试剂CoCl2、实验药物姜黄素和阳性对照药雷珠单抗的浓度,同时检测姜黄素对CoCl2诱导的ARPE-19细胞活性的影响。2.将ARPE-19细胞分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低、中、高剂量组,应用RT-qPCR法检测姜黄素对CoCl2诱导的ARPE-19细胞缺氧模型AKT、HIF-1α和VEGF mRNA表达量的影响。3.将ARPE-19细胞分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低、中、高剂量组,应用Westernblot法检测姜黄素对CoCl2诱导的ARPE-19细胞缺氧模型AKT、p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白表达量的影响。结果1.CCK-8细胞活性检测:随着CoCl2浓度的增加,ARPE-19细胞活性呈现先增长后抑制,当CoCl2终浓度≥200μM时,细胞活性显着降低(P<0.05)。姜黄素终浓度在0-100μM时,ARPE-19细胞活性未见异常;当浓度≥200μM时,细胞活性显着降低(P<0.05)。雷珠单抗在终浓度为20μg/mL时,细胞活性较CoCl2组显着降低(P<0.05),与正常组比较差异无统计学意义;当浓度为40μg/mL、80μg/mL时,细胞活性较CoCl2组和正常组均显着降低(P<0.05)。因此,我们选择终浓度100μM的CoCl2作为造模浓度;终浓度6.25μM、25μM、100μM的姜黄素作为低、中、高剂量组浓度;终浓度为20μg/mL的雷珠单抗作为阳性对照药物的浓度。2.RT-qPCR结果显示:模型组AKT、HIF-1α和VEGF mRNA相对表达量均高于正常组(P<0.05);雷珠单抗组均低于模型组(P<0.05);姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义(P<0.05);姜黄素高剂量组较模型组显着降低(P<0.05);与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。3.Westernblot结果显示:AKT蛋白相对表达量各组间比较差异无统计学意义。p-AKT和HIF-1α蛋白相对表达量模型组均高于正常组(P<0.05),雷珠单抗组均低于模型组(P<0.05),姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义(P<0.05),姜黄素高剂量组较模型组显着降低(P<0.05),与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。VEGF蛋白相对表达量模型组高于正常组(P<0.05),雷珠单抗组低于模型组(P<0.05),姜黄素低剂量与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素中、高剂量组较模型组显着降低(P<0.05),与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。结论1.应用CoCl2可成功建立APRE-19细胞化学缺氧模型。2.CoCl2在终浓度为100μM时可增加细胞中AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白的表达量。3.高剂量姜黄素(100μM)可降低CoCl2诱导的ARPE-19细胞中AKT、HIF-1α和 VEGF mRNA 及 p-AKT、HIF-1α 和 VEGF 蛋白的表达。4.姜黄素(100μM)对CoCl2诱导ARPE-19细胞缺氧具有保护作用。第四章目的观察ARPE-19细胞的各组条件培养液对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)细胞增殖、迁移、侵袭和管腔形成的影响。方法1.将ARPE-19细胞条件培养液分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低、中、高剂量组,分别作用于HUVEC细胞;采用CCK-8法观察ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞活性的影响。2.采用细胞划痕实验观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞的水平迁移的影响。3.采用Transwell小室迁移实验观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞的垂直迁移的影响。4.采用Transwell小室侵袭实验观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞的侵袭的影响。5.采用Matrigel基质胶管腔形成实验,观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞管腔形成的影响。结果1.ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞活性的影响,组间差异无统计学意义。2.HUVEC细胞水平迁移实验结果显示:与正常组比较模型组HUVEC细胞水平迁移显着增加(P<0.05);与模型组比较雷珠单抗组水平迁移显着减少(P<0.05);姜黄素条件培养液低(6.25μM)、中(25μM)、高(100μM)剂量组水平迁移较模型组显着减少(P<0.05),其中,高剂量组与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。3.HUVEC细胞垂直迁移实验结果显示:与正常组比较模型组HUVEC细胞垂直迁移显着增加(P<0.05);与模型组比较雷珠单抗组垂直迁移显着减少(P<0.05);姜黄素条件培养液低(6.25μM)、中(25μM)剂量组垂直迁移与模型组比较差异无统计学意义,姜黄素条件培养液高(100μM)剂量组垂直迁移较模型组显着减少(P<0.05),与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。4.HUVEC细胞侵袭实验结果显示:与正常组比较模型组HUVEC细胞侵袭显着增加(P<0.05);与模型组比较雷珠单抗组细胞侵袭显着减少(P<0.05);姜黄素条件培养液低(6.25μM)、中(25μM)剂量组细胞侵袭与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素条件培养液高(100μM)剂量组较模型组细胞侵袭显着减少(P<0.05),与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。5.HUVEC细胞管腔形成实验结果显示:模型组管腔形成较正常组显着增加(P<0.05);雷珠单抗组管腔形成较模型组显着较少(P<0.05);姜黄素条件培养液低(6.25μM)剂量组管腔形成与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素中(25μM)、高(100μM)剂量组管腔形成与模型组比较显着减少(P<0.05),与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。结论1.ARPE-19细胞姜黄素低(6.25μM)、中(25μM)、高剂量组(100μM)条件培养液可显着抑制HUVEC细胞水平迁移;其中高剂量组条件培养液可显着抑制HUVEC细胞垂直迁移。2.ARPE-19细胞姜黄素高剂量组(100μM)条件培养液可抑制HUVEC细胞侵袭。3.ARPE-19细胞姜黄素中(25μM)、高剂量组(100μM)条件培养液可抑制HUVEC细胞管腔形成。4.姜黄素可在细胞水平抑制血管的生成。
