一、造血干细胞移植中无菌洁净外环境的监控（论文文献综述）
李佳[1]（2021）在《人脐带间充质干细胞联合改良视神经管减压术治疗外伤性视神经病变的临床转化研究》文中研究指明研究背景外伤性视神经病变（TON）占颅脑损伤的2%—5%,常引起严重的视功能损害。TON的发病机制仍未完全清楚,目前认为其机制主要包括由外力导致的视神经的原发性损伤和由缺血及炎症等所致的继发性损伤两个方面。原发性损伤是不可逆的,其严重程度是由受伤瞬间的外力所决定,而继发性损伤则是原发性损伤后,在损伤区出现一系列氧化应激反应如视神经的水肿、炎症反应、局部缺血、过度激活的谷氨酸受体、脂质过氧化作用和钙离子超载等,造成神经元的髓鞘和胶质瘢痕的形成,以及神经节细胞（RGCs）的凋亡。在视神经损伤后轴索断裂致轴浆流运输中断、营养因子缺乏,大量的神经节细胞大约在损伤7天左右达到凋亡高峰,而RGCs的凋亡最终将导致患者视力下降甚至丧失。然而,继发性的损伤往往在伤后数周内仍造成持续的视神经损伤,因而它的损伤程度往往超过原发性损伤,但它可以通过有效治疗改善控制。目前临床上针对TON的治疗方法多样,但各种方法的疗效争议较大。一般伤后视力大于0.1者多采用药物保守治疗,而视力小于0.1者则可采用激素冲击、减压手术或二者联合治疗。TON治疗中最常用的手术方式是视神经管减压术,它是通过手术切除视神经管周围的骨壁,以减轻因视神经水肿、出血等引起的对视神经的压迫症状,从而缓解视神经的血运障碍,是治疗外伤性视神经病变常用的手术方法。视神经减压术最早采用的是经颅入路的手术方式,这种方式损伤大且手术风险也相对较高。随着内窥镜设备及鼻窦手术的不断发展,视神经减压术已发展为创伤更小的鼻内镜下经鼻视神经管减压术。常规的经鼻视神经管减压术是通过切除钩突,并将前后组筛窦以及部分蝶窦打开,进行视神经管减压。这种手术入路方式视野开阔,能够充分暴露视神经管,并且较容易操作,但不足之处是术中切除钩突和前、后组筛窦,会造成较大的医源性损伤。此外,当TON患者合并有复杂的颅底骨折时易损伤颅脑组织及眼眶组织,增加了手术中寻找视神经管位置的难度。因此,迫切需一种新的微创手术入路方式来进行视神经管减压,以提高手术的安全性及减少医源性的损伤。由于视神经管临近蝶窦和筛窦,由蝶骨小翼构成,如果从蝶窦入路行视神经管减压术,只需切除上鼻甲开放蝶窦及少部分后组筛窦,这样可以在一定程度上减少医源性损伤的发生。然而,单纯的手术治疗,虽可以减轻视神经管的压迫症状,但是仍无法改善损伤局部炎症微环境,阻止继发性损伤的发生。研究表明,间充质干细胞移植在治疗神经损伤修复方面具有良好的应用前景。间充质干细胞在脊髓损伤修复中能够提高大鼠的运动功能,改善病变局部的微环境利于神经功能的恢复。移植人脐带间充质干细胞（h UCMSCs）可以明显提高颅脑创伤后遗症患者的神经功能评分。此外,在损伤局部移植MSCs能够促进脊髓损伤的修复,并且MSCs对脊髓再生的影响是剂量依赖性的,可通过提高剂量加强疗效。在视神经损伤的动物模型中,通过玻璃体腔内注射MSCs可以促进大鼠RGCs的存活及轴突的再生,促进视神经（ON）损伤的恢复。另外,MSCs除具有再生修复功能外,还有极强的免疫抑制和抗炎功能。为此,我们认为在外伤性视神经病变患者通过经蝶窦入路视神经管减压暴露视神经管后,并在损伤局部移植h UC-MSCs一方面能促进视神经的再生修复,同时也可弱化视神经损伤局部的炎症微环境,进而减少视神经的继发性损伤和胶质瘢痕的形成,从而改善TON患者的预后。研究目的1.探讨明胶海绵支架对h UC-MSCs增殖的影响。2.探讨h UC-MSCs明胶海绵支架材料对大鼠视神经损伤的修复作用。3.探讨在CT后处理技术的辅助下进行鼻内镜下视神经管减压术的安全性及有效性。4.探讨局部移植h UC-MSCs联合改良视神经管减压术治疗对外伤性视神经病变患者的安全性,以期为TON寻找一种更为有效的治疗方法。研究方法1.分离培养人脐带来源的原代MSCs,通过流式细胞分析技术和定向诱导分化技术对MSCs的表面标志物及三系分化能力进行了鉴定;通过激光共聚焦显微镜观察明胶海绵的三维结构,通过共培养运用MTT法检测MSCs在明胶海绵支架上的增殖能力。2.通过建立大鼠视神经半横断损伤动物模型,利用HE染色、视觉诱发电位等观察间充质干细胞对大鼠视神经损伤的形态学及视功能的改变。3.利用CT后处理技术,模拟内镜下视神经管及颈动脉在蝶窦内壁上的解剖位置,并通过后处理容积成像（VR）技术显示出颈内动脉和视神经在蝶窦内侧壁上的位置,有利于手术中找寻视神经管的位置,增加手术的安全性,并通过收集患者在治疗前后的视力、视神经的管径、视神经管的长度和术后并发症等临床资料,来评估手术的安全性及有效性,并介绍一种可靠的辅助术中视神经管找寻的方法。4.招募20名外伤性视神经病变患者分为两组,一组为人脐带间充质干细胞移植（h UC-MSCT）联合视神经管减压术组,另一组为单纯视神经管减压组（ETOCD组）,通过观察患者术前及术后半年内最佳视力变化、色觉、相对性瞳孔传导阻滞（RAPD）、闪光视觉诱发电位（FVEP）等指标评价疗效,并通过观察MSCT后,患者体温、过敏反应、鼻腔感染、全身感染等指标,评估干细胞治疗的安全性。研究结果1.本课题采用体外贴壁法分离人脐带来源的MSCs,该细胞表面阳性表达CD90（99.82%）、CD29（99.76%）、CD44（99.39%）和CD105（95.37%）,阴性表达CD34（0.72%）、CD31（0.57%）和CD45（0.83%）,并且该细胞能够分化成脂肪、骨和软骨,具有三系分化潜能。利用明胶海绵作为干细胞生长的三维支架,具有较高的孔隙率及不溶胀,且材料最终能自行吸收,并且MSCs在明胶海绵支架上的增殖能力在培养96h及120h要显着高于无支架材料的对照组。2.本课题成功建立了大鼠视神经半横断损伤的动物模型,从形态学观察可以看到,MSCs移植组视神经及视网膜的损伤程度较损伤对照组明显减轻;从视功能来看,在损伤后各时间点,与正常组相比损伤组FVEP的波幅明显降低,潜伏期明显延长（P<0.05）。而实验组在各时间点,与正常组相比FVEP的潜伏期显着延长（P<0.05）,而波幅值在损伤后的第1天和第3天比正常组降低（P<0.05）,但在损伤后第7天至14天时,波幅与正常组无显着改变（P>0.05）;实验组与损伤组在各时间点,波幅明显增高及潜伏期明显缩短（P<0.05）。3.在CT后处理技术的辅助下,所有患者在术中都能正确找寻到视神经管的位置,我们的结果发现,有13例患者的视力（VA）有改善,总改善率为59.1%。术后出现1例轻度的脑脊液漏,通过平卧休息后症状改善,未观察到其他严重的并发症。我们还发现视神经管的内侧壁最长（p<0.05）。视神经管颅口管径最宽,与中段、眶口管径大小有显着差异（p<0.05）。4.20例TON患者均完成6个月的随访。未发生任何局部移植干细胞所造成的不良反应事件,研究无确切的有效性结果,所观察的视功能评价指标如视力、色觉、RAPD和VEP,在两组患者之间无显着性差异（P>0.05）。研究结论1.明胶海绵支架具有较高的孔隙率,能促进h UC-MSCs在其上的增殖,在一定时间内能够自行吸收,是理想的h UC-MSCs生长的支架材料。2.h UC-MSCs局部移植能够减轻大鼠视神经半横断损伤的程度并促进损伤的修复。3.ETOCD是一种可行的、安全的、有效的和微创的治疗方法。CT后处理技术有助于术者在手术中识别视神经管的位置。而视神经管内侧壁的减压长度可能不需要完全切除整个内侧壁,特别是靠近颅口处的骨壁不一定需要完全去除。4.10例TON患者局部移植同种异基因间充质干细胞是安全的,耐受性良好。
陈爱贞[2]（2021）在《类外泌体纳米囊泡与外泌体在提高脂肪移植存活率的比较研究》文中研究表明目的:目前,自体脂肪移植在整形美容外科发挥着日益重要的作用,不仅被广泛应用于面部年轻化等美容外科,同时,因其具有操作简便、创伤小、恢复快、易于推广、生物相容性好、来源丰富、填充效果好等显着优势,也被逐渐应用于填充组织凹陷等组织器官修复重建领域。然而,传统单纯脂肪采集及注射技术存在着高吸收率、低存活率等不足,特别在大范围体表组织缺损重建等需要较大量脂肪移植时,自体脂肪移植技术的不足又限制了其进一步应用和推广。为了更好推广自体脂肪移植技术在整形美容领域的应用,已经有许多方法被提出来用来提高脂肪移植物的存活率。其中干细胞在脂肪移植领域的再生作用得到多个研究的验证。但是,干细胞增殖分化调控机制尚未完全明确、存在转化为肿瘤细胞的风险,并且近来研究显示脂肪干细胞（adipose derived stem cells,ADSCs）主要通过旁分泌途径发挥作用。ADSCs可通过分泌外泌体（exosomes,EXOs）的方式携带可溶性因子,执行生物学功能。但细胞释放的EXOs数量非常少,且获取过程繁琐。克服这一缺点的一种策略是大规模制备细胞来源的纳米级囊泡。（exosome-mimetic nanovesicles,NVs）。本研究旨在对比人工制备纳米级NVs与EXOs在提高脂肪移植存活率效果的比较研究。方法:1.利用水动力抽脂方式获取人源性脂肪组织,通过酶解分离提取P4代hADSCs。行成脂成骨分化诱导和流式细胞鉴定。2.提取P4代hADSCs衍生的NVs和EXOs。利用电镜、NTA、纳米流式和zeta进行NVs和EXOs的形态、粒径大小、表面蛋白标记和zeta电位鉴定和比较。3.体外细胞实验:荧光标记NVs和EXOs,动态追踪NVs和EXOs内化到人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）的过程。