杨桂然[6](2020)在《成纤维细胞联合血管内皮细胞促进脂肪干细胞增殖及成骨分化研究》文中进行了进一步梳理目的:为进一步优化组织工程骨仿生性能,本研究拟通过将具有优良增殖分化性能、分泌合成胶原能力、含多种调控因子的成纤维细胞(FB)与血管内皮细胞(VECs)联合共培养脂肪间充质干细胞(ADSCs),探讨FB对ADSCs的作用,明确FB是否能加强VECs的直接诱导作用,为解决组织工程骨形成缓慢、血管化缓慢等问题以及临床骨缺损治疗方案提供捷径和新思路。方法:①将血管内皮细胞、成纤维细胞、脂肪干细胞三种细胞株分别体外培养,并通过细胞形态学及表面标记进行检测和鉴定,确定其各自细胞生物学特性;②将细胞分为四组:ADSCs组、ADSCs+VECs共培养组、ADSCs+FB共培养组、ADSCs+VECs+FB共培养组,分别倒置显微镜下观察细胞的形态变化;③CCK-8法绘制出各组细胞的生长曲线,比较各组细胞增殖情况;④共培养第7、14、21、28天各组进行茜素红染色、ALP染色,分别进行定性及定量检测;⑤共培养第3周行Western blot检测各组BMP-2蛋白水平表达;⑥共培养第3周行RT-PCR检测成骨标志基因(ALP、OCN)mRNA的表达,以评估共培养体系的成骨分化能力。结果:①三种细胞的形态及增殖情况良好,ADSCs的CD90、CD105(+),成骨诱导(+);VECs的CD133、vWF(+);FB的Vinmintin(+);②ADSCs+VECs+FB共培养组培养至14天时,细胞之间出现许多突触相互连接,部分细胞融合成团块状,呈巢状分布,而ADSCs单独组细胞形态单一,未见细胞团出现;③生长曲线可见各组细胞吸光度逐渐升高,各组生长曲线形态基本相同,ADSCs+VECs+FB共培养组OD值最高;④茜素红染色定量分析第14天时,ADSCs组与ADSCs+VECs组比较、ADSCs+FB组与ADSCs+VECs+FB组比较无明显差异(P>0.05),第21天时,除ADSCs组与ADSCs+VECs组比较无明显差异外(P>0.05),其余各时间、各组组间两两比较均有统计学差异(P<0.05);ALP染色定量分析各时间段组间均有统计学差异(P<0.05);除第21天时,B组与C组比较无明显差异外(P>0.05),其余各个时间点、各组组间两两比较均有统计学差异(P<0.05);⑤Western Blot结果显示四组细胞均有表达,ADSCs+FB组和ADSCs+VECs+FB组的表达较明显,且ADSCs组与ADSCs+VECs组相比无明显差异(P>0.05),其余各组组间两两比较均有统计学差异(P<0.05);⑥RT-PCR结果显示对于ALP mRNA的表达,ADSCs组与ADSCs+FB组相比无明显统计学差异外(P>0.05),其余各组相比均有统计学差异(P<0.05),对于OCN mRNA的表达,除ADSCs组与ADSCs+VECs组相比无明显统计学差异外(P>0.05),其余各组相比均有差异(P<0.05)。结论:①在共培养条件下VECs能在体外无其他条件诱导情况下直接促进ADSCs增殖并向成骨细胞分化;②FB和ADSCs体外共培养条件下促进ADSCs成骨分化的能力比VECs强,但促其增殖效果不如VECs;③FB联合VECs与ADSCs共培养既能使ADSCs大量增殖,又能促进其快速而高效向成骨细胞分化。
娄龙[7](2020)在《回毒银花散促进感染性创面愈合的临床研究及对相关细胞因子的影响》文中进行了进一步梳理目的:通过临床观察,探讨回毒银花散加减促进肛周脓肿术后感染性创面愈合在炎症反应期及肉芽生长期的作用机制及相关细胞因子对创面修复的影响。方法:选取就诊于云南省中医医院肛肠科门诊并接受住院手术治疗的、年龄在18-65岁的低位肛后深间隙肛周脓肿术后患者60例作为研究对象,根据随机数字表法采用随机分组将60例受试者分为回毒银花散治疗组(30例)和抗生素对照组(30例)。治疗组:术后予回毒银花散加减:金银花30g、黄芪60g、甘草10g、虎杖10g、重楼10g、皂角刺10g、紫草10g、当归15g,(中药汤剂由云南省中医医院中药房统一煎煮,150ml)早中晚饭后温服,1袋/次,3次/日,日1剂,7天为1个疗程,外治法:0.9%的温盐水1000ml坐浴(15分钟,每日1次)、每日院内紫连膏纱条换药(院内紫连膏:云南省中医医院院内制剂,批准文号:滇药制字(Z)20082571A,规格:每盒10g)(每日一次)、患者住院1周后出院门诊常规换药至创面愈合。对照组:术后临床抗生素抗感染治疗(本次实验研究统一采用注射用头孢美唑钠(生产企业:哈药集团制药总工厂,批准文号:国药准字H20070240,执行标准:《中国药典》2015年版二部,包装:钠钙玻璃模制注射瓶装,规格:每只0.5g)1g+0.9%氯化钠注射液250ml,普通静滴,日2次,5天为1个疗程),外治法:同治疗组。观察术后治疗5天后创口疼痛、红肿、渗液等情况,术后7、14天肉芽组织生长情况,创面完全愈合时间;随机从两组患者中各抽取14例,分别于术后第5天(检测CD68、MMP-9的阳性率)、第10天(检测VEGF、b-FGF的阳性率)行肉芽组织免疫组化检测并分析比较测定结果。结果:中药内服回毒银花散加减治疗组在术后第5天创面疼痛、红肿积分改善优于抗生素对照组(P<0.05);术后5天创面渗液情况治疗组与对照组(P>0.05),无统计学意义;术后5天CD68、MMP-9的阳性率治疗组低于抗生素对照组(P<0.05);VEGF、b-FGF两组间在术后第10天阳性率比较(P<0.05);术后7、14天肉芽组织生长情况、创面完全愈合天数治疗组优于对照组(P<0.05)。结论:1.回毒银花散加减具有清热解毒、活血凉血、补益正气、祛瘀生新的功效,减轻肛周脓肿术后感染性创面初期炎症反应,缩短炎症反应期,促进肉芽组织生长,促进感染性创面的愈合,回毒银花散加减同时兼顾了创伤修复的炎症反应期和肉芽生长期,其减轻炎症反应,缩短炎症反应期的机理可能与CD68、MMP-9有关,促进创面愈合的机理可能与VEGF、b-FGF有关。2.在减轻术后炎症反应、缩短炎症反应期及促进创面愈合方面,中药内服在临床应用可充分体现中医药的简便廉验,减少肛周脓肿术后抗生素的使用,降低耐药性,有利维持肠道微动态平衡。