设置不同浓度梯度的NVs和EXOs,研究它们促进HUVECs增殖、迁移、血管形成的最适浓度。4.动物实验:创建裸鼠脂肪移植模型,以体外实验结果获得的最适浓度的NVs和EXOs分别与等量的水动力抽脂获得的脂肪组织混合,移植到裸鼠皮下。观察1、2、3月后处死裸鼠取出移植组织,进行体积及重量的称量对比,继而进行切片后H&E染色镜下观察移植组织内细胞形态完整性、空泡形成和纤维化表现;免疫组织化学染色（CD34、VEGF、Ki67）观察新生血管生成、增殖情况。结果:1.光学显微镜可见hADSCs呈细长纺锤状特征形态。油红O染色结果显示细胞中有大小不一的红色脂肪滴,茜素红染色可见特征性的大量红色着色区。hADSCs表面标记物表达CD29+/CD34+/CD90+/CD31-/CD45-。2.电镜结果显示NVs和EXOs均为球形双层膜结构,NTA粒径范围约为50-150nm,纳米流式分析CD9和CD81表达阳性,zeta电位为负值。3.体外实验我们发现NVs和EXOs在低浓度时,随浓度增高其促进HUVECs的增殖、迁移、血管形成能力越显着,当达到最适浓度后,继续增加浓度效果反而下降。NVs的最适浓度为60ug/m L,EXOs的最适浓度为40ug/m L。4.体内实验验证了NVs和EXOs能够有效提高脂肪移植存活率。且NVs和EXOs提高脂肪移植存活的机制主要与其促进新生血管形成有关。结论:NVs的形态、大小、膜结构与EXOs相似。在脂肪移植领域可以达到跟EXOs相当的效果。同时NVs产量高远远高于EXOs。因此,其有望替代EXOs用于脂肪移植领域,且对其他再生医学领域提供新的思路。
甄爽[3]（2020）在《微流控制备海藻酸钠-肠道类器官微球治疗炎症性肠病的研究》文中研究说明背景炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）主要包括克罗恩病（Crohn′s disease,CD）和溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）,其发病率和患病率逐年增加,并且极大地影响患者的生活质量和社会生产能力。由于发病原因尚不明确,目前对于IBD的治疗方法也很局限,主要是通过抗炎、调节机体免疫等药物治疗,但这些方法副作用较多,效果也不理想。近年来,干细胞移植治疗成为了IBD的新治疗手段,但是在临床应用中仍然存在细胞滞留、存活率低导致移植效率低等问题。微流控技术的发展为此难题的解决带来了可能。将含有肠道干细胞的肠道类器官包裹在水凝胶微球中,可提高细胞在移植过程中的存活率,提高移植效率,应具有很好的应用前景。本论文应用微流控电喷技术制备包裹有类器官的水凝胶微球应用于干细胞移植,并探究它们在治疗IBD中的作用。方法首先体外建立小鼠肠道的类器官培养体系,得到培养成熟、具有肠道上皮细胞结构和功能的肠道类器官,并构建毛细管微流控装置,以海藻酸钠（sodium alginate,Na-alg）溶液为外相,以小鼠肠道类器官与Matrigel及羧甲基纤维素钠（carboxymethylcellulose,CMC）混合相为内相,利用电喷技术将类器官及周围基质包裹于海藻酸钠内,并以2%Ca Cl2收集使海藻酸钠凝胶化,制成海藻酸钠装载类器官微球。利用光学显微镜、扫描电镜等检测微球的形貌、结构。进行微球裂解实验评估微球的裂解性能,细胞实验评估微球的生物相容性。之后在葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium,DSS）诱导的结肠炎小鼠模型中,分别用不含类器官的磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution,PBS）、含类器官的PBS以及含包裹类器官的微球的PBS进行灌肠,并通过大体观察、组织学分析、细胞因子检测等,评估这些不同方法修复DSS诱导的肠炎的效果。结果我们成功地建立了体外培养小鼠肠道类器官的体系,提取的肠道隐窝能稳定在体外培养传代,并能分化发育成各种类型的肠道上皮细胞。制备的海藻酸钠微球具有良好的球形形态和单分散性;在裂解实验中,微球在p H较低的模拟胃液中几乎不裂解,而在体外的模拟肠液中能迅速裂解,达到在特定p H环境中快速释放微球内容物的目的;细胞实验证实,微球具有很好的生物相容性,使得细胞在微球内也能正常生长;在小鼠溃疡性结肠炎模型中,通过微球的装载保护作用,类器官能够在不被破坏的情况下被运输移植到小鼠体内,并能改善小鼠结肠炎表现。结论微流控技术制备的微球能够为类器官提供保护性的环境,提高移植成功率,提供了IBD治疗的新平台。
王雪[4]（2019）在《前列腺上皮组织特征维持及分子调控机制的研究》文中进行了进一步梳理目的:前列腺组织主要由两种类型上皮细胞组成,基底和管腔上皮细胞,两者存在一定的相似性,同时又存在多种因素在两者特异的表型方面参与调控及维持。本论文旨在:（1）研究前列腺基底上皮细胞特征是如何维持的?该过程需要哪些调控因子参与?（2）研究管腔上皮细胞特征是如何维持的?前列腺管腔上皮组织的三大属性,细胞间连接、细胞极性和细胞分裂轴定位三者之间存在怎样的相互作用?方法:通过开展一系列体内体外实验考察上皮间质转化（EMT）转录调控因子在前列腺上皮组织中的表达模式及生物学功能,利用高通量单细胞RNA测序分析及体内实验检测Zeb1表达上皮细胞中富集哪些相关信号通路调节因子来维持基底上皮干细胞亚群的干性、EMT特征和基底细胞的正常发育。通过开展一系列体内体外实验考察细胞间连接蛋白E-cadherin在前列腺上皮组织中的表达模式和黏附连接缺陷小鼠的表型。通过转录组测序分析和生化实验研究管腔上皮细胞特征维持的主要因素细胞间黏附连接蛋白E-cadherin,Scribble细胞极性蛋白复合物及LGN分裂纺锤体定位复合物三者之间的相互关系。所有的统计学检验均为双侧检验。结果:（1）上皮间质转化核心转录因子Zeb1仅阳性表达在前列腺基底上皮细胞层,同时表达上皮和间质细胞相关基因,且Zeb1+基底细胞富集分布在前列腺干细胞存在的近尿道区域。（2）Zeb1+基底细胞在前列腺自发肿瘤模型小鼠和人前列腺样本中均有发现,且比例明显增多,甚至出现了Zeb1+管腔细胞。（3）相比Zeb1-基底细胞,Zeb1+基底上皮细胞具有更强的体外连续类器官形成能力和体内连续肾包膜移植能力,既可以自我更新又可以分化产生其他两种不同类型上皮细胞。（4）体内和体外Zeb1表达缺失造成基底上皮细胞数目急剧减少,基底上皮细胞正常发育过程受阻,但对管腔上皮细胞和内分泌细胞发育并未产生明显影响。（5）活化的Wnt信号通路维持了Zeb1+基底上皮细胞的干性及基底细胞层的表型。（6）成年小鼠前列腺上皮组织中E-cadherin蛋白主要表达在管腔上皮细胞之间,而在零散存在的基底上皮细胞中几乎不表达。（7）在前列腺组织发育、去势再生及成熟等不同时期,E-cadherin表达缺失导致各个组织分叶管腔上皮细胞增殖比例显着增加,促进前列腺肿瘤的发生发展,21个月龄的E-cadherin敲除小鼠基底膜破损,基底上皮细胞缺失,肿瘤细胞浸润至微环境。（8）E-cadherin敲除显着增加了管腔上皮细胞分裂纺锤体轴定位异常的比例,分裂中后期纺锤体轴发生较大角度的异常偏转。同时,E-cadherin敲除导致纺锤体轴定位核心蛋白LGN和NuMA,细胞极性蛋白PAR和SCRIBBLE三元复合物,分布弥散,特异膜定位处结合能力显着下降。（9）相比对照组,E-cadherin敲除组中与促进细胞增殖和迁移相关的信号通路存在富集且表达显着上调,与增强细胞间连接相关的基因表达显着下调,且E-cadherin敲除组与TCGA数据库中人前列腺癌样本分子表达谱具有一定的相似性。（10）分子机制方面,管腔上皮细胞黏附连接蛋白E-cadherin、极性蛋白SCRIB和分裂轴定位蛋白LGN三者之间存在内源性的相互作用,且敲低E-cadherin蛋白表达水平,显着减弱SCRIB和LGN两者之间的结合作用,敲低SCRIB蛋白表达水平,显着削弱E-cadherin和LGN两者之间的结合作用。E-cadherin和LGN蛋白两者与SCRIB蛋白的PDZ结构域特异性结合。结论:（1）前列腺基底上皮细胞层发现一小群EMT转录因子Zeb1+细胞,这群细胞既可以自我更新又可以分化产生其他不同类型上皮细胞,同时对基底上皮细胞的正常发育是必不可少的。（2）前列腺管腔上皮细胞间黏附连接、细胞极性、分裂纺锤体轴定位三者之间存在着紧密的相互作用,E-cadherin/SCRIB/LGN三元蛋白复合物的形成维持了管腔上皮细胞的特征,保证其发育分化过程正常进行和有效地预防前列腺肿瘤的发生发展。科学意义:Zeb1+上皮细胞的发现及其生物学功能的探究,为前列腺上皮组织正常发育和细胞可塑性研究奠定了一定的理论基础,为肿瘤来源细胞（肿瘤起始细胞,肿瘤干细胞）研究提供了新的线索。上皮细胞间黏附连接、细胞极性和分裂轴定位三者之间紧密的相互作用维持了正常的前列腺管腔上皮组织结构,对前列腺组织正常发育和肿瘤发生发展有了新的理论认识,对临床治疗和预后具有重要的指导意义。
王曦[5]（2019）在《miR-669b-3p调控IDO抑制CD4+T细胞增殖的体外研究》文中指出目的:通过筛选出小鼠心脏异位移植模型移植物中显着差异表达的miRNA,探讨其体外调控吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）抑制CD4+T细胞活化的机制,以期探索miRNA影响免疫排斥的机理。方法:（1）通过显微外科技术建立小鼠心脏异位移植模型,对移植后供体心脏进行miRNA芯片筛选,对有明显差异表达的miRNA进行生物信息学分析预测寻找以IDO为靶基因的miRNA,qRT-PCR法验证芯片筛选结果。（2）携带miRNA基因的慢病毒转染3T3细胞,分3组,即miRNA过表达组、miRNA沉默组及空质粒对照组。qRT-PCR法检测转染后各组miRNA表达水平;qRT-PCR法检测转染后各组IDO mRNA表达水平,Western blot法检测转然后各组IDO蛋白表达水平。（3）体外分化诱导培养BALB/c小鼠脾脏DC,携带IDO基因的慢病毒转染DC,Western blot法检测IDO蛋白表达水平。（4）免疫磁珠分选C57BL/6小鼠CD4+T细胞,与转染后DC进行单向淋巴细胞混合培养,CCK-8法检测细胞增殖情况,Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡情况。结果:（1）miRNA芯片筛选结果显示171个miRNA表达差异显着,其中93个表达显着上调,78个表达显着下调。其中miR-669b-3p上调近5倍,且生物信息学分析预测可能以IDO为靶基因,qRT-PCR验证miR-669b-3p上调4.7±0.9倍,与芯片结果一致。（2）qRT-PCR检测miR-669b-3p过表达组的miR-669b-3p表达水平为空质粒对照组的10.1±4.8倍,miR-669b-3p沉默组的miR-669b-3p表达水平为空质粒对照组的0.3±0.1倍。qRT-PCR检测miR-669b-3p过表达组的IDO mRNA表达水平为空质粒对照组的0.4±0.1倍,miR-669b-3p沉默组的IDO mRNA表达水平为对照组的3.3±1.0倍,Western blot检测转染后miR-669b-3p过表达组的IDO与内参灰度值比值为0.439±0.012,miR-669b-3p沉默组的IDO与内参灰度值比值为0.767±0.027,空质粒对照组的IDO与内参灰度值比值为0.583±0.016,各组间对比差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）体外分化诱导获得BALB/c小鼠脾脏DC,流式细胞数检测DC表面抗原CD11c、CD80、CD86、MHC II分别为89.5%±1.9%、97.0%±2.2%、92.2%±2.8%、87.1%±2.5%,符合DC表面抗原特点。Western blot检测转染后IDO+DC组IDO与内参灰度值比值为0.956±0.035,空质粒DC组为0.725±0.031,两组间对比差异有统计学意义（P<0.05）。（4）流式细胞术检测免疫磁珠法分离获得的C57BL/6小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞的阳性率为96.1±2.9%。单向淋巴细胞混合培养CCK-8法检测结果显示IDO+DC组刺激指数为9.5±0.5%,低于DC组11.5±0.6%,差异有统计学意义（P<0.05）。Annexin-V/PI检测结果显示IDO+DC组凋亡率为20.9±3.4%,高于DC组10.7±1.3%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）在小鼠心脏异位移植免疫排斥反应中出现多个miRNA显着的差异性表达,其中miR-669b-3p经生物信息学分析预测可能以IDO为靶蛋白（2）miR-669b-3p可在体外抑制细胞内IDO表达。（3）IDO可在体外抑制CD4+T细胞的增殖并增加其凋亡。（4）miR-669b-3p可能通过调控IDO影响CD4+T细胞活性。
李向禹[6]（2019）在《ADSCs来源的Exosomes提高脂肪移植存活率的研究》文中研究表明背景:近年来,自体脂肪移植（Autologous fat graft,AFT）在整形美容外科发挥日益重要的作用,作为增加待修复区域局部软组织体积的重要手段,现已被广泛应用于组织器官修复重建、丰胸、丰臀、面部脂肪填充除皱、颞部（太阳穴）凹陷、面颊部凹陷、双侧面部不对称,甚至是乳腺癌病人术后乳房重建及其他相关术式[1-3],且具备生物相容性好、获取简便、来源广泛、填充效果好和创伤小等显着优势,是目前公认较为安全和有效的手术方法[4-6]。但高吸收率、低存活率等不足[7],限制了该技术的进一步应用和推广。因此脂肪移植手术的关键就是提高自体移植脂肪成活率。脂肪干细胞（Adipose-derived Stem Cells,ADSCs）是一种来源于脂肪组织并且具有多向分化潜能和增殖能力的间充质干细胞。目前已有研究证实,ADSCs在提高移植脂肪存活率等方面发挥着重要作用。它主要通过促进VEGF、bFGF、MMP-9、PDGF、TGF-β等促血管生成因子的分泌,以及直接分化为新生血管内皮细胞及血管周围细胞,使得移植脂肪能够在受区更快获得血液供应,减少缺血时间[7-10]。ADSCs在提高移植脂肪存活率方面具有较为理想的作用和效果,但是目前我国甚至全世界范围内干细胞的应用仍然面临着诸多瓶颈和障碍,例如干细胞分裂分化不可控的可能、法律法规及社会伦理道德的限制。因此,如何找到一种既能发挥干细胞同样的作用,又不含有完整的干细胞体的解决方案就成为了一个亟需解决的问题。细胞的分泌功能是普遍存在的,同时细胞分泌的因子、囊泡以及信号分子等在微环境调控以及生理改变中都发挥着重要的作用,外泌体（exosomes）也是细胞所分泌的一种盘状囊泡。Exosomes呈盘状,直径30150 nm,它的表面富集胆固醇、神经鞘磷脂、神经酰胺等脂类物质,其内载有蛋白质、mRNA、microRNA等生物信息,在细胞微环境中发挥重要作用[11]。1996年在B淋巴细胞中也发现了exosomes,且这些exosomes有着刺激T细胞的增殖以及抑制肿瘤的生长等重要的生物学活性[12]。随后研究人员们发现除了在体内活细胞,甚至在体外培养的不同类型的细胞中也可以检测到exosomes,多种细胞无论在正常或者病理状态下均可以分泌exosomes[13]。现有体内和体外研究发现,正常细胞来源或干细胞产生的exosomes能起到修复甚至促进再生的作用[14]。在exosomes相关内容研究中,关于exosomes与血管再生方面的研究也是其中重要的一部分。相关研究表明正常祖细胞或间充质干细胞、脐带干细胞来源的exosomes同样含有促血管生成作用的相关介质,包括VEGFA、CXCL8、IL-6、FGF2以及miR-23a等。在皮肤损伤修复、骨组织再生、末端肢体缺血和血管损伤修复在内的领域,已有治疗研究利用exosomes所含促血管生成因子促进病灶区域血供恢复。研究表明exosomes有能力改变包括增生、迁移、内皮细胞的管道构成在内的血管生成步骤以及提高血管生成相关基因表达和相关蛋白的分泌[15-26]。目的:利用人脂肪干细胞来源外泌体的促血管生成作用来提高移植脂肪血供水平,以提高移植脂肪组织的存活率。方法:本研究通过使用水动力设备自体脂肪移植手术中获取的脂肪组织提取ADSCs。第一部分通过经典的差速离心法提取ADSCs来源的exosomes,并通过多种途径和方法加以验证该exosomes来源的可靠性和生物性。同时为了更进一步的分析ADSCs来源exosomes促进脂肪移植血管再生的作用;第二部分计划通过模拟出脂肪移植的过程,在裸鼠背部对称两翼皮下注射移植脂肪组织,进一步探讨ADSCs来源的exosomes对脂肪移植存活率是否有促进作用以及其促进脂肪移植存活率的机制。根据上述的实验结果,我们期望能够得到一种更为安全、有效的提高脂肪移植存活率的方法,从而可以将exosomes广泛的应用于基础研究以及临床实验,为进一步实际运用于临床手术及开发新的医疗技术做铺垫。结果:hADSCs-exosome可通过调节区域内的VEGF等相关表达的水平来影响移植脂肪组织血管生成,以促进移植组织的存活。结论:脂肪干细胞来源外泌体能促进移植脂肪的血管生成,加速移植脂肪组织血管化,促进移植脂肪组织的存活率。
李海丽[7]（2019）在《p53N236S对端粒功能异常和环境毒性因子所致衰老的调控作用》文中研究说明衰老是人体生理功能逐渐消退的一个生物学过程,机体在衰老过程中伴随着因退行性变化导致的多种疾病,如心血管疾病、肿瘤等。随着人类生活水平的升高,追求健康长寿的生活越来越成为人们关心的问题。近些年来,全球环境日趋恶劣,环境中持续形成的自由基（环境毒性因子）不断的刺激人体,特别是老年群体的健康,进而对其寿命造成了不良的影响。因此,环境毒性因子（如过氧化物等氧化损伤因素）及遗传因素的持续影响,更促进了机体的衰老及其他衰老相关疾病的发生。人类早老性疾病（progeroid disease）是衰老研究的重要模型。Werner早老综合征（Werner Syndrome,WS）是由RecQ解旋酶家族Wrn基因突变引起人类常染色体隐性遗传病。由于小鼠细胞的端粒长度较长,因此在建立Wrn综合征的小鼠模型时,需要同时敲除Wrn和端粒酶,并繁殖小鼠到第五代（G5DM）,才能表现出人类Wrn综合征的早衰表型。这种G5代Wrn综合征小鼠的胚胎成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblasts,MEFs）在体外培养中迅速衰老,持续培养可导致部分细胞逃逸衰老。前期我们在研究G5DM细胞逃逸衰老时,发现了抑癌基因p53蛋白发生了p53N236S（简称p53S）突变,p53S是细胞逃逸衰老,并重新启动端粒维持机制的关键。