买买艾力·玉山[8](2020)在《rhPDGF-BB基因修饰的BMSCs促进大鼠股骨牵张成骨的研究》文中提出目的:1)建立一个合理的可重复的大鼠负重长骨牵张成骨(Distraction Osteogenesis,DO)模型,为今后进一步探讨和深入研究促进牵张成骨区骨再生与矿化的方法以及分子机制奠定基础;2)建立稳定的大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的获取和体外培养体系,并进一步扩增,纯化及鉴定。通过人重组血小板衍生生长因子-BB(rhPDGF-BB)基因慢病毒体外转染BMSCs并观察对BMSCs的影响;3)以大鼠自体BMSCs作为载体,通过体外携带rhPDGF-BB基因的慢病毒转染后,将rhPDGF-BB基因修饰的BMSCs导入大鼠股骨牵张间隙中,探讨rhPDGF-BB基因修饰的BMSCs对大鼠股骨牵张间隙新生骨再生矿化的影响,进一步为临床上应用牵张成骨技术(骨传送技术)治疗四肢大段骨缺损探讨一种快速而有效的缩短治疗周期的治疗方法。方法:1)大鼠单侧股骨牵张成骨动物模型的建立:选择雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠为实验动物,<6月龄,350-400g。使用自行研制的延长型外固定器,用10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,选择大鼠右侧股骨中段行截骨后用4枚螺钉固定延长型外固定器。术后经过7天潜伏期后进行缓慢牵张,速度为0.5mm/天(分两次),连续牵张14天,共牵张延长7mm,牵张结束后固定牵张器。分别于牵张结束后第0周,2周,4周及8周四个时间点处死3只动物,处死前麻醉状态下行X线检查,处死后取出右侧股骨标本进行大体观察,组织学HE染色及番红固绿染色观察;2)大鼠BMSCs的分离培养,鉴定及rhPDGF-BB基因体外转染:大鼠自体BMSCs的培养和传代,通过细胞活性检测,碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红染色方法进行细胞鉴定,通过应用密度梯度离心法获取生长状态良好第3代大鼠BMSCs经上述方法鉴定后进一步应用基因转染和下一步的治疗。构建同时携有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因和rhPDGF-BB基因的重组慢病毒载体后经体外扩增,纯化后转染大鼠BMSCs观察其体外对BMSCs的影响;3)rhPDGF-BB修饰的骨髓MSCs促进大鼠股骨牵张成骨效果的检测:应用自行研制的延长型外固定器将54只SD大鼠随机分为3组,每组于术后21天分别在牵张区局部注射等剂量rhPDGF-BB修饰的骨髓MSCs(实验组),骨髓MSCs(实验对照组),PBS(空白对照组),活体X线检查于DO牵张结束后不同时间点进行4次,检测时间点为牵张结束(术后天21天),矿化期2周(术后第35天),矿化期4周(术后第49天),矿化期8周(术后第77天)。矿化期第8周末处死动物取双侧股骨,并小心剔除骨组织表面肌肉进行Micro-CT,生物力学及组织病理学检测分析。结果:1)纳入本次实验研究的实验动物活体观察提示所有入组实验动物均耐受手术且顺利完成术后牵张成骨过程,观察期间所有实验动物的饮食及大小便均正常,牵张结束后延长侧股骨较对侧相比达到预定目标长度。通过标准X线检查和组织学观察证实大鼠股骨牵张模型牵张间隙成骨良好;2)应用密度梯度离心法成功分离了大鼠BMSCs,细胞活性检测结果提示细胞生长良好,碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红染色结果提示表达高水平的ALP活性,矿化细胞外基质,形成矿化结节。构建出的rhPDGF-BB基因体外转染鉴定过的大鼠BMSCs,转染后对细胞的生长无明显影响;3)rhPDGF-BB基因修饰的大鼠BMSCs局部应用于大鼠股骨牵张模型。X线片显示,矿化期第8周实验组10只延长区均达到骨性愈合,实验对照组和空白对照组分别为5只和4只达到骨性愈合的标准。生物力学测试(三点力学测试)结果表明实验组所有抗扭强度指标均显着优于其他两个对照组,且实验组抗扭强度指标与自体对侧未牵张正常股骨的抗扭强度相当。Micro-CT扫描后获得的数据结果分析提示矿化期第8周实验组牵张区间隙内新生骨骨痂的主要构成结构由皮质骨构成而松质骨结构极为少见,此外牵张间隙新生骨矿化区可见骨髓腔部分或全部与牵张两骨端骨髓腔基本贯通,其构成和结构与自身长骨管状骨的结构基本类似,而其他两对照组牵张区间隙内新生的骨组织以松质骨结构为主且骨髓腔结构改建较差。矿化期第8周获取的股骨标本行组织学切片后HE和Safranin O染色结果提示,实验组牵张间隙新生骨痂内软骨组织残留较少而两个对照组牵张区间隙新生骨组织结构上仍有部分软组织结构,新生骨已经矿化,皮质骨已连续,骨髓腔开始重建,提示rhPDGF-BB基因修饰的大鼠BMSCs治疗处理后新生骨痂矿化明显。免疫组化结果提示三组中实验组OPN、OCN、VEGF和CD31表达高于两对照组。结论:1)自制延长型外固定器能够满足大鼠单侧股骨牵张的要求,牵张成骨的潜伏期成骨与骨折愈合过程类似,但牵张成骨在其特有的牵张期和矿化期的时间段里牵张区间隙新骨再生具有其特有的组织学变化特点。本实验部分通过所获得的大鼠股骨参数,自制研发出适用于研究SD大鼠股骨牵张成骨模型的微型单边可延长型外固定装置,并顺利构建出可重复性较高适合大批量SD大鼠DO实验研究的动物模型,为今后利用DO动物实验模型并通过细胞或基因治疗缩短治疗周期或DO过程中的细胞分子机制的研究提供动物模型实验平台;2)密度梯度离心法获取的大鼠BMSCs体外培养结果提示其增殖活性较强,鉴定结果提示其可作为本次实验研究进行细胞治疗以及基因治疗较为理想的种子细胞。目的基因靶细胞转染后在不同时间点通过不同倍数荧光显微镜下观察结果提示,脂质载体介导的瞬时转染可以使rhPDGF-BB基因在BMSCs中成功表达;3)X线,Micro-CT,生物力学,组织学和免疫组织化学观察都证实,与单纯BMSCs及PBS相比,rhPDGF-BB基因修饰的BMSCs可较为有效的促进大鼠股骨牵张间隙区成骨过程中新骨的形成和矿化。应用rhPDGF-BB基因体外转染BMSCs于牵张结束后局部应用能够促进牵张成骨中的骨再生从而缩短DO治疗周期,为临床上应用牵张成骨(骨传送)技术治疗骨缺损提供了一个新的策略。