通过比较研究G1-G5TM（Terc、Wrn、p53S三基因突变的小鼠,TM）与G1-G5DM（Terc、Wrn双基因突变,DM）小鼠寿命、肿瘤发生率、组织器官衰老表型等揭示p53S对Wrn综合征导致的动物水平衰老的调控作用,主要结论如下:1)p53S对Wrn综合征小鼠寿命的影响。在小鼠端粒较长的早期代数,G1-G3DM小鼠的寿命要长于G1-G3TM。进一步分析发现,G1-G3TM小鼠早期死于肿瘤,导致寿命缩短;在小鼠端粒较短的晚期代数,G4-G5DM的寿命则短于G4-G5TM,同时在G4-G5TM小鼠中肿瘤发生率很低。这些数据提示,p53S对衰老相关表型的调控作用取决于端粒的长度。2)p53S对Wrn综合征小鼠体内组织器官衰老相关退行性变化的影响。G1-G3代的小鼠,DM与TM的小鼠体型、外观没有明显的区别,而G4、G5DM小鼠的体型明显小于TM,提示p53S缓解了Wrn综合征导致的小鼠生长迟缓。G5DM小鼠的睾丸内部结构严重空泡状,初/次级生精小管形态消失,而G5TM小鼠睾丸的内部结构正常。与DM小鼠相比,G5TM小鼠小肠绒毛细胞的增殖能力明显提高,G5TM小鼠的骨骼密度明显高于G5DM。这些数据表明,p53S可以延缓Wrn综合征的衰老表型,阻止衰老进程导致的器官组织退行性变化。3)在G1-G3TM小鼠中出现肿瘤和多囊肾（PKD）伴随发生。对肿瘤组织和PKD肾脏组织的RNA-Seq数据分析发现,肿瘤和PKD组织都激活了线粒体能量代谢通路、补体通路、脂质代谢通路,提示这些通路的调控可能是导致肿瘤和PKD的共同因素。我们进一步发现,p53S可以下调Pkd1/2,Pkhd1和Hnf1b,最终导致PKD的发生。这些数据发现了p53突变获得了调控PKD通路的新功能,首次在小鼠水平证实了肿瘤与PKD发生的关联性。为了进一步研究p53S调控Wrn综合征的衰老作用的分子机制及其对端粒长度的调控,我们利用G1,G3,G5DM和TM的MEFs,从细胞水平分析p53S调控Wrn综合征的分子通路。结果发现:1)p53S通过调控细胞周期,增殖,染色体整倍性等,来干预Wrn综合征诱导的衰老表型。p53S缓解了Wrn综合征诱导的细胞生长抑制。在p53S和G1TM细胞中存在G2/M阻滞,染色体出现多倍体,断裂,交叉等畸变现象。细胞凋亡的数据表明,G1TM,G3TM细胞的凋亡信号强于G1DM,G3DM细胞。根据端粒长度的数据,我们得出p53S启动了维持Wrn综合征端粒延长的替代机制,缓解了因端粒缩短导致的衰老。端粒延伸机制通常与肿瘤发生密切相关,我们仍对G1-G5TM细胞的成瘤性进行验证,结果TM细胞的致瘤性较低。综上所述,p53S通过增强细胞增殖能力,调控细胞周期及染色体整倍性,启动端粒延长机制来缓解Wrn综合征诱导的端粒功能异常所致细胞衰老表型。2)p53S通过调控DNA损伤、DNA复制及细胞周期相关通路来影响Wrn综合征细胞的衰老进程。为了研究p53S调控Wrn综合征细胞衰老进程的分子通路,我们收集了WT,p53S/S,G1DM,G3DM,G5DM,G1TM,G3TM,G5TM的MEFs,进行了RNA-seq分析。我们发现在G1-G5TM细胞中野生型p53诱导的DNA损伤应答通路活性逐渐增强。同时,DNA修复通路活性在G1-G5TM细胞中也逐渐增强,表明p53S促进了DNA损伤修复。另外,另一癌基因Rb调控的细胞周期相关基因在p53S和G1TM中被显着富集。p53S促进DNA复制和修复相关蛋白的高表达,可能激活DNA损伤修复、端粒维持等机制,进而保护细胞功能的正常运行。数据提示,p53S在端粒损伤较弱时（G1）增强了损伤应激反应。根据ssGSEA数据分析结果,我们对p53S细胞中G2/M周期调控相关基因和蛋白的表达验证,数据显示:相比于WT和p53null,在p53S细胞中Wee1,Birc5,Brca2,Cdc2,Cdk6,PolE,PolQ,Bard1,Gins2,Ube2C,Chk2和Cdc25C明显高表达;Western blot数据表明,相比于WT和p53null细胞,在p53S细胞中蛋白CDC25,p-CDC25,Weel,p-Cdc2,Cdk2和Cdk6高表达,同时DNA复制,修复和损伤相关的蛋白PolE,Rad51,Gins,Bard1,Survivin,γ-H2AX,CHK1/2和p-CHK1/2在p53S中高表达。数据证实,p53S通过G2/M监测点和有丝分裂纺锤体监测点调控细胞周期和染色体的畸变,其生物学后果有待进一步研究。最后,我们初步探索p53S调控细胞应答环境氧化应激的作用。结果表明,H2O2处理诱导野生型（WT）细胞出现大量的衰老细胞,而携带p53S突变的细胞则较少发生衰老,提示p53S可能影响细胞氧化应激导致的衰老进程,其分子机制有待进一步研究。综上所述,我们发现突变p53S可能通过调控DNA损伤修复、启动细胞端粒维持机制等,缓解端粒损伤诱导的衰老进程,从而延缓Wrn综合征小鼠的衰老进程。我们在机体整体水平上验证了衰老与肿瘤相互制约,相互平衡的调节机制,为临床衰老相关疾病及肿瘤的预防和治疗提供新的思路。
夏海兵[8]（2019）在《脂肪间充质干细胞外泌体缓解阿霉素所致急性心肌损伤的研究》文中认为背景:蒽环类药物是临床常用的化疗药,心肌损伤是此药导致的主要损伤,也是限制其应用的重要因素。因此,如何减轻蒽环类药物造成的心肌损伤,是应用此药物亟待解决的问题。在组织损伤研究中,干细胞及其衍生的外泌体（Exosomes,EXO）是近些年研究发现的治疗组织器官损伤较有前景的对象,且成体间充质干细胞的发现也极大的拓展了EXO的来源。据报道显示,EXO在组织损伤中不仅可发挥出类似干细胞的保护效应,且更具有生物安全性优势,但其具体的机制仍在讨论之中。目前研究证实,干细胞EXO可能参与了微环境的调控,从而发挥治疗作用。本实验旨在初步探讨脂肪干细胞来源的EXO,对蒽环类药物诱导的心肌损伤产生保护作用的效应和可能的机制。目的:初步探究脂肪间充质干细胞（ADSCs）衍生的EXO对阿霉素（Doxorubicin,DOX）造成的急性心肌损伤的缓解作用及其分子机制,为其应用于临床治疗蒽环类药物导致的心脏损伤提供参考。材料与方法:从23周龄C57BL/6小鼠腋部分离脂肪组织,用于脂肪干细胞的初步分离;流式细胞法鉴定分离细胞表面（CD29、CD34、CD44、CD45、CD90、CD105）蛋白的表达;三系（成脂、成骨、成软骨）分化鉴定分离细胞的分化能力。采用差速加超速离心法获得EXO;光散射法测量粒径、透视电镜观察形态、免疫印迹法检测蛋白标志物（CD9、CD63、CD81、TSG101）。DOX诱导的C57BL/6小鼠心肌损伤模型分为:PBS组、DOX组、（DOX+EXO）组,通过检测不同组小鼠心电图和心肌标志物蛋白的变化,来探究脂肪干细胞来源的EXO对DOX诱导的急性心肌损伤的保护作用。心肌细胞（H9C2）实验:通过检测不同分组的ROS水平、凋亡差异、MDA和LDH的量,探究脂肪干细胞EXO缓解DOX诱导的急性心肌损伤的相关分子机制。结果:1、分离的细胞长满后呈现出区域性的旋涡状形态;分化诱导可以形成成脂肪滴、骨组织和软骨组织;细胞表面CD29、CD90、CD105、CD44表达为阳性,CD34、CD45表达为阴性,表明分离出的细胞是符合脂肪间充质干细胞特征的;2、透视电镜显示分离的囊泡状物质呈现一侧凹陷的杯状;光散射检测可见这些囊泡状物质的粒径分布宽度在50200纳米;免疫印迹检测CD9、CD63、CD81、TSG101表达为阳性,符合文献中描述的EXO的特征;3、动物实验中,（DOX+EXO）组小鼠的右心房压力显着低于DOX组（P<0.05）,QRS和QTcB有一定的降低,但无统计学差异;血清样本中,（DOX+EXO）组小鼠的cTnT低于DOX组（P<0.05）;心脏切片HE染色、TUNEL染色和caspase-3免疫组化显示（DOX+EXO）组相对于DOX组有一定缓解;4、细胞实验显示EXO可以被心肌细胞摄入;一定量的EXO可以在一定程度上降低DOX导致的心肌细胞ROS的产生,减少凋亡。结论:适量的EXO可以在一定程度上减轻DOX诱导的小鼠急性心肌损伤,减轻心律紊乱、保护心功能。其可能的分子机制是通过减轻氧化应激引起的的心肌炎症和细胞凋亡坏死,具有潜在的临床应用价值。
宋杨,杨珺[9]（2018）在《干细胞制剂车间设计探讨》文中进行了进一步梳理干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,由于其具有再生各种组织器官和人体的潜在功能,医学界称为"万用细胞"。1963年,Ernest和James首次在血液中发现了一类具有分化为血液组分细胞的祖细胞,并将这一类细胞命名为多能干细胞,成为人类历史上第一次被发现的干细胞。1967年,Thomas使用造血干细胞,对白血病患者成功进行了干细胞移植,并于1990年获得诺贝尔生理医学奖。至
李晶[10]（2017）在《胆固醇代谢与造血干细胞的增殖分化和短时高温致红细胞损伤的探讨》文中研究指明本论文由两部分组成,第一部分是细胞胆固醇代谢与造血干细胞的增殖分化研究,第二部分是短时高温致红细胞损伤的机制研究。第一部分:目的通过pLKO.1-NPC1/NPC2 shRNA重组慢病毒感染EML（erythroid myeloid lymphoid,EML）细胞获得NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞模型,进而探讨NPC1、NPC2对EML细胞增殖分化的影响。方法通过NPC1 shRNA、NPC2 shRNA重组慢病毒感染EML细胞获得NPC1、NPC2基因有效沉默的EML细胞模型。利用该模型以Filipin染色检测NPC1、NPC2基因敲低后对EML细胞内胆固醇分布的影响,以CCK-8和台盼蓝染色进行增殖检测,以流式细胞术检测NPC1、NPC2基因沉默后EML细胞干性标志物CD34、sca-1、c-kit及TER-119、CD11b、B220的改变,利用Western blot分析SCF刺激细胞后c-kit磷酸化的改变。结果成功构建NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞模型,NPC1、NPC2基因在mRNA和蛋白水平表达均显着降低（P<0.01）。NPC1、NPC2敲低的EML细胞中出现胆固醇蓄积,且在NPC1敲低的EML细胞模型中胆固醇蓄积更显着。沉默NPC1、NPC2基因后使得EML细胞增殖减慢（P<0.01）,并且能够降低EML细胞CD34、sca-1和TER-119、B220的阳性率（P<0.01）。经SCF刺激后NPC1基因沉默的EML细胞中c-kit的磷酸化降低显着（P<0.01）,但在NPC2基因沉默的EML细胞中c-kit磷酸化的改变并无统计学差异。结论胆固醇转运相关基因NPC1通过调节细胞胆固醇流动参与了EML细胞的增殖和分化调控。造血干细胞（hematopoietic stem cells,HSCs）是机体具有组织特异性的一群细胞,为了维持正常的造血功能其可通过不对称分裂（asymmetric division）在调节自身数量稳定的同时生成多系和/或单系造血祖细胞（hematopoietic progenitor cells,HPCs）。正常生理情况时,机体HSCs的含量和各系造血祖细胞的数量维持在一个动态平衡的状态。当这个稳定平衡状态被打破,HSCs的量急剧增多或哪一系或多系造血祖细胞数量发生显着改变都将引发疾病。究其机制,过去大量的研究主要聚焦在免疫系统。近年来,有研究显示细胞内胆固醇的流出对HSCs和HPCs稳态维持起着重要作用。三磷酸腺苷结合蛋白ABCA1和ABCG1通过把HSCs和HPCs内胆固醇转运至高密度脂蛋白（high-density lipoprotein,HDL）而将其运出细胞,当ABCA1和ABCG1缺失时上述胆固醇转运途径障碍,将使得造血祖细胞恢复造血功能,同时出现髓外造血。此外,巨核细胞祖细胞（megakaryocyte progenitor cells,MPCs）内胆固醇外流障碍将引发血小板增多综合征,与ABCG1高度同源的三磷酸腺苷结合转运蛋白ABCG4在巨核细胞祖细胞中的缺失将使得胞内胆固醇转运至HDL障碍,进而引发细胞膜促血小板生成素（thrombopoietin,TPO）受体（c-MPL）表达增多,最终引发疾病。在动脉粥样硬化的小鼠在体模型中载脂蛋白E（apo lipoprotein E,ApoE）通过影响ABCA1和ABCG1的功能而调节细胞内胆固醇流出进而调控HSCs增殖且与单核细胞增多相关。除此之外,NPC1、NPC2基因在胆固醇流出细胞的过程中同样起着关键作用。NPC1基因的缺失将引发以胆固醇转运障碍为特征的尼曼匹克病（NPC1）,患者主要表现为神经元的大量胆固醇聚集和神经功能障碍,同时患者也存在造血功能障碍,但是机制不清楚,还需要探讨。为了探索NPC1、NPC2基因调节造血干细胞生物学特性,特别是增殖和分化特征,本课题以造血干细胞系EML（erythroid myeloid lymphoid）作为模型,通过基因表达分析、基因功能分析研究NPC1、NPC2基因对EML细胞增殖和分化的调控及其机制。首先我们根据EML细胞干性标志sca-1不同水平的表达,通过细胞流式技术分离sca-1-high、sca-1-inter、sca-1-low 3个细胞亚群,检测各亚群细胞中NPC1和NPC2基因的表达,分析NPC1、NPC2基因表达与EML细胞干性的关联。其次,通过基因沉默技术敲降（knock-down）EML细胞NPC1和NPC2基因,分析NPC1和NPC2对EML细胞增殖和分化的影响。最后,通过分析NPC1和NPC2基因对SCF介导c-kit磷酸化的影响,探讨NPC1和NPC2调节细胞增殖分化的机制。本研究得到的主要结果有:在EML细胞中NPC1和NPC2基因的表达与sca-1呈正相关。利用NPC1、NPC2基因慢病毒成功构建了NPC1、NPC2基因敲低的EML细胞模型。Filipin染色结果显示,与对照相比,在NPC1和NPC2基因沉默的EML细胞中胆固醇显着蓄积,且NPC1基因沉默的EML细胞中胆固醇蓄积更显着。NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞生长明显慢于对照细胞（P<0.01）,表明NPC1和NPC2基因参与了EML细胞的增殖调控。同时,NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞CD34和sca-1的阳性率显着降低（P<0.01）,提示NPC1、NPC2沉默以后能够使EML细胞的分化能力降低。在几种细胞中粒系标志物CD11b所占比例均较低,且差异无统计学意义,说明NPC1、NPC2基因敲低后对EML细胞向粒系的分化并无影响;而在NPC1沉默的EML细胞中TER-119所占比例显着低于其余3种细胞（P<0.01）,说明NPC1基因的沉默能够抑制EML细胞向红系分化;B220所占比例在NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞中显着降低（P<0.01）,表明沉默NPC1、NPC2基因能够抑制EML细胞向淋巴系分化。SCF刺激细胞后,NPC1基因沉默的EML细胞c-kit磷酸化受到明显抑制（P<0.01）,但在NPC2基因沉默的EML细胞中c-kit的磷酸化改变并无统计学差异。提示,NPC1基因参与了EML细胞c-kit的磷酸化调控。利用细胞胆固醇转运阻断剂U18666A、细胞膜胆固醇剥离剂beta-CD、游离胆固醇处理EML细胞后发现,经U18666A、beta-CD处理后EML细胞c-kit的磷酸化显着降低（P<0.01）,与NPC1基因沉默对c-kit磷酸化的影响一致;并且,当联合使用beta-CD和胆固醇处理后相较于前者,EML细胞c-kit的磷酸化有所升高（P<0.01）,提示NPC1对SCF介导的EML细胞c-kit磷酸化的影响是通过改变细胞膜胆固醇含量实现的。第二部分:红细胞（Red blood cells,RBC）是哺乳动物血液中数量最多的血细胞,RBCs除了是氧气运输的主要媒介还是重要的免疫细胞。RBCs生成于骨髓,在体内,新生的RBCs平均寿命为120d,并将经历轻龄、中龄、老龄3个阶段,最终衰老的RBCs被机体免疫系统清除,或是在经过肝脏时被枯否细胞（Kupffer Cells）分解为胆汁。但在病理状态下RBCs的衰老死亡将加剧。细胞生物学研究发现,高温能够引起细胞质膜变形,形成凸起状泡。在一定程度上,泡的形成是自适应的,从而增加细胞的存活率。但是细胞受热越严重起泡程度越大,并且细胞死亡率越高。广泛的数据显示,高热、热射病时体温升高治疗不及时或治疗不完善将导致红细胞减少甚至贫血,但究其机制还尚不清楚,亟待进一步研究。为了观察短时高温引起红细胞结构和功能的变化,探讨高热（中暑）引起红细胞损伤的机制。本研究取健康志愿者的静脉血,分别在37℃（对照组）和42℃（实验组）下孵育10 min,Percoll密度梯度离心法分离不同细胞年龄的红细胞,测定其Zeta电位值,分析不同年龄红细胞所占比例的改变;同时,我们利用流式细胞仪检测细胞大小、细胞凋亡以及红细胞内活性氧（ROS）的变化,探讨高温对红细胞衰老、凋亡的影响。本研究得到的主要结果有:与37℃相比,42℃下实验组的红细胞表面电荷显着降低（P<0.05）,红细胞体积显着减小（P<0.05）,凋亡显着增加（P<0.05）,细胞内ROS显着增加（P<0.05）。最终发现,短时高温能引起红细胞理化性质的改变,进而导致红细胞衰老、凋亡加剧,这可能是急性高热（中暑）引起血液系统病理改变的机制。
二、造血干细胞移植中无菌洁净外环境的监控（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、造血干细胞移植中无菌洁净外环境的监控（论文提纲范文）
（1）人脐带间充质干细胞联合改良视神经管减压术治疗外伤性视神经病变的临床转化研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 人脐带间充质干细胞的分离、鉴定及其明胶海绵支架修复材料的构建 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 人脐带间充质干细胞对大鼠视神经半横断损伤模型影响的研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 CT后处理技术辅助视神经管减压术治疗外伤性视神经病变的研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 临床资料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 人脐带间充质干细胞联合改良视神经管减压术治疗外伤性视神经病变的临床研究 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 间充质干细胞临床应用的前景及挑战 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 学位论文自评表 |