陈琦[9](2019)在《固定面积皮瓣成活与狭长窄蒂长宽比例关系及负压封闭引流促进狭长窄蒂皮瓣成活的动物实验与临床应用研究》文中提出目的:①通过制作狭长窄蒂皮瓣动物模型,瓣部固定面积,设计为直径6.0cm的圆形,蒂部长宽比例从2.0cm:0至6.0cm:2.0cm不等,观察皮瓣愈合过程、组织病理学改变和CD105、VEGF、Caspase-3、Ki67的表达情况,以进一步探讨狭长窄蒂皮瓣的成活机制;②制作狭长窄蒂皮瓣血供障碍动物模型,应用负压封闭引流技术改善狭长皮瓣血供,探讨促进狭长窄蒂皮瓣成活的方法;③狭长窄蒂皮瓣应用于临床。方法:①基础实验部分1:制作狭长窄蒂皮瓣动物模型。30只新西兰大白兔被随机分成6组,每组5只,6组皮瓣主体部分均为直径为6.0cm的圆形,其狭长窄蒂设计为不同长宽比,分别为0:2.0cm、1.0cm:2.0cm、2.0cm:2.0cm、3.0cm:2.0cm、4.0cm:2.0cm、5.0cm:2.0cm,依次命名A、B、C、D、E、F组,其中A组皮瓣的蒂部宽2.0cm,没有长度,设为对照组。在每只实验兔的背部双侧设计狭长窄蒂皮瓣。对每组皮瓣进行大体观察、皮瓣成活率测定。并于术后1小时、术后1、3、5、7天,分别切取各组皮瓣远端中部全层组织作为标本,大小为0.5cm×0.3cm,通过HE染色、组织芯片、免疫组化和酶联免疫(ELISA)、实时荧光定量PCR等技术方法,对皮瓣组织内CD105、VEGF、Caspase3、Ki67进行定性、定量分析。②基础实验部分2:制作狭长窄蒂皮瓣血供障碍动物模型,蒂部长宽值为5.0cm×2.0cm,携带直径为6cm的任意皮瓣。20只新西兰大白兔,在每只兔子的躯干一侧形成狭长窄蒂皮瓣,左右随机各半,一组术后安装负压引流装置(实验组),一组术后常规打包(对照组)。对每组皮瓣进行大体观察,术后7天观察皮瓣成活情况,计算成活面积。并于术后3、5、7天,分别切取各组皮瓣远端中部全层组织,大小为0.5cm×0.3cm,作为标本,通过HE染色,观察不同时间皮瓣组织学变化。③临床应用部分:收集各种原因所致的皮肤软组织缺损可通过狭长窄蒂皮瓣修复的病例50例。结果:①在一定范围内增加狭长窄蒂的长宽比例,一定面积的皮瓣成活情况不受影响。但该比例达一定界限时皮瓣远端即发生坏死,成活面积缩小。②组织学分析发现,CD105、VEGF、Caspase-3、Ki67在狭长窄蒂皮瓣成活过程中,因术中组织损伤,部分血供被阻断,组织产生缺血缺氧反应,在术后含量均增加。A、B、C、D组皮瓣组织CD105、VEGF表达在术后第5天达到高峰,随着血管新生出现,组织血供改善,创伤愈合,渐下降,呈一定规律;E、F组皮瓣组织CD105、VEGF表达在术后第3天达到高峰,随后下降,与前述各组有统计学差异,呈一定规律;E、F组皮瓣组织Caspase-3表达在术后第一天上升,随后下降,Ki67在术后第一天上升,维持在高表达,与对照组均有统计学差异,呈一定规律。③负压封闭引流可促进狭长窄蒂皮瓣成活,实验侧较对照侧皮瓣肿胀、水肿程度明显减轻,血供情况较对照侧明显改善。④狭长窄蒂皮瓣是修复软组织缺损的较理想方法。结论:①一定范围内狭长窄蒂的长宽比例增加,任意皮瓣的预期成活面积不受影响,超过一定界限时,皮瓣发生坏死,成活面积小于预期成活面积;②CD105、VEGF、Caspase3、Ki67在狭长窄蒂皮瓣的成活过程中有重要作用;③负压封闭引流可促进狭长窄蒂皮瓣成活;④狭长窄蒂皮瓣是修复软组织缺损的理想方法之一。
韦积华[10](2019)在《Ilizarov微循环重建技术对糖尿病足溃疡愈合作用的影响研究》文中提出(一)研究背景糖尿病是一种严重影响人类健康的全球性常见病、多发病。已有统计数据显示:目前全球罹患糖尿病者约4.22亿,几乎占了全人类的8.50%,预计到2040年将增加到6.4亿,而在我国这一比例更是达到了15.50%。糖尿病足溃疡是与糖尿病相关的最常见、最严重的并发症,其发病率高达25%,糖尿病足溃疡患者中有15%以上可能面临截肢甚至死亡的风险。糖尿病足溃疡治疗既往以内科控制血糖、抗感染,配合外科局部清创为主,然而治疗效果并不理想,以致患者最终仍面临着截肢或截趾的风险。因此,探求新的治疗靶点及策略已成为糖尿病溃疡创面修复研究的热点与难点。近年来,有报道采用Ilizarov微循环重建技术治疗糖尿病足溃疡取得了较好的临床疗效,成功的保留了许多濒临截肢的患者的肢体。Ilizarov微循环重建技术是基于Ilizarov张力应力法则开发出来的治疗下肢缺血性疾病的措施。既往研究表明,Ilizarov微循环重建技术不仅能够促进骨骼间的微血管再生,而且可有效促进皮肤、软组织的血管再生,从而加速糖尿病足溃疡的愈合。目前对Ilizarov微循环重建技术的研究多从血管造影、彩色多普勒超声、X线等方面进行,而对于血管再生及血管重塑的机制研究鲜见。因此,本研究拟通过应用Ilizarov微循环重建技术治疗糖尿病足溃疡创面兔模型,观察其有效性,并采用Western Blot、Real-time PCR等技术,从DLL4/Notch信号通路探讨该技术促进糖尿病足溃疡愈合的有效性及其分子机制,为临床应用该技术防治糖尿病足溃疡提供有效的治疗方法和坚实的理论依据。(二)目的观察Ilizarov微循环重建术对糖尿病足溃疡患者外周血中的VEGF、b FGF表达的影响,以及对新西兰兔糖尿病足溃疡创缘肉芽组织的VEGF、Notch1和DLL4 m RNA的转录水平和VEGF、Notch1、b FGF蛋白的表达的影响,探讨Ilizarov微循环重建技术对糖尿病足溃疡愈合作用的机制。(三)方法第一部分(临床研究):选取20例糖尿病足溃疡患者,随机分为Ilizarov组和贝复新组,其中Ilizarov组9例,贝复新组11例,分别观察治疗前、治疗后2 w、4 w和8 w创面愈合情况;在术前及术后8 w应用CTA检查肢体血管再生情况;用ELISA法检测治疗前后外周血VEGF和b FGF的表达情况。第二部分(实验研究):(1)实验一:自行研究设计兔胫骨横向骨搬移外固定支架,安放于4只新西兰兔左胫骨上段内侧。术后第4天开始搬移骨块,每天向外搬移0.5 mm,分2次完成,旋转2圈为0.125 mm,0.25 mm/次,1次/12h,2次/d,共7 d,搬移距离3.5 mm。向外搬移结束后第2天以同样的方法往回搬移骨块,共7 d完成往回胫骨横搬(手风琴技术),将胫骨块搬移回原位后维持2w后拆除胫骨搬移架。(2)实验二:将72只新西兰兔随机分为空白对照组、模型组、贝复新组(重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶组)和Ilizarov组,每组18只。模型组、贝复新组和Ilizarov组建立糖尿病足溃疡模型,空白对照组仅在足部建立急性创面。Ilizarov组按照实验(1)的方法进行胫骨横向搬移,贝复新组给予贝复新外用治疗,模型组及空白对照组给予生理盐水换药治疗。分别进行创面愈合率分析、HE染色观察皮肤组织病理学改变及进行血管化程度定量分析。各组分别于干预后第3天、第10天、第17天这3个时相点取创面相同部位的肉芽组织,用Western Blot法测定创缘组织中VEGF、Notch1和b FGF蛋白的表达情况,用Real-time PCR测定创缘组织中VEGF、Notch1和DLL4 m RNA的转录水平。(四)结果第一部分:Ilizarov组,所有9例患者行胫骨横向搬移术后2 w创面开始有新鲜肉芽组织生长,4 w后可以看到创面明显缩小,第4周及第8周时,实验组愈合速度较对照组明显加快,差异有统计学意义(P<0.05)。最终所有足部溃疡均得到愈合,愈合时间平均9.0±1.9 w,较对照组(12.7±3.7 w)明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组愈合后疤痕组织较少。术后8 w血管造影显示小腿及足部侧支动脉及局部微小动脉明显增加,术后12 w测量踝肱指数显示,实验组治疗后踝肱指数较治疗前好转(P<0.00)。Ilizarov组治疗后第1周、第2周和第4周外周血血清VEGF、b FGF较术前明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),对照组治疗后第2周外周血VEGF、b FGF较术前有所升高,余各个时间点无明显变化(P>0.05)。