| 致谢 |
（2）类外泌体纳米囊泡与外泌体在提高脂肪移植存活率的比较研究（论文提纲范文）
| 附录一 英文缩写词汇表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 脂肪组织 |
| 1.2 主要试剂及药品 |
| 1.3 主要仪器及器械 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 1.5 各种溶液的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 人脂肪干细胞获取、培养、诱导及鉴定 |
| 2.2 人脂肪干细胞来源类外泌体纳米囊泡和外泌体的提取、鉴别及分析 |
| 2.3 人脂肪干细胞来源类外泌体纳米囊泡和外泌体的体外实验 |
| 2.4 人脂肪干细胞来源类外泌体纳米囊泡和外泌体的体内实验 |
| 2.5 资料及数据统计分析 |
| 结果 |
| 1 人脂肪干细胞获取、培养、诱导及鉴定 |
| 1.1 人脂肪来源干细胞 |
| 1.2 人脂肪来源干细胞的成脂成骨分化诱导检测 |
| 1.3 人脂肪来源干细胞表面标记物鉴定 |
| 2 人脂肪干细胞来源类外泌体纳米囊泡和外泌体的提取、鉴别及分析 |
| 2.1 人脂肪干细胞来源类外泌体纳米囊泡和外泌体提取 |
| 2.2 人脂肪干细胞来源类外泌体纳米囊泡和外泌体透射电镜检测 |
| 2.3 纳米流式分析NVs和 EXOs的表面分子标记物 |
| 2.4 NVs和 EXOs纳米追踪分析(NTA)检测 |
| 2.5 NVs和 EXOs的 zeta电位检测 |
| 2.6 相同细胞数产生的NVs和 EXOs总蛋白含量和颗粒数的比较 |
| 3 人脂肪干细胞来源类外泌体纳米囊泡和外泌体的体外实验 |
| 3.1 NVs和 EXOs的体外示踪实验 |
| 3.2 CCK-8 法检测不同浓度的NVs和 EXOs对人脐静脉内皮细胞的增殖能力的影响 |
| 3.3 划痕实验检测不同浓度的NVs和 EXOs对人脐静脉内皮细胞的迁移能力的影响 |
| 3.4 血管形成实验检测不同浓度的NVs和EXOs对人脐静脉内皮细胞的血管形成能力的影响 |
| 4 人脂肪干细胞来源类外泌体纳米囊泡和外泌体的体内实验 |
| 4.1 脂肪移植裸鼠模型的大体观察 |
| 4.2 移植脂肪组织重量和体积的测量与比较 |
| 4.3 移植脂肪组织HE染色 |
| 4.4 移植脂肪组织的免疫组化分析 |
| 讨论 |
| 1 人脂肪间充质干细胞及其来源NVs和 EXOs的特性和鉴定 |
| 2 NVs和 EXOs在细胞水平的验证及其发挥作用的有效浓度 |
| 3 NVs和 EXOs在动物水平的验证及其机制探索 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 类外泌体纳米囊泡与外泌体在提高脂肪移植存活率的比较研究 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）微流控制备海藻酸钠-肠道类器官微球治疗炎症性肠病的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 IBD的发生机制 |
| 1.1.1 遗传因素 |
| 1.1.2 环境因素 |
| 1.1.3 肠道微生物 |
| 1.1.4 免疫机制 |
| 1.2 IBD的治疗现状 |
| 1.2.1 IBD的传统药物治疗 |
| 1.2.2 粪便微生物群移植治疗IBD |
| 1.2.3 干细胞移植治疗IBD |
| 1.3 肠道类器官在IBD诊治中的发展 |
| 1.3.1 肠道干细胞:治疗IBD的干细胞领域新星 |
| 1.3.2 ISC移植待解决的问题 |
| 1.4 药物传递的微流控技术 |
| 1.4.1 药物递送系统的构建 |
| 1.4.2 药物封装与释放 |
| 1.4.3 器官芯片 |
| 1.5 本论文的主要研究工作 |
| 参考文献 |
| 第二章 肠道类器官体外培养体系的建立研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 主要实验材料 |
| 2.2.2 主要实验仪器 |
| 2.2.3 小鼠肠道隐窝的提取及分离 |
| 2.2.4 小鼠肠道隐窝培养 |
| 2.2.5 肠道标志物的测定 |
| 2.2.6 类器官的传代 |
| 2.2.7 统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 小鼠肠道隐窝的提取及分离 |
| 2.3.2 小肠类器官体外培养体系的建立 |
| 2.3.3 小肠类器官中肠道标志物的测定 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 微流控制备海藻酸钠-小肠类器官微球的研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 主要实验材料 |
| 3.2.2 主要实验仪器 |
| 3.2.3 毛细管微流控装置的构建 |
| 3.2.4 电喷溶液的配制 |
| 3.2.5 静电喷射装置的构建 |
| 3.2.6 电喷装置的使用与微球的制备及表征 |
| 3.2.7 海藻酸钠微球的细胞相容性实验 |
| 3.2.8 海藻酸钠微球的溶胀和裂解实验 |
| 3.2.9 统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 电压、液体流速及接受距离对微球直径的影响 |
| 3.3.2 海藻酸钠微球的表征 |
| 3.3.3 海藻酸钠微球的细胞相容性 |
| 3.3.4 海藻酸钠微球的溶胀和裂解 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 海藻酸钠-类器官微球治疗小鼠炎症性肠病 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 主要实验材料 |
| 4.2.2 主要实验仪器 |
| 4.2.3 DSS诱导小鼠结肠炎模型条件优化 |
| 4.2.4 动物模型的构建与病理指标评估 |
| 4.2.5 小鼠粪便的隐血检测 |
| 4.2.6 微球的制备及灌肠实验 |
| 4.2.7 收取小鼠肠道组织标本 |
| 4.2.8 肠道特异性标志物的测定 |
| 4.2.9 肠道组织中炎症因子的测定 |
| 4.2.10 肠道病理组织标本的HE染色 |
| 4.2.11 统计分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 DSS诱导小鼠结肠炎模型的建立条件 |
| 4.3.2 建立DSS诱导小鼠结肠炎模型 |
| 4.3.3 海藻酸钠-类器官微球对结肠炎小鼠疾病表型的影响 |
| 4.3.4 海藻酸钠-类器官微球对结肠炎小鼠肠道上皮细胞的影响 |
| 4.3.5 海藻酸钠-类器官微球对结肠炎小鼠肠道组织病理学的影响 |
| 4.3.6 海藻酸钠-类器官微球对结肠炎小鼠肠道炎症因子的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 全文总结 |
| 博士期间发表论文情况 |
| 博士期间获得奖项情况 |
| 致谢 |
（4）前列腺上皮组织特征维持及分子调控机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 存在的科学问题 |
| 1.3 研究技术路线 |
| 1.4 科学意义 |
| 第一部分 前列腺基底干细胞维持基底上皮细胞特征和正常发育 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 上皮组织概述 |
| 1.2 基底上皮细胞特征维持中的EMT机制及分裂模式 |
| 1.3 EMT特征维持的信号通路 |
| 第二章 实验材料与操作方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物及人组织样本 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器耗材 |
| 2.2 实验操作方法 |
| 2.2.1 小鼠基因型鉴定 |
| 2.2.2 原代细胞获得及细胞流式分选 |
| 2.2.3 细胞甩片及免疫荧光染色 |
| 2.2.4 冰冻切片及免疫荧光染色 |
| 2.2.5 石蜡切片及其H&E染色 |
| 2.2.6 质粒抽提实验 |
| 2.2.7 病毒制备及目的细胞感染 |
| 2.2.8 类器官培养及功能检测 |
| 2.2.9 泌尿生殖窦间质细胞分离及培养 |
| 2.2.10 原代前列腺上皮细胞分离及肾包膜移植实验 |
| 2.2.11 谱系示踪实验 |
| 2.2.12 单细胞RNA测序和数据分析 |
| 2.2.13 实时定量聚合酶链式反应 |
| 2.2.14 蛋白免疫印迹 |
| 2.2.15 统计学分析 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 发现EMT转录因子表达的前列腺上皮细胞 |
| 3.2 高通量单细胞RNA-seq发现Zeb1~+前列腺上皮细胞群 |
| 3.2.1 获得前列腺基底上皮单细胞 |
| 3.2.2 获得高质量单细胞RNA测序数据 |
| 3.2.3 单细胞RNA-seq数据分析得到Zeb1~+基底上皮细胞亚群 |
| 3.3 Zeb1~+上皮细胞与前列腺上皮组织之间的相关性研究 |
| 3.3.1 成功构建Zeb1 荧光报告小鼠 |
| 3.3.2 Zeb1 在前列腺上皮细胞中的分布及表达模式 |
| 3.4 Zeb1~+前列腺基底上皮细胞的生物学功能研究 |
| 3.4.1 体外Zeb1~+基底上皮细胞类器官形成实验 |
| 3.4.2 体内Zeb1~+基底上皮细胞肾包膜移植实验 |
| 3.4.3 体内谱系示踪Zeb1~+基底上皮细胞多向分化的命运 |
| 3.4.4 Zeb1 保证基底上皮细胞正常发育 |
| 3.5 Wnt信号通路正向调控Zeb1~+基底上皮细胞 |
| 3.5.1 单细胞RNA-seq数据显示Zeb1~+基底上皮细胞富集Wnt信号通路 |
| 3.5.2 qRT-PCR实验结果支持单细胞RNA-seq数据分析结果 |
| 3.5.3 APCmin模型小鼠中Zeb1~+基底上皮细胞比例显着增多 |
| 3.6 研究模型图及小结 |
| 第四章 实验结论、讨论及展望 |
| 4.1 实验结论 |
| 4.2 讨论和展望 |
| 4.3 科学意义 |
| 第二部分 细胞连接、细胞极性和细胞分裂轴定位共同维持前列腺管腔上皮细胞的组织特征 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 上皮细胞极性的建立及维持 |
| 1.1.1 上皮细胞极性组成-PAR complex |
| 1.1.2 上皮细胞极性组成-Scribble complex |
| 1.1.3 上皮细胞三种极性蛋白复合物之间的互作及应用 |
| 1.2 上皮细胞间连接的建立及功能 |
| 1.3 细胞分裂模式基础知识 |
| 1.3.1 细胞分裂模式相关分子调控机制 |
| 1.3.2 细胞分裂模式研究的应用 |
| 第二章 实验材料与操作方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物、细胞系、质粒 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器耗材 |
| 2.2 实验操作方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 石蜡切片及其免疫组织化学染色 |
| 2.2.3 细胞增殖 |
| 2.2.4 细胞实时示踪实验 |
| 2.2.5 内源性免疫共沉淀 |
| 2.2.6 GST-pull down实验 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 黏附连接蛋白集中表达及分布在成年小鼠前列腺管腔上皮细胞间 |
| 3.1.1 qRT-PCR结果显示黏附连接蛋白集中分布在前列腺管腔上皮细胞间 |
| 3.1.2 免疫荧光染色结果表明黏附连接蛋白集中分布在前列腺管腔上皮细胞间 |
| 3.2 黏附连接E-cadherin缺失促进前列腺管腔上皮细胞增殖能力及肿瘤发生发展 |
| 3.2.1 体外E-cadherin表达下调促进前列腺上皮细胞增殖能力 |
| 3.2.2 E-cadherin前列腺特异性敲除小鼠模型构建及表型探究 |
| 3.3 黏附连接蛋白E-cadherin表达缺失导致细胞分裂轴定位异常 |
| 3.3.1 体外黏附连接蛋白表达下调严重影响细胞分裂轴正确定位 |
| 3.3.2 体内黏附连接缺陷造成管腔上皮细胞分裂轴偏转随机化 |
| 3.3.3 体外黏附连接蛋白表达下调显着减弱蛋白LGN-NUMA的结合能力 |
| 3.3.4 体内黏附连接缺失导致LGN蛋白复合物细胞膜分布异常 |
| 3.4 黏附连接蛋白E-cadherin丢失导致细胞极性蛋白复合物弥散分布 |
| 3.4.1 体外敲低黏附连接蛋白表达水平显着削弱蛋白DLG-SCRIB的结合能力 |
| 3.4.2 体内黏附连接缺失造成细胞极性蛋白复合物分布异常 |
| 3.5 考察细胞连接、细胞极性和分裂轴定位三者间的互作及分子机制 |
| 3.5.1 RNA-seq分析结果支持细胞连接、极性和分裂轴定位之间存在紧密互作 |
| 3.5.2 增殖活跃的E-cadherin蛋白表达缺失的管腔上皮细胞更易发生肿瘤转化 |
| 3.5.3 E-cadherin/SCRIB/LGN三元复合物的形成维持前列腺管腔上皮组织结构 |
| 3.6 研究模型图及小结 |
| 第四章 实验结论、讨论及展望 |
| 4.1 实验结论 |
| 4.2 讨论和展望 |
| 4.3 科学意义 |
| 全文总结 |
| 1.1 研究总结 |
| 1.2 研究创新性 |
| 1.3 科学意义 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 |
（5）miR-669b-3p调控IDO抑制CD4+T细胞增殖的体外研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 1 对象与方法 |
| 2 结果 |
| 3.讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研说明 |
| 综述 mi RNA在 T细胞的发育及T细胞介导的急性移植物抗宿主病中的作用 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）ADSCs来源的Exosomes提高脂肪移植存活率的研究（论文提纲范文）
| 英文缩写词汇表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 外泌体的提取及鉴定 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂及药品 |
| 1.3 主要仪器及器械 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 1.5 各种溶液的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 脂肪干细胞获取、体外培养及鉴定 |
| 2.2 脂肪干细胞来源外泌体的提取、鉴别及分析 |
| 3 实验结果与分析 |
| 3.1 人脂肪来源干细胞 |
| 3.2 人脂肪来源干细胞表面标记物鉴定 |
| 3.3 hADSCs的去血清培养 |
| 3.4 hADSCs来源exosomes提取 |
| 3.5 ADSCs来源的exosomes电镜检测 |
| 3.6 hADSCs来源的exosomes免疫印迹试验(Western Blot) |
| 3.7 动态光散射检测(Dynamic Light Scattering,DLS) |
| 3.8 Exosomes浓度粒径(NTA)检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 ADSCs细胞提取鉴定 |
| 4.2 人脂肪干细胞来源外泌体提取鉴定 |
| 5 结论 |
| 第二部分 ADSCs来源Exosomes提高脂肪移植存活率的体内研究 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验耗材 |
| 2 方法 |
| 2.1 获取脂肪移植样品 |
| 2.2 创建脂肪移植模型 |
| 2.3 取出移植物并进行测量 |
| 2.4 石蜡切片的制备 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 Masson Trichrome(MT)染色分析 |
| 2.7 免疫组化检测 |
| 2.8 免疫组化VEGF检测 |
| 2.9 资料及数据统计分析 |
| 3 实验结果与分析 |
| 3.1 脂肪移植模型的建立 |
| 3.2 移植脂肪组织取出观察比较 |
| 3.3 移植脂肪组织颗粒长径(L)的测量及比较 |
| 3.4 移植脂肪组织颗粒的重量测量及对比 |
| 3.5 移植脂肪颗粒HE染色 |
| 3.6 Masson染色分析 |
| 3.7 VEGF组化显色分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 脂肪移植模型及标本获取后的对比 |
| 4.2 脂肪移植颗粒标本的处理对比 |
| 5 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）p53N236S对端粒功能异常和环境毒性因子所致衰老的调控作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文单词缩写 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 衰老相关的生物学特征 |
| 1.1.1 衰老与基因组的不稳定 |
| 1.1.2 衰老与端粒(端粒酶)的功能紊乱 |
| 1.1.2.1 端粒的结构 |
| 1.1.2.2 端粒酶及其作用机制 |
| 1.1.3 衰老与线粒体的功能紊乱 |
| 1.1.4 衰老与细胞周期的紊乱 |
| 1.1.5 衰老与干细胞库容的衰竭 |
| 1.1.6 衰老与衰老相关的分泌表型 |
| 1.2 癌症的发生现状 |
| 1.3 p53的研究简状 |
| 1.4 衰老和肿瘤 |
| 1.4.1 NF-κB家族与衰老和肿瘤的关系 |