第二部分:1、胫骨横向骨搬移外固定支架成功安放于新西兰兔胫骨上段内侧,通过调节牵张器可对胫骨上段骨折块进行有效横向搬移,稳定性良好,性能优良。2、Ilizarov组创面的修复组织疤痕组织较少,毛发生长良好,接近原位再生。各组之间愈合率比较:第7天,各组之间的愈合率比较,差异无统计学意义(P>0.05);第14天,Ilizarov组、空白对照组明显快于贝复新组及模型组,差异有统计学意义(P<0.01),Ilizarov组和空白对照组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);第21天,模型组与其他三组比较,差异有统计学意义(P<0.01),余各组之间的愈合率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。各组之间阳性血管数量比较:第7天,Ilizarov组、空白对照组及贝复新组阳性血管数量均多于模型组,差异有统计学意义(P<0.00);第14天,空白对照组阳性血管数量多于其他三组,差异有统计学意义(P<0.00),余各组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3、Real Time PCR结果显示,Ilizarov组和贝复新组兔创面肉芽组织中VEGF、Notch1和DLL4 m RNA的表达水平在3个时相点呈现增高-降低趋势,空白对照组呈逐渐下降趋势,模型组无明显变化。干预第10天,Ilizarov组升高更明显,与贝复新组相比,差异有统计学意义(P<0.05);与第3天相比,差异有统计学意义(P<0.05)。West blot结果显示,Ilizarov组和贝复新组兔创缘组织中VEGF、Notch1和b FGF蛋白的表达水平在3个时相点呈现增高-降低的趋势,空白对照组呈现由高到低的趋势,而模型组无明显变化。Ilizarov组的VEGF蛋白表达水平在第10天时高于贝复新组,差异有统计学意义(P<0.05)。Ilizarov组的Notch1、b FGF蛋白表达水平在第10天和17天时均高于贝复新组,差异有统计学意义(P<0.05)。(五)结论1.Ilizarov微循环重建技术能够刺激糖尿病足溃疡患者肢体远端缺血组织的血管再生,促进糖尿病足溃疡的修复。2.此胫骨横向骨搬移牵张器具有制作简单、轻便易操作,价格低廉的特点,可有效实施胫骨上段横向骨搬移实验,适合科研人员在胫骨上段骨横向搬移的实验研究中应用。3.Ilizarov微循环重建技术可能通过增强VEGF、Notch1和b FGF蛋白表达水平和VEGF、Notch1和DLL4 m RNA转录水平,使相应蛋白表达增强,发挥其增进血管新生、重建微循环的作用,从而促进糖尿病足溃疡愈合、提高创面愈合率、缩短愈合时间、减轻瘢痕增生。
二、碱性成纤维细胞生长因子促进血管内皮细胞增殖作用的实验研究(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、碱性成纤维细胞生长因子促进血管内皮细胞增殖作用的实验研究(论文提纲范文)
(1)消炎生肌膏对肛周脓肿术后bFGF、VEGF表达的相关性研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
引言 |
临床资料 |
1 研究目的 |
2 研究对象 |
2.1 研究对象来源 |
2.2 研究对象入选标准 |
3 药物 |
3.1 药物制剂来源及主要组成 |
3.2 药物使用方法 |
4 研究方法 |
4.1 分组 |
4.2 操作方法 |
4.3 分组处理 |
4.4 主要试剂及检测方法 |
5 观察指标 |
6 疗效评定 |
6.1 疗效评定标准 |
6.2 肛门疼痛程度评分标准 |
6.3 创缘水肿评分情况 |
6.4 创面分泌物渗液量评分标准 |
6.5 创面愈合率 |
6.6 创面愈合时间 |
7 统计方法 |
研究结果 |
1 一般资料分析 |
1.1 性别 |
1.2 年龄 |
1.3 创面原始面积的比较 |
1.4 生长因子治疗前的比较 |
2 观察指标数据分析和对比 |
2.1 VEGF的数据分析 |
2.2 bFGF的数据分析 |
2.3 两组术后第7 天、14 天、21 天的VAS的分析与对比 |
2.4 两组术后创面渗液积分分析和对比 |
2.5 两组术后创缘水肿积分分析和对比 |
2.6 两组创面面积的分析与对比 |
2.7 两组创面愈合率的分析和对比 |
2.8 两组创面愈合时间的分析和对比 |
2.9 两组创面总体疗效分析和对比 |
3 脱落说明 |
4 安全性审查 |
讨论 |
1 祖国医学对肛周脓肿的认识 |
1.1 病名的认识 |
1.2 病因病机的认识 |
1.3 肛周脓肿术后病因病机的认识 |
2 现代医学对肛周脓肿的认识 |
2.1 定义 |
2.2 发病机制 |
3 祖国医学治疗肛周脓肿的研究进展 |
3.1 祖国医学对治疗肛周脓肿的认识 |
3.2 祖国医学对治疗肛周脓肿术后创面的认识 |
4 现代医学治疗肛周脓肿的研究进展 |
4.1 现代医学对治疗肛周脓肿及术后创面的认识 |
5 生长因子在创面愈合过程中的意义 |
5.1 创面愈合与生长因子的联系 |
5.2 生长因子直接调控创面修复 |
5.3 生长因子间接调控创面修复 |
6 中药油膏外治疗法 |
6.1 中药油膏的定义及特点 |
6.2 膏药的中医治疗理论 |
6.3 中药油膏促进肛周脓肿术后创面恢复 |
7 消炎生肌膏的认识 |
7.1 方药组成及方解 |
7.2 消炎生肌膏主要药物现代药理研究及临床应用 |
8 研究结果分析 |
8.1 一般资料分析 |
8.2 血清生长因子VEGF、bFGF治疗前后的表达分析 |
8.3 疗效分析 |
9 问题和展望 |
结论 |
参考文献 |
附录 |
文献综述 中药油膏治疗肛周脓肿影响生长因子表达的研究进展 |
参考文献 |
致谢 |
作者简历 |
(2)“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
英文名称缩略词表 |
前言 |
第一部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察 |
1 一般资料 |
2 研究方法 |
2.1 纳入标准 |
2.2 排除标准 |
2.3 剔除标准 |
2.4 退出标准 |
2.5 中止标准 |
2.6 观察指标:包括安全性观察指标和疗效性观察指标 |
2.7 疗效判断 |
3 治疗方法 |
4 统计学分析 |
5 结果 |
5.1 三组患者基线资料比较 |
5.2 三组患者治疗前后生存率及生存期比较 |
5.3 三组患者治疗前后肿瘤大小比较 |
5.4 三组患者治疗前后生化指标水平比较 |
5.5 三组患者中医证候评分比较 |
5.6 三组患者生存质量评分比较 |
5.7 观察指标对患者疗效及预后的影响 |
讨论 |
1 “补肾生髓成肝”对晚期肝癌患者生存率及生存期的影响 |
2 肝癌肝再生微环境及“补肾生髓成肝”的改善作用 |
3 “补肾生髓成肝”对患者中医证候评分及生存质量的影响 |
4 “补肾生髓成肝”对患者并发症及预后的影响 |
参考文献 |
第二部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的疗效机制研究 |
1 研究样本及方法 |
1.1 材料与方法 |
1.2 实验操作流程 |
2 统计学处理方法 |
3 结果 |
3.1 肝再生相关细胞因子正态性检验结果 |
3.2 肝再生相关细胞因子在各组人群中表达的差异性 |
3.3 肝再生相关细胞因子表达水平之间的相关性分析 |
讨论 |
1 “补肾生髓成肝”疗法相关研究进展 |
2 “补肾生髓成肝”改善肝再生微环境防治肝癌的疗效机制 |
结语 |
参考文献 |
附录 |
文献综述一 肝癌微环境的研究现状 |
参考文献 |
文献综述二 中医药影响肝癌微环境的研究进展 |
参考文献 |
中医证候评分量表 |
SF-36 |
在校期间论文发表情况 |
致谢 |
(3)益气活血中药联合骨髓间充质干细胞促进缺血性脑卒中血管新生的作用与机制(论文提纲范文)
0引言Introduction |
1 资料和方法Data and methods |
1.1 文献检索和筛选要求 |
1.2 文献筛选标准 |
1.3 质量评估及数据的提取 |
2 结果Results |
2.1 血管新生的概念和影响因素 |
2.2 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对缺血性脑卒中血管新生的影响 |
2.2.1 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对血管内皮生长因子及血管内皮生长因子A的影响 |
2.2.2 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对缺氧诱导因子1α的影响 |
2.2.3 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对血管生成素的影响 |
2.2.4 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对脑源性神经营养因子的影响 |
2.2.5 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对碱性成纤维细胞生长因子的影响 |
2.2.6 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对整合素αvβ3的影响 |
2.2.7 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对基质金属蛋白酶9的影响 |
2.2.8 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对Wnt信号通路的影响 |
2.2.9 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对Notch信号通路的影响 |
2.2.1 0 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对PI3K/Akt信号通路的影响 |
3 小结Conclusions |
(4)蒙药三子汤为基础的系列方剂对CIA大鼠关节新生血管的影响(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
第一部分 文献综述 |
综述一 类风湿关节炎血管新生病理介质的研究概况 |
1 概述 |
2 巨噬细胞和滑膜成纤维细胞与RA血管新生 |
3 参与血管生成病理介质的研究概况 |
4 总结与展望 |
参考文献 |
综述二 中蒙药对RA抗血管生成作用的实验研究进展 |
1 概述 |
2 RA与血管新生 |
3 中药抗RA血管新生作用的实验研究进展 |
4 蒙药抗RA血管新生作用的研究进展 |
5 总结与展望 |
参考文献 |
前言 |
第二部分 实验研究 |
实验一 三子汤为基础的系列方剂对CIA大鼠关节炎症的影响 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
实验二 三子汤为基础的系列方剂对CIA大鼠血管新生的影响及机制研究 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
实验三 三子汤为基础的系列方剂含药血清对体外RA-FLS、HUVEC细胞增殖和血管新生相关细胞因子的影响 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
结语 |
参考文献 |
致谢 |
在学期间主要研究成果 |
(5)姜黄素抑制实验性脉络膜新生血管的机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
英文缩略词表 |
引言 |
第一章 532nm倍频激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管模型的建立 |
1. 实验动物、仪器、耗材与试剂 |
1.1 实验动物 |
1.2 实验仪器及耗材 |
1.3 实验试剂 |
2. 实验方法 |
2.1 实验分组 |
2.2 532nm倍频激光建立CNV模型 |
2.3 眼底照相、FFA及ICGA观察CNV变化 |
2.4 制备病理学标本 |
2.5 HE染色 |
2.6 免疫组织化学检测 |
3. 图像分析与统计学方法 |
3.1 眼底照、FFA及ICGA图像 |
3.2 HE染色图像 |
3.3 免疫组化图像 |
3.4 统计学方法 |
4. 结果 |
4.1 眼底照、FFA与ICGA结果 |
4.2 HE染色结果 |
4.3 CD105免疫组化结果 |
5. 讨论 |
5.1 CNV模型建立的方法 |
5.2 532nm倍频激光诱导BN大鼠建立实验性CNV模型的机制 |
5.3 532nm倍频激光诱导BN大鼠CNV模型的评价 |
6. 结论 |
第二章 姜黄素通过AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路抑制BN大鼠CNV的实验研究 |
1. 实验动物、仪器、耗材与试剂 |
1.1 实验动物 |
1.2 实验仪器与耗材 |
1.3 实验试剂 |
2. 实验方法 |
2.0 实验药物配制 |
2.1 实验分组及给药 |
2.2 532nm倍频激光建立实验性CNV模型 |
2.3 眼底照相、FFA及ICGA观察CNV变化 |
2.4 病理学标本制备 |
2.5 HE染色 |
2.6 免疫组织化学检测 |
2.7 RT-qPCR检测mRNA表达 |
2.8 Westernblot检测蛋白表达 |
3. 图像分析与统计学方法 |
3.1 眼底照、FFA与ICGA图像 |
3.2 HE染色图像 |
3.3 免疫组化图像 |
3.4 RT-qPCR结果分析 |
3.5 Westernblot结果分析 |
3.6 统计学方法 |
4. 实验结果 |
4.1 眼底照、FFA与ICGA结果 |
4.2 HE染色结果 |
4.3 免疫组化结果 |
4.4 RT-qPCR结果 |