| 1.4.2 AMPK/mTOR信号通路与衰老和肿瘤的关系 |
| 1.4.3 抑癌基因/癌基因与衰老和肿瘤的关系 |
| 1.4.4 常见衰老和肿瘤的小鼠模型 |
| 1.5 多囊肾的研究进展 |
| 1.6 本课题的研究内容和意义 |
| 1.6.1 早老综合征与p53N236S的结合 |
| 1.6.2 本课题的意义 |
| 第二章 p53S 对 Werner 综合征小鼠衰老进程的调控作用 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验主要仪器 |
| 2.1.2 mTerc~(-/-)Wrn~(-/-)p53~(S/S)(TM)小鼠的基因型鉴定 |
| 2.1.3 小鼠生存曲线的绘制 |
| 2.1.4 micro-CT检测小鼠的骨组织密度 |
| 2.1.5 小鼠组织的取样及保存 |
| 2.1.6 H&E染色 |
| 2.1.7 衰老染色 |
| 2.1.8 BrdU(5-bromo-2-deoxyuridine)实验 |
| 2.1.9 IHC实验 |
| 2.1.10 实时荧光定量PCR实验(RT-PCR) |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 p53S对Wrn综合征小鼠寿命的调控作用 |
| 2.2.2 p53S对Wrn综合征小鼠体内组织器官衰老相关退行性变化的影响 |
| 2.2.3 在G1-G3TM小鼠中肿瘤和多囊肾伴随发生 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 细胞水平分析p53S调控Wrn综合征衰老的分子通路 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验主要仪器 |
| 3.1.2 小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryo fibroblasts,MEFs)的制备 |
| 3.1.3 MEFs的培养 |
| 3.1.4 Western Blot |
| 3.1.5 流式细胞技术(Flow Cytometry, FCM) |
| 3.1.6 免疫荧光(Immunofluorescence,IF)技术 |
| 3.1.7 核型分析 |
| 3.1.8 荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)实验 |
| 3.1.9 细胞增殖实验(Edu实验) |
| 3.1.10 TRF-Southern实验 |
| 3.1.11 移植瘤实验 |
| 3.1.12 细胞培养和H_2O_2刺激 |
| 3.1.13 衰老细胞相关特异性β-半乳糖苷酶(Senescence associated β- galactosidase,SA-β-gal)染色 |
| 3.1.14 RNA-seq测序样本准备 |
| 3.1.15 生物信息学分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 p53S通过调控细胞周期,细胞增殖等功能来干预Wrn综合征诱导的衰老表型 |
| 3.2.2 p53S通过调控端粒长度来干预Wrn综合征衰老表型 |
| 3.2.3 TM细胞的成瘤性 |
| 3.2.4 p53S通过调控DNA损伤信号和周期通路来影响Wrn综合征的衰老进程 |
| 3.2.5 p53S抵御环境中过氧化物所诱导的细胞衰老 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 总结与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录A (攻读学位其间发表论文目录) |
（8）脂肪间充质干细胞外泌体缓解阿霉素所致急性心肌损伤的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 小鼠脂肪干细胞的分离与干性鉴定 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 结论 |
| 第二部分 外泌体的分离纯化与表型鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 结论 |
| 第三部分 脂肪干细胞外泌体对阿霉素诱导的急性小鼠心脏损伤保护作用的动物实验 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 结论 |
| 第四部分 脂肪干细胞外泌体对阿霉素诱导的急性心肌细胞(H9C2)损伤保护作用的细胞实验 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 结论 |
| 研究结论与不足 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录 A 中英文术语和缩略语对照表 |
| 附录 B 实验设计流程图 |
| 附录 C 个人简历及论文发表 |
| 附录 D 文献综述 |
| 参考文献 |
（9）干细胞制剂车间设计探讨（论文提纲范文）
| 1 干细胞制剂的生产工艺流程 |
| 1.1 原材料的采集 |
| 1.2 原材料的运输 |
| 1.3 原材料的接收 |
| 1.4 干细胞的培养制备 |
| 1.5 干细胞的检测和质量控制 |
| 1.6 干细胞的储存 |
| 1.7 干细胞的复苏 |
| 1.8 不合格产品的处理 |
| 2 干细胞制剂的生产车间设计分析 |
| 2.1 车间选址和外环境设计 |
| 2.2 车间内环境设计 |
| 2.2.1 工艺平面分析 |
| 2.2.2 空调净化分析 |
| 2.2.3 电气系统分析 |
| 2.2.4 给排水系统分析 |
| 2.2.5 建筑装修分析 |
| 3 结论 |
（10）胆固醇代谢与造血干细胞的增殖分化和短时高温致红细胞损伤的探讨（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一部分 细胞胆固醇代谢与造血干细胞的增殖分化研究 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 问题的提出及国内外研究现状 |
| 1.2 本研究的目的、意义及主要内容 |
| 第二章 EML细胞sca1high、sca1inter、sca1low亚群中NPC1、NPC2基因的表达 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞模型构建 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 沉默NPC1、NPC2对EML细胞增殖分化和干性标志物表达的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 第五章 沉默NPC1、NPC2基因能够抑制EML细胞c-kit的磷酸化 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.5 讨论 |
| 第六章 不同处理对EML细胞c-kit磷酸化的影响 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.5 讨论 |
| 第二部分 短时高温致红细胞损伤的机制研究 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 第三章 结果 |
| 第四章 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 细胞膜脂质筏与造血干细胞的功能调节 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
四、造血干细胞移植中无菌洁净外环境的监控（论文参考文献）
- [1]人脐带间充质干细胞联合改良视神经管减压术治疗外伤性视神经病变的临床转化研究[D]. 李佳. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [2]类外泌体纳米囊泡与外泌体在提高脂肪移植存活率的比较研究[D]. 陈爱贞. 福建医科大学, 2021(02)
- [3]微流控制备海藻酸钠-肠道类器官微球治疗炎症性肠病的研究[D]. 甄爽. 南京大学, 2020(09)
- [4]前列腺上皮组织特征维持及分子调控机制的研究[D]. 王雪. 上海交通大学, 2019(06)
- [5]miR-669b-3p调控IDO抑制CD4+T细胞增殖的体外研究[D]. 王曦. 天津医科大学, 2019(02)
- [6]ADSCs来源的Exosomes提高脂肪移植存活率的研究[D]. 李向禹. 福建医科大学, 2019(07)
- [7]p53N236S对端粒功能异常和环境毒性因子所致衰老的调控作用[D]. 李海丽. 昆明理工大学, 2019(06)
- [8]脂肪间充质干细胞外泌体缓解阿霉素所致急性心肌损伤的研究[D]. 夏海兵. 蚌埠医学院, 2019(01)
- [9]干细胞制剂车间设计探讨[J]. 宋杨,杨珺. 中国医药生物技术, 2018(04)
- [10]胆固醇代谢与造血干细胞的增殖分化和短时高温致红细胞损伤的探讨[D]. 李晶. 第三军医大学, 2017(04)