4.5 Westernblot结果 |
5. 讨论 |
5.1 新生血管与中药单体 |
5.2 姜黄与姜黄素 |
5.3 姜黄素与眼部新生血管 |
5.4 CNV的中医认识 |
5.5 姜黄素抑制CNV的机制 |
6. 结论 |
第三章 姜黄素对CoCl_2诱导的ARPE-19细胞缺氧模型中AKT、HIF-1α和VEGF因子的影响 |
1. 实验细胞、试剂、药物及仪器 |
1.1 实验细胞 |
1.2 实验试剂 |
1.3 实验药物及溶液的配制 |
1.4 实验仪器 |
2. 实验方法 |
2.1 ARPE-19细胞复苏、传代与冻存 |
2.2 造模试剂CoCl_2、实验药物姜黄素及阳性对照药雷珠单抗浓度的筛选 |
2.3 实验分组与干预 |
2.4 CCK-8法检测实验各组ARPE-19细胞的活性 |
2.5 RT-qPCR检测 |
2.6 Westernblot检测 |
3. 结果分析与统计学方法 |
3.1 CCK-8检测细胞活性结果分析 |
3.2 RT-qPCR结果分析 |
3.3 Westernblot结果分析 |
3.4 统计学方法 |
4. 实验结果 |
4.1 正常ARPE-19细胞形态 |
4.2 CoCl_2对ARPE-19细胞活性的影响 |
4.3 姜黄素对ARPE-19细胞活性的影响 |
4.4 雷珠单抗对CoCl_2诱导的ARPE-19细胞活性的影响 |
4.5 RT-qPCR结果 |
4.6 Westernblot结果 |
5. 讨论 |
5.1 细胞缺氧模型的建立 |
5.2 CoCl_2诱导ARPE-19细胞缺氧模型的机制 |
5.3 姜黄素对CoCl_2诱导ARPE-19细胞缺氧的保护作用 |
6. 结论 |
第四章 非接触共培养体系观察ARPE-19细胞姜黄素的条件培养液对HUVEC细胞形态学的影响 |
1. 实验细胞、药物、试剂及仪器 |
1.1 实验细胞 |
1.2 实验试剂 |
1.3 实验试剂的配制 |
1.4 实验仪器 |
2. 实验方法 |
2.1 HUVEC细胞株复苏培养、传代与冻存 |
2.2 CCK-8检测 |
2.3 划痕实验检测细胞水平迁移 |
2.4 Transwell小室法检测细胞垂直迁移 |
2.5 Transwell小室法检测细胞侵袭 |
2.6 Matrigel基质胶法检测细胞管腔形成 |
3. 统计学方法 |
4. 实验结果 |
4.1 正常HUVEC细胞形态 |
4.2 CCK-8结果 |
4.3 划痕实验细胞水平迁移结果 |
4.4 Transwell小室实验细胞垂直迁移结果 |
4.5 Transwell小室实验细胞侵袭结果 |
4.6 Matrigel基质胶实验细胞管腔形成结果 |
5. 讨论 |
5.1 细胞迁移 |
5.2 细胞侵袭 |
5.3 细胞管腔形成 |
6. 结论 |
参考文献 |
创新性 |
不足与展望 |
综述一 脉络膜新生血管的发病机制及中西医治疗的研究进展 |
参考文献 |
综述二 姜黄素在眼科疾病的研究进展 |
参考文献 |
研究生期间学术表现 |
致谢 |
附: 查新报告 |
(6)成纤维细胞联合血管内皮细胞促进脂肪干细胞增殖及成骨分化研究(论文提纲范文)
缩略词表 |
中文摘要 |
英文摘要 |
第一章 血管内皮细胞、脂肪干细胞及成纤维细胞的鉴定及体外培养 |
一、引言 |
二、材料和方法 |
三、结果 |
四、讨论 |
五、结论 |
六、参考文献 |
第二章 通过共培养血管内皮细胞及成纤维细胞诱导脂肪干细胞成骨分化的研究 |
一、引言 |
二、材料和方法 |
三、结果 |
四、讨论 |
五、结论 |
六、参考文献 |
全文总结 |
综述 成纤维细胞的生物学特性及分化潜能 |
参考文献 |
攻读学位期间发表文章情况 |
致谢 |
(7)回毒银花散促进感染性创面愈合的临床研究及对相关细胞因子的影响(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
引言 |
第一部分 资料与方法 |
1 临床基本资料 |
1.1 病例来源 |
2 临床基本资料比较 |
2.1 一般基本资料比较 |
2.2 临床基线比较 |
3 诊断标准 |
3.1 西医诊断标准 |
3.2 中医诊断标准 |
4 实验病例纳入标准及排除标准 |
4.1 纳入标准 |
4.2 排除标准 |
5 剔除标准 |
6 研究方法 |
6.1 分组 |
6.2 治疗组方药组成及用法 |
6.3 对照组疗法 |
6.4 疗程 |
6.5 不良反应事件处理 |
7 观察指标 |
7.1 一般安全性指标 |
7.2 相关细胞因子 |
7.3 创面 |
7.4 疼痛、红肿、渗液效果判定 |
8 统计方法 |
第二部分 研究结果 |
1 治疗结果 |
1.1 治疗组患者治疗前与术后第五天组内疼痛、红肿、渗液评分比较 |
1.2 对照组患者治疗前与术后第5天组内疼痛、红肿、渗液评分比较. |
1.3 两组患者术后第5天疼痛、红肿、渗液评分比较 |
1.4 两组患者术后7天、14天肉芽组织生长情况积分比较 |
1.5 两组患者创面完全愈合时间 |
1.6 MMP-9与CD68阳性表达 |
1.7 两组患者术后第5天创面肉芽组织CD68阳性率比较 |
1.8 两组患者术后第5天创面肉芽组织MMP-9阳性率比较 |
1.9 b-FGF与 VEGF阳性表达 |
1.10 两组患者术后第10天创面肉芽组织VEGF阳性率比较 |
1.11 两组患者术后第10天创面肉芽组织b-FGF阳性率比较 |
2 安全性评价 |
第三部分 讨论 |
1 中医学对创面愈合的认识和研究现状 |
1.1 治疗方法 |
1.2 临床应用 |
2 西医学对创伤修复的认识和研究现状 |
2.1 CD68 巨噬细胞与创伤修复 |
2.2 基质金属蛋白酶9与创伤修复 |
2.3 血管内皮生长因子 VEGF 与创伤修复 |
2.4 碱性成纤维细胞生长因子与创伤修复 |
3 回毒银花散加减的药物分析 |
4 结果分析 |
4.1 治疗组、对照组对疼痛的治疗情况 |
4.2 治疗组、对照组对红肿的治疗情况 |
4.3 治疗组、对照组对渗液的治疗情况 |
4.4 治疗组、对照组对创面修复的治疗情况 |
4.5 CD68、MMP-9、VEGF、b-FGF对于创面修复的临床疗效 |
5 课题特点 |
6 问题与展望 |
第四部分 结论 |
参考文献 |
文献综述 肛周脓肿术后创面修复的临床研究 |
参考文献 |
附录 |
附件1:临床观察表 |
附表2:患者取病检知情同意书 |
致谢 |
(8)rhPDGF-BB基因修饰的BMSCs促进大鼠股骨牵张成骨的研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
前言 |
第一部分 大鼠单侧股骨牵张成骨动物模型的建立 |
1 研究内容与方法 |
1.1 实验试剂 |
1.2 实验设备 |
1.3 实验动物及伦理 |
1.4 单边可延长式微型外固定架的设计与研制 |
1.5 大鼠股骨牵张成骨模型的建立 |
1.6 观察与检测指标 |
1.7 统计学方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 小结 |
第二部分 大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养、鉴定及慢病毒介导RHPDGF-BB体外转染 |
1 内容与方法 |
1.1 实验材料与试剂 |
1.2 实验设备 |
1.3 实验动物 |
1.4 实验方法 |
1.5 统计学分析 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 小结 |
第三部分 rh PDGF-BB基因转染BMSCS促进大鼠股骨牵张成骨区新生骨矿化的作用 |
1 内容与方法 |
1.1 实验试剂 |
1.2 实验设备 |
1.3 实验方法 |
1.4 实验动物及分组 |
1.5 观察与检测指标 |
1.6 统计学方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 小结 |
结论 |
致谢 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
攻读博士学位期间获得的学术成果 |
个人简历 |
导师评阅表 |
(9)固定面积皮瓣成活与狭长窄蒂长宽比例关系及负压封闭引流促进狭长窄蒂皮瓣成活的动物实验与临床应用研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
序言 |
参考文献 |
研究内容、研究方法 |
第一部分: 固定面积皮瓣成活与狭长窄蒂长宽比例关系动物实验研究 |
第二部分: 负压封闭引流促进狭长窄蒂皮瓣成活的实验研究 |
第三部分: 狭长窄蒂皮瓣的临床应用研究 |
实验材料 |
第一部分 固定面积皮瓣成活与狭长窄蒂长宽比例关系动物实验研究 |
一、实验分组与皮瓣设计 |
二、实验方法与步骤 |
三、实验结果 |
四、实验总结 |
第二部分 负压封闭引流促进狭长窄蒂皮瓣成活 |
一、实验分组及皮瓣设计 |
二、实验方法与步骤 |
三、实验结果 |
四、实验总结 |
第三部分 狭长窄蒂任意皮瓣临床应用研究 |
一、病例资料 |
二、手术方法 |
三、结果 |
四、典型病例 |
五、第三部分总结 |
讨论 |
实验结论 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
攻读博士学位期间发表的学术论文及科研成果 |
中英文对照缩略词表 |
致谢 |
(10)Ilizarov微循环重建技术对糖尿病足溃疡愈合作用的影响研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
第一部分 临床研究 Ilizarov微循环重建技术对糖尿病足溃疡的临床疗效观察 |
1 引言 |
2 临床资料与方法 |
2.1 病例选择 |
2.2 病例分组 |
2.3 研究材料 |
2.4 术前准备 |
2.5 治疗方案 |
2.6 观察指标 |
2.7 数据统计 |
3 结果 |
3.1 入院时两组患者的一般资料比较 |
3.2 胫骨横向搬移效果分析 |
3.3 溃疡愈合情况 |
3.4 两组治疗前后血管再生情况 |
3.5 两组治疗前后血清VEGF、b FGF水平变化 |
3.6 并发症情况 |
4 典型病例分析 |
第二部分 实验研究 |
实验一 新西兰兔胫骨横向搬移系统的研制 |
1 引言 |
2 实验材料 |
2.1 实验动物 |
2.2 实验药物 |
2.3 实验设备 |
3 实验方法 |
3.1 胫骨横向搬移系统的设计及应用 |
3.2 模型实验 |
3.3 动物实验 |
4 实验结果 |
实验二 Ilizarov微循环重建技术对兔糖尿病足溃疡VEGF、Notch1、bFGF蛋白和VEGF、Notch1、DLL4 m RNA的影响 |
1 引言 |
2 实验材料 |
2.1 实验动物 |
2.2 实验药物 |
2.3 实验器材 |
2.4 主要仪器 |
3 实验方法 |
3.1 动物分组 |
3.2 糖尿病足溃疡模型建立 |
3.3 各组干预方法 |
4 取材与样品处理 |
4.1 创面愈合分析 |
4.2 HE染色观察皮肤组织病理学改变 |
4.3 血管化程度定量分析 |
4.4 Western Blot检测VEGF、Notch1、b FGF蛋白的表达 |
4.5 Real-time PCR检测VEGF、Notch1、DLL4 m RNA的转录水平 |
5 统计方法 |
6 实验结果 |
6.1 -般状态观察 |
6.2 大体病理观察 |
6.3 病理变化 |
6.4 创面愈合率 |
6.5 阳性血管数目 |
6.6 不同时间点各组兔创缘肉芽组织中VEGF、Notch1及b FGF蛋白表达 |
6.7 不同时间点各组兔创缘肉芽组织中VEGF、Notch1及DLL4 m RNA表达 |
讨论 |
1 Ilizarov微循环重建技术对第4 周、8 周创面愈合率的影响 |
2 动物用胫骨横向搬移系统研制的实验意义 |
3 血管再生在糖尿病足溃疡愈合中的作用 |
4 VEGF和 b FGF在 Ilizarov微循环重建技术治疗糖尿病足溃疡中的作用 |
5 Ilizarov微循环重建技术对VEGF、Notch1、DLL4及b FGF的影响 |
6 Ilizarov微循环重建技术治疗糖尿病足溃疡存在的问题 |
结论 |
存在的问题与展望 |
参考文献 |
综述 促进糖尿病足溃疡愈合的方法及其干预机制的研究进展 |
参考文献 |
附录 |
附录一 糖尿病诊断标准* |
附录二 糖尿病足诊断标准* |
附录三 糖尿病足Wagner分级 |
附录四 主要缩略语表 |
附录五 附图 |
攻读学位期间发表的论文 |
致谢 |
四、碱性成纤维细胞生长因子促进血管内皮细胞增殖作用的实验研究(论文参考文献)
- [1]消炎生肌膏对肛周脓肿术后bFGF、VEGF表达的相关性研究[D]. 李志红. 福建中医药大学, 2021(01)
- [2]“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究[D]. 刘皎皎. 湖北中医药大学, 2021
- [3]益气活血中药联合骨髓间充质干细胞促进缺血性脑卒中血管新生的作用与机制[J]. 樊飞燕,张运克. 中国组织工程研究, 2021(13)
- [4]蒙药三子汤为基础的系列方剂对CIA大鼠关节新生血管的影响[D]. 敖丽梅. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]姜黄素抑制实验性脉络膜新生血管的机制研究[D]. 陈水龄. 中国中医科学院, 2020(01)
- [6]成纤维细胞联合血管内皮细胞促进脂肪干细胞增殖及成骨分化研究[D]. 杨桂然. 昆明医科大学, 2020
- [7]回毒银花散促进感染性创面愈合的临床研究及对相关细胞因子的影响[D]. 娄龙. 云南中医药大学, 2020(01)
- [8]rhPDGF-BB基因修饰的BMSCs促进大鼠股骨牵张成骨的研究[D]. 买买艾力·玉山. 新疆医科大学, 2020(07)
- [9]固定面积皮瓣成活与狭长窄蒂长宽比例关系及负压封闭引流促进狭长窄蒂皮瓣成活的动物实验与临床应用研究[D]. 陈琦. 苏州大学, 2019(04)
- [10]Ilizarov微循环重建技术对糖尿病足溃疡愈合作用的影响研究[D]. 韦积华. 暨南大学